Mecanismos de regulação da expressão de RNAm de VDR em células HC11 parentais ou transformadas com Hras
Data
2001
Autores
Bortman, Patricia 
Orientadores
Brentani, Maria Mitzi
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Objetivo: A linhagem epitelial mamaria murina, HC11, apresenta maior conteudo de RNAm de receptor de vitamina D (VDR) que celulas transformadas com Ha-ras (HC11 ras). Quando HC11 e tratada com 1,25(OH)2D3 (VD), ocorre diminuicao de proliferacao, nao observada em HC11 ras. E necessario, portanto, esclarecer por que as celulas HC11 ras expressam menos VDR e se este e funcional. Metodos e Resultados: 0 ensaio de Run On foi utilizado para esclarecer se houve transcricao diferenciada do gene. Ambas as linhagens apresentaram a mesma taxa de sintese de RNAm de VDR. Atraves de tratamento com actinomicina D, um inibidor de transcricao genica, foi possivel calcular a meia-vida do RNAm de VDR. A linhagem HC11 ras apresentou degradacao maior do RNAm de VDR quando comparada com a linhagem parental (HC11). Para verificar a funcionalidade de VDR estudamos a expressao do RNAm de 25(OH)D3-24 hidroxilase, gene alvo que apresenta um elemento de resposta (VDRE) a vitamina D em seu promotor. Em celulas HC11 parentais, nao observamos a expressao de RNAm de 25(OH)D3-24 hidroxilase por Northern Blot, o qual nao foi indutivel por VD. Por outro lado, nas celulas HC11 ras ocorre expressao constitutiva deste gene, o qual tambem nao e induzido pela VD nestas celulas. 0 bloqueio da via de Ras, obtido apos tratamento com o inibidor de farnesil-transferase, levou as celulas HC11 ras a expressarem niveis similares de RNAm de VDR aqueles mostrados pelas celulas HC11. Conclusoes: A expressao diferencial de RNAm de VDR entre celulas HC11 parentais ou transformadas com Ha-ras nao resulta de diferencas na taxa de sintese mas sim do efeito de uma maior degradacao do RNAm de VDR. A menor expressao de RNAm de VDR encontrada em celulas HC11 transformadas com Ha-ras em relacao as celulas parentais parece estar relacionada a presenca de Ras ativado, uma vez que a inibicao desta via, reverte os niveis de RNAm de VDR aos das celulas parentais. Em celulas transformadas com o oncogene Ha-ras houve expressao constitutiva do gene da 25(OH)D3-24 hidroxilase, indicando uma possivel inativacao metabolica da vitamina D endogena nestas celulas, sugerindo a inexistencia de uma via degradativa da VD em celulas mamarias murinas normais
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2001. 53 p. ilus.