Estudo do efeito imunomodulador de vesículas isoladas durante a infecção por trypanosoma cruzi na célula hospedeira
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Data
2018-06-28
Autores
Andrade, Andre Cronemberger [UNIFESP]
Orientadores
Torrecilhas, Ana Claudia Trocoli [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
The extracellular vesicles shed by trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi
have the ability to interact, increase tissue invasion and modulate the host
innate response via TLR2. In T. cruzi infection, induction of the Th1-type
response is crucial for promoting protection against the parasite. The aim of the
study was to investigate the role of these vesicles as immunomodulatory agents
that act during the initial phase of host immune response. THP-1 cells were
differentiated into macrophages and infected with T. cruzi. Infected cell culture
supernatants of macrophages were collected by ultracentrifugation at different
times after infection and the released material was analyzed by NTA. Increased
numbers of EVs ranging from 50 to 300 nm were found in the macrophages
supernatant 24 hours post infection. Large number of EV from infected
compared to non-infected macrophages was observed by scanning electron
microscopy. Released EVs contained CD63, CD9, and MHC class II revealing
their exosomal and macrophagic origin. No parasite antigens were detected. In
addition, the ability of these EVs to translocate NF-kB by TLR2 receptors was
evidenced. As a consequence of this interaction, the expression of these
receptors is increased. EVs were also able to stimulate the production of
proinflammatory cytokines (TNF-α, IL-6 and IL-1β). In this way we observed the
potential of EVs derived from T. cruzi infection in the maintenance of the
inflammatory response and increase the number of parasites and infected cells
in the host.
As vesículas extracelulares (EVs) liberadas por formas tripomastigotas do Trypanosoma cruzi tem a capacidade de interagir, aumentar a invasão tecidual e modular a resposta inata via TLR2 na célula hospedeira. Durante a infecção por T. cruzi, a indução de uma resposta do tipo Th1 é crucial para promoção de proteção contra o parasito. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel dessas EVs como agentes imunomoduladores que atuam durante a fase inicial da resposta imune do hospedeiro. Para isso, células THP-1 foram diferenciadas em macrófagos e infectadas ou não com T. cruzi. Os sobrenadantes de cultura de macrófagos foram ultracentrifugados para isolar as EVs. Observou-se que os tamanhos das EVs variam de 50 a 300 nm e a concentração das partículas aumenta após 24 horas de infecção. EVs derivadas dos macrófagos expressam CD63, CD9 e MHC classe II, revelando sua origem exossomal e macrofágica e não foram detectados antígenos presentes da superfície do parasita. Na microscopia eletrônica de varredura (MEV) das células infectadas e não infectadas observamos aumento na liberação das EVs na superfície das células infectadas. Além disso, foi evidenciada a capacidade destas EVs em translocar NF-kB pelos receptores TLR2. Como consequência dessa interação a expressão dos receptores foi aumentada. Ainda, as EVs foram capazes de estimular a produção de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-6 e IL1β). Desta forma observamos o potencial das EVs derivadas da infecção pelo T. cruzi na manutenção da resposta inflamatória e aumento no número de parasitas e células infectadas no hospedeiro.
As vesículas extracelulares (EVs) liberadas por formas tripomastigotas do Trypanosoma cruzi tem a capacidade de interagir, aumentar a invasão tecidual e modular a resposta inata via TLR2 na célula hospedeira. Durante a infecção por T. cruzi, a indução de uma resposta do tipo Th1 é crucial para promoção de proteção contra o parasito. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel dessas EVs como agentes imunomoduladores que atuam durante a fase inicial da resposta imune do hospedeiro. Para isso, células THP-1 foram diferenciadas em macrófagos e infectadas ou não com T. cruzi. Os sobrenadantes de cultura de macrófagos foram ultracentrifugados para isolar as EVs. Observou-se que os tamanhos das EVs variam de 50 a 300 nm e a concentração das partículas aumenta após 24 horas de infecção. EVs derivadas dos macrófagos expressam CD63, CD9 e MHC classe II, revelando sua origem exossomal e macrofágica e não foram detectados antígenos presentes da superfície do parasita. Na microscopia eletrônica de varredura (MEV) das células infectadas e não infectadas observamos aumento na liberação das EVs na superfície das células infectadas. Além disso, foi evidenciada a capacidade destas EVs em translocar NF-kB pelos receptores TLR2. Como consequência dessa interação a expressão dos receptores foi aumentada. Ainda, as EVs foram capazes de estimular a produção de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-6 e IL1β). Desta forma observamos o potencial das EVs derivadas da infecção pelo T. cruzi na manutenção da resposta inflamatória e aumento no número de parasitas e células infectadas no hospedeiro.