Navegando por Palavras-chave "RNA Mensageiro"
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- ItemSomente MetadadadosAnalise da expressao diferencial de genes em fibroblastos de pacientes com esclerose sistemica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Fuzii, Helen Thais [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosAnálise semiquantitativa da expressão do RNA mensageiro das citocinas IL-2, IL-5, TNF-alfa e INF-y em epiderme de pacientes com lúpus eritematoso sistêmico em atividade(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Carneiro, José Ronaldo Matos [UNIFESP]; Andrade, Luiz Eduardo Coelho [UNIFESP]Objetivos: Analisar semiquantitativamente a expressão dos genes das interleucinas (IL) IL-2, IL-5, TNF-a e IFN-y em amostras de epiderme de lesões cutâneas agudas e discóides e de pele aparentemente não comprometida de pacientes com Lúpus Eritematoso Sisêmico (LES) em atividade. Pacientes e métodos: Foram estudados doze controles normais e vinte e um pacientes com LES (segundo critérios do Colégio Americano de Reumatologia) em atividade, sendo onze com lesão cutânea aguda e dez com lesão discóide. A media de idade dos pacientes com LES com lesão aguda (32,18 ± 9,17 anos) não diferiu em relação aos controles normais (36,8 ± 7,97 anos), mas foi significativamente menor que a dos pacientes com lesão discóide (44,20 ± 4,24 anos). Os pacientes com LES foram submetidos a duas biópsias de pele tipo "punch", uma em local com lesão (face) e outra em local aparentemente sem lesão (antebraço). 0 substrato dos controles sadios foi proveniente de sobras de pele oriunda da região facial após reparos cirúrgicos. A análise da expressão gênica das interleucinas IL-2, IL-5, TNF-a e IFN-? foi realizada através do método da RT-PCR semiquantitativa em tempo real. Após as reações, foi feito 0 cálculo do nível de expressão gênica de cada citocina utilizando-se 0 método da quantificação relativa. Resultados: Entre as 42 amostras com LES estudadas, 19 (45,2%) apresentaram indução (valor de R>1) de pelo menos uma citocina. Destas, 10 espécimes de epiderme pertenciam a pacientes com LES com lesão aguda e 9 amostras eram procedentes de doentes com lesão discóide Três amostras apresentaram indução concomitante de duas interleunas. A IL-5 e 0 IFN-y foram as citocinas que estiveram induzidas em maior numero de amostras, sendo observadas' oito vezes cada uma, enquanto a IL-2 e 0 TNF-a estiveram induzidas em apenas duas e três amostras respectivamente. Das oito amostras induzidas para a IFN-y, sete eram oriundas de pele lesada e uma de pele aparentemente sã, tendo sido esta diferença marginalmente significante (p=0,07). Pelo menos uma citocina esteve induzida em treze das vinte e uma amostras de pele lesada e em cinco das vinte e uma amostras de pele aparentemente sa. A dose media de prednisona entre os pacientes com amostras de IFN-y reprimido (17mg/dia) foi maior que aquela das amostras (12,5mg/dia) induzidas. Tal diferença não foi identificada para as demais citocinas estudadas. Não foi observado relação entre a escore do SLEDAI e 0 comportamento da expressão gênica nas citocinas pesquisadas. Conclusões: 0 perfil de expressão gênica de queratinócitos da epiderme de pacientes com LES foi consideravelmente heterogêneo e com grande amplitude na expressão relativa de todas as citocinas tanto em pele envolvida como aparentemente sã. Um maior número de amostras de pele lesada mostrou indução de genes de citocinas em relação às amostras de pele aparentemente sã. A expressiva heterogeneidade no perfil de expressão gênica e compatível com a complexidade dos componentes participantes da fisiopatologia do envolvimento da pele nesta doença e com a possível influência da terapêutica. O papel de cada um desses fatores deverá ser elucidado por estudos futuros.#Lúpus Eritemat
- ItemSomente MetadadadosAvaliacao da expressao de Fas e Fas soluvel em leucocitos de pacientes com Doenca Renal Cronica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Gonzales, Suellen Aparecida [UNIFESP]Introdução: A Doenca Renal Cronica (DRC) esta associada com alteracoes complexas no sistema imune, contribuindo para alta prevalencia de infeccoes e doenca cardiovascular. O sistema FAS/FAS ligante e uma via sinalizadora importante de apoptose em varios tipos celulares. A forma serica de Faz soluvel (sFas) esta aumentada no soro de pacientes com DRC e tambem esta associada com DCV nesses pacientes. Objetivo: Investigar se a expressao de FASmRNA regula a expressao de sFasmRNA e sua respectiva concentracao serica, em leucocitos de pacientes com DRC pre-dialise. Materiais e metodos: Foram avaliados 56 pacientes com DRC pre-dialise e 13 individuos saudaveis, com idade entre 18 e 85 anos. A deteccao da expressao de sFasmRNA e FASmRNA foi realizada por Real Time (RT-PCR) e sFas foi avaliado por metodo imunoenzimatico (ELISA). Resultados: Os pacientes com DRC, quando comparados aos controles, apresentaram maior concentracao serica de sFas (2858±1246 vs 2130±771, p=0,01) e maior expressao de sFasmRNA (4,22±1,76 vs 2,55±0,85, p=0,0001). Nao houve diferenca na expressao de FASmRNA entre os grupos (13,30±30,31 vs 8,85±13,41, p=0,40). O nivel serico de sFas apresentou correlacao positiva com a expressao de sFasmRNA (r=0,32 e p=0,007) e nao se correlacionou com a expressao de FASmRNA (r= -0,18 e p=0,10). Observamos correlacao negativa entre a expressao de sFasmRNA e expressao de FASmRNA (r= -0,49 e p<0,001). Conclusao: Estes resultados sugerem que apesar do sFas ser um osplicingo alternativo do FAS, a sua expressao e sintese sao expressos por vias distintas da expressao do FAS. Alem disso, e possivel que a expressao e sintese de sFas tenham a finalidade de equilibrar o desbalanco da morte celular via FAS, sinalizada por fatores pro-apoptoticos da DRC. Entretanto, mais estudos devem ser conduzidos para investigar o papel do sFas como protetor de morte celular na DRC
- ItemSomente MetadadadosIdentificacao de diferentes isoformas genicas geradas por splicing alternativo em tecidos tiroidianos(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2005) Guimaraes, Gustavo Stuani [UNIFESP]
- ItemSomente MetadadadosMecanismos de regulação da expressão de RNAm de VDR em células HC11 parentais ou transformadas com Hras(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2001) Bortman, Patricia [UNIFESP]; Brentani, Maria Mitzi [UNIFESP]Objetivo: A linhagem epitelial mamaria murina, HC11, apresenta maior conteudo de RNAm de receptor de vitamina D (VDR) que celulas transformadas com Ha-ras (HC11 ras). Quando HC11 e tratada com 1,25(OH)2D3 (VD), ocorre diminuicao de proliferacao, nao observada em HC11 ras. E necessario, portanto, esclarecer por que as celulas HC11 ras expressam menos VDR e se este e funcional. Metodos e Resultados: 0 ensaio de Run On foi utilizado para esclarecer se houve transcricao diferenciada do gene. Ambas as linhagens apresentaram a mesma taxa de sintese de RNAm de VDR. Atraves de tratamento com actinomicina D, um inibidor de transcricao genica, foi possivel calcular a meia-vida do RNAm de VDR. A linhagem HC11 ras apresentou degradacao maior do RNAm de VDR quando comparada com a linhagem parental (HC11). Para verificar a funcionalidade de VDR estudamos a expressao do RNAm de 25(OH)D3-24 hidroxilase, gene alvo que apresenta um elemento de resposta (VDRE) a vitamina D em seu promotor. Em celulas HC11 parentais, nao observamos a expressao de RNAm de 25(OH)D3-24 hidroxilase por Northern Blot, o qual nao foi indutivel por VD. Por outro lado, nas celulas HC11 ras ocorre expressao constitutiva deste gene, o qual tambem nao e induzido pela VD nestas celulas. 0 bloqueio da via de Ras, obtido apos tratamento com o inibidor de farnesil-transferase, levou as celulas HC11 ras a expressarem niveis similares de RNAm de VDR aqueles mostrados pelas celulas HC11. Conclusoes: A expressao diferencial de RNAm de VDR entre celulas HC11 parentais ou transformadas com Ha-ras nao resulta de diferencas na taxa de sintese mas sim do efeito de uma maior degradacao do RNAm de VDR. A menor expressao de RNAm de VDR encontrada em celulas HC11 transformadas com Ha-ras em relacao as celulas parentais parece estar relacionada a presenca de Ras ativado, uma vez que a inibicao desta via, reverte os niveis de RNAm de VDR aos das celulas parentais. Em celulas transformadas com o oncogene Ha-ras houve expressao constitutiva do gene da 25(OH)D3-24 hidroxilase, indicando uma possivel inativacao metabolica da vitamina D endogena nestas celulas, sugerindo a inexistencia de uma via degradativa da VD em celulas mamarias murinas normais
- ItemSomente MetadadadosProcessamento e expressao dos produtos genicos do receptor de cininas(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2003) Franca, Camilla Estevao de [UNIFESP]
- ItemAcesso aberto (Open Access)Quantificação do RNA mensageiro de tiroglobulina, do receptor do hormônio tiroestimulante e de calcitonina obtidos do sangue periférico de uma população com função tiroidiana normal(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2014-03-31) Melo, Maria Clara de Carvalho [UNIFESP]; Maciel, Rui Monteiro de Barros [UNIFESP]O câncer de tiroide é a neoplasia endócrina mais comum. No seguimento do carcinoma diferenciado de tiroide (CDT), alguns grupos têm buscado novas ferramentas moleculares, por exemplo, a utilização do mRNA-TG e TSHR como alternativa as dificuldades de dosagem sérica de tiroglobulina (sTg) na presença de anticorpo anti-Tg circulante em até 25% dos pacientes. No caso do carcinoma medular de tiroide (CMT), estudos apontam que alterações na expressão do gene da calcitonina (CALCA) antecedem o aparecimento de tumores em ratos, sugerindo que elevações na quantificação do mRNA-CALCA no ser humano poderia ser um marcador mais precoce de doença.Neste trabalho quantificamos a expressão do mRNA-TG, TSHR e CALCA circulante e correlacionamos essa medida com a dosagem de sérica de Tg, TSH e calcitonina (sCT) numa população controle sem evidência de doença tiroidiana com intuito de estabelecer valor de referência normal basal. Estudamos 66 voluntários provenientes da Universidade Federal de São Paulo, sendo 38 mulheres e 28 homens. TSH, sTg, anti-Tg e sCT foram dosados por métodos imunofluorométricos previamente desenvolvidos em nosso laboratório. T4L e anti-TPO foram dosados por eletroquimioluminescência utilizando kits comercias. Avaliamos a extração de RNA de sangue periférico por 4 métodos. A quantificação foi realizada através da curva padrão absoluta (cDNA plasmidial) para mRNA-TG e TSHR e de forma relativa para CALCA. Entre os métodos, Trizol LS apresentou melhor rendimento de RNA total. Voluntários da população controle apresentaram média de TSH de 1,7 ± 0,9UI/mL (0,4 - 4,41), T4 livre de 1,23 ± 0,14 ng/dL (0,87 - 1,51) e de sTg de 14,62 ±11,5 ng/mL (0,5 – 61,7). Anti-Tg e anti-TPO foram todos negativos. A média do mRNA-TG foi de 0,45 ± 0,20 pg mRNA-TG/µL (0,193 a 1,023) e TSHR de 0,079 ± 0,01 µg mRNA-TSHR/µL (0,0381 a 0,123). Doze voluntários apresentaram mRNA CALCA indetectável e a média da sCt destes voluntários foi de 4,95 ± 3,79 pg/mL (1 a 12,8). Dos 7 detectáveis, os valores do mRNA-CALCA variaram de zero a 1,23 e sCT de 1 a 10,4 ± 4,91 pg/mL. Não observamos correlação direta entre a medida sérica das proteínas basais (sTg, TSH e sCT) e seus respectivos transcritos.Tendo em vista que quantificamos mRNA-TG e TSHR por RT-qPCR em sangue periférico de uma população controle, esta metodologia não deve ser utilizada como biomarcador específico no diagnóstico e seguimento de câncer de tiroide. Portanto, antevemos a necessidade de mais estudos de desenvolvimento de curvas de quantificação de mRNA circulante com objetivo de obter valores de referência para grupos de indivíduos sem e com doença tiroidiana quer seja autoimune ou neoplásica. Apesar de não ter sido mostrado correlação entre mRNA-CALCA e sCT, a quantificação de mRNA-CALCA circulante em sangue periférico pode refinar o seguimento de pacientes com CMT.