Avaliação comparativa de distintos métodos fenotípicos para a detecção de cepas produtoras de carbapenemases
Data
2016-08-22
Autores
Moura, Jhonatha Rodrigo Cordeiro de 
Orientadores
Gales, Ana Cristina
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
During the last decade, it has been observed the rapid development of antimicrobial resistance among clinical isolates of Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., and Acinetobacter spp. worldwide. The production of ?-lactamases is the most important mechanism of resistance in Gram-negative bacilli, being the carbapenemases the most versatile mechanisms of carbapenem resistance. These enzymes have broad spectrum of activity, making difficult the selection of adequate antimicrobial therapy. Furthermore, genes encoding ?-lactamases are highly transmissible. Objective: This study aimed to evaluate the performance of five phenotypic methods for detection of carbapenemase-producing Gram-negative bacilli. Methods: Strains previously characterized were pulled out from the LEMC/ALERTA bank of microorganisms. The confirmation of carbapenemase production was performed by ertapenem hydrolysis using MALDI-TOF MS. The phenotypic tests evaluated were: Hodge modified test, ANVISA Technical Note 01/2013, Carba NP and its modification, CarbAcineto NP, Blue-Carba, CarbapenemBac, and CarbapenemBac Metallo. Results: Although the specificity rates of the ANVISA Technical Note and MHT were 100%, the Technical Note (97.3%) showed higher sensitivity rate than that of the MHT (88.5%) for carbapenemase detection. The Carba NP, Blue-Carba and CarbapenemBac tests showed high sensitivity and specificity rates (100%) when colonies subcultured on Mueller-Hinton agar were tested. The sensitivity and specificity rates of Carba NP (98.6 and 100%), BlueCarba (97.1 and 91%) and CarbapenemBac (96.5 and 100%) were slightly lower when bacterial colonies were obtained from blood agar. On the other hand, the sensitivity rates of Carba NP (71.1%) and Blue-carba (68.9%) were unacceptable when colonies obtained from MacConkey agar were evaluated. However, the sensitivity of CarbapenemBac (97.3% sensitivity) was less affected by the MacConkey agar. Conclusions: We conclude that 1. The colorimetric methods showed excellent sensitivity and specificity for carbapenemases detection when bacterial colonies were subcultured on Mueller-Hinton agar or blood agar; 2. Bacteria colonies subcultured on MacConkey agar must not be utilized for colorimetric tests, except for CarbapenemBac, which showed a good sensitivity and specificity rates for detection of carbapenemases independently of the culture medium used to subculture the bacterial isolate.
Ao longo da ultima década, tem sido observada uma rápida evolução da resistência aos antimicrobianos entre isolados clínicos de Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., e Acinetobacter spp., em todo mundo. A produção de ?-lactamases é o mecanismo de resistência mais importante em bacilos gram-negativos, sendo as carbapenemases a família mais versátil destas enzimas. Estas enzimas possuem amplo espectro de atividade o que dificulta a seleção da terapia antimicrobiana. Além disto, os genes que as codificam, de modo geral, são altamente transmissíveis. Objetivo: Esse trabalho teve como objetivo avaliar comparativamente cinco metodologias fenotípicas para a detecção de carbapenemases em bacilos gram-negativos. Métodos: Foram selecionadas amostras controles da coleção de micro-organismos do LEMC/Alerta. A confirmação da produção ou não de carbapenemases foi realizada pela hidrólise do ertapenem no MALDI-TOF MS. Os testes fenotípicos avaliados foram: o teste de Hodge modificado, a Nota Técnica 01/2013 da ANVISA, o Carba NP e a sua adaptação, CarbAcineto NP, o Blue-Carba, o CarbapenemBac e o CarbapenemBac Metalo. Resultados: Embora a especificidade para o MHT e a Nota Técnica tenha sido 100%, a Nota Técnica (97,3%) foi mais sensível na detecção de carbapenemases que o MHT (88,5%). Os testes Carba NP, Blue-Carba e CarbapenemBac apresentaram sensibilidade e especificidade de 100%, quando colônias subcultivadas em ágar Müeller-Hinton foram testadas. A sensibilidade e a especificidade do Carba NP (98,6 e 100%), do Blue-Carba (97,1 e 91%) e do CarbapenemBac (100 e 96,5%) foram discretamente inferiores quando as colônias bacterianas foram obtidas do ágar sangue. Por outro lado, a sensibilidade do Carba NP (71,1%) e do Blue-Carba (68,9%) foram inaceitáveis quando as colônias foram obtidas do ágar MacConkey. Já a sensibilidade do CarbapenemBac (97,3%) foi menos afetada nesta situação. Conclusão: Podemos concluir que: 1. Os métodos colorimétricos apresentaram excelente sensibilidade e especificidade para detecção de carbapenemases, quando as colônias bacterianas foram subcultivadas em ágar Müeller-Hinton ou ágar sangue; 2. Colônias subcultivadas em ágar MacConkey não devem ser utilizadas para realização de testes colorimétricos, com exceção do CarbapenemBac que apresentou boa sensibilidade e especificidade para a detecção de carbapenemases independente do meio de cultura utilizado para subcultivo do isolado a ser testado.
