Identificação de proteínas plasmáticas e de componentes proteicos e lipídicos na parede celular de dois isolados geneticamente distintos de Paracoccidioides brasiliensis
Data
2013
Autores
Longo, Larissa Valle Guilhen 
Orientadores
Puccia, Rosana
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Os componentes da parede celular sao os principais responsaveis pela interacao fungo-hospedeiro. A tese apresentada mostra a caracterizacao proteica e lipidica da parede celular dos isolados Pb3 e Pb18 de P. brasiliensis, que pertencem a grupos filogeneticos diferentes e provocam um perfil distinto de infeccao em modelo murino. Proteinas plasmaticas aderidas a parede celular do isolado Pb3, menos virulento,tambem foram identificadas, sendo que aquelas relacionadas com transporte, ativacao/regulacao do sistema complemento e coagulacao foram as mais abundantes. A interacao de muitas delas com componentes fungicos, como por exemplo clusterina, hemopexina, transtiretina, ceruloplasmina, alfa-1-antitripsina, apolipoproteina A-1 e apolipoproteina B-100, foi relatada pela primeira vez. A incubacao de leveduras com plasma aumentou sua internalizacao em ensaio de fagocitose in vitro, ressaltando a importancia do plasma na relacao patogeno-hospedeiro. A analise dos componentes lipidicos da parede celular foi realizada em leveduras de Pb3 e Pb18 cultivadas na presenca ou ausencia de plasma humano. Foram identificadas 49 (Pb3) e 38 (Pb18)especies de fosfolipideos de diversas classes. Os acidos graxos C18:1 e C18:2 foram mais abundantes, e C18:2 predominou em Pb18 em relacao a Pb3. Brassicasterol foi o esterol predominante em ambos os isolados, e a presenca de plasma no meio de cultura aumentou sua abundancia, principalmente em Pb3. Hex-C18:0-OH/dC19:2-Cer foi a principal monohexosilceramida identificada em ambos os isolados. A composicao proteica da parede celular de Pb3 e Pb18 em ambas as fases morfologicas foi analisada por cromatografia liquida acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS) e 208 (Pb3 micelio), 164 (Pb3 levedura), 148 (Pb18 micelio), e 239 (Pb18 levedura) proteinas foram identificadas e classificadas em categorias funcionais. Entre as 132 proteinas identificadas somente na fase leveduriforme, 92 tambem foram exclusivas de Pb18, muitas delas com potencial papel na interacao parasita-hospedeiro. 80% das proteinas foram classificadas como secretadas e 60% apresentaram ortologos em vesiculas extracelulares de fungos, sugerindo a participacao dessas estruturas na composicao da parede celular. Adicionalmente, uma mini-revisao e um capitulo de livro foram escritos agrupando as informacoes existentes sobre a parede celular de P. brasiliensis. Acreditamos que esta analise comparativa entre dois isolados de P. brasiliensis com perfis de virulencia distintos ajudara a esclarecer o papel das proteinas plasmaticas e dos componentes proteicos e lipidicos da parede celular na interacao fungo-hospedeiro
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Citação
LONGO, Larissa Valle Guilhen. Identificação de proteínas plasmáticas e de componentes proteicos e lipídicos na parede celular de dois isolados geneticamente distintos de Paracoccidioides brasiliensis. 2013. 50 f. Dissertação (Doutorado em Microbiologia e Imunologia) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2013.