Isolamento e caracterização de genes codificadores de cisteína proteinases de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis
Data
2003
Autores
Castanho, Fernanda Lasakosvitsch 
Orientadores
Mestriner, Clara Lúcia Barbiéri
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
O enfoque do presente trabalho foi o isolamento e a caracterizacao de dois genes codificadores de cisteina proteinases de formas amastigotas de L. (L.) amazonensis, LIacys1 e Llacys2. O gene Llacys1 foi obtido pela amplificacao por PCR, utilizando-se oligonucleotideos derivados da regiao codificadora do gene Lpcys1 de Leishmania (L.) pifanoi e DNA genomico de L. (L.) amazonenses, originando um fragmento de 1.08 kb. O gene Llacys1 foi clonado e sequenciado e a analise da sua sequencia mostrou que ele apresenta alta identidade com genes codificadores de cisteina proteinases de varias especies de Leishmania, tais como Lpcys1 de L. (L.) pifanoi, Lmcpa de L. (L.) mexicana, cpa de L. (L.) major e Ldccys2 de L. (L.) chagasi. A analise da sequencia predita de aminoacidos mostrou que a proteinase codificada pelo Llacys1 apresenta a pre e a pro-regiao, assim como os residuos conservados de cisteina e histidina presentes no sitio catalitico dessas enzimas e os motivos conservados caracteristicos de cisteina proteinases do tipo catepsina L. Foram tambem observados nessa sequencia alguns provaveis epitopos de classe I e II do MHC. Dois clones foram isolados de uma genoteca de cDNA de amastigotas de L. (L.) amazonensis previamente construida em vetor AZipLox, 2A1 e 3A, que apresentaram 100 por cento de identidade com