Ao longo da ultima década, tem sido observada uma rápida evolução da resistência aos antimicrobianos entre isolados clínicos de Enterobacteriaceae, Pseudomonas spp., e Acinetobacter spp., em todo mundo. A produção de ?-lactamases é o mecanismo de resistência mais importante em bacilos gram-negativos, sendo as carbapenemases a família mais versátil destas enzimas. Estas enzimas possuem amplo espectro de atividade o que dificulta a seleção da terapia antimicrobiana. Além disto, os genes que as codificam, de modo geral, são altamente transmissíveis. Objetivo: Esse trabalho teve como objetivo avaliar comparativamente cinco metodologias fenotípicas para a detecção de carbapenemases em bacilos gram-negativos. Métodos: Foram selecionadas amostras controles da coleção de micro-organismos do LEMC/Alerta. A confirmação da produção ou não de carbapenemases foi realizada pela hidrólise do ertapenem no MALDI-TOF MS. Os testes fenotípicos avaliados foram: o teste de Hodge modificado, a Nota Técnica 01/2013 da ANVISA, o Carba NP e a sua adaptação, CarbAcineto NP, o Blue-Carba, o CarbapenemBac e o CarbapenemBac Metalo. Resultados: Embora a especificidade para o MHT e a Nota Técnica tenha sido 100%, a Nota Técnica (97,3%) foi mais sensível na detecção de carbapenemases que o MHT (88,5%). Os testes Carba NP, Blue-Carba e CarbapenemBac apresentaram sensibilidade e especificidade de 100%, quando colônias subcultivadas em ágar Müeller-Hinton foram testadas. A sensibilidade e a especificidade do Carba NP (98,6 e 100%), do Blue-Carba (97,1 e 91%) e do CarbapenemBac (100 e 96,5%) foram discretamente inferiores quando as colônias bacterianas foram obtidas do ágar sangue. Por outro lado, a sensibilidade do Carba NP (71,1%) e do Blue-Carba (68,9%) foram inaceitáveis quando as colônias foram obtidas do ágar MacConkey. Já a sensibilidade do CarbapenemBac (97,3%) foi menos afetada nesta situação. Conclusão: Podemos concluir que: 1. Os métodos colorimétricos apresentaram excelente sensibilidade e especificidade para detecção de carbapenemases, quando as colônias bacterianas foram subcultivadas em ágar Müeller-Hinton ou ágar sangue; 2. Colônias subcultivadas em ágar MacConkey não devem ser utilizadas para realização de testes colorimétricos, com exceção do CarbapenemBac que apresentou boa sensibilidade e especificidade para a detecção de carbapenemases independente do meio de cultura utilizado para subcultivo do isolado a ser testado.
Descrição
Citação
MOURA, Jhonatha Rodrigo Cordeiro de. Avaliação comparativa de distintos métodos fenotípicos para a detecção de cepas produtoras de carbapenemases. 2016. 130 f. Dissertação (Mestrado em Infectologia) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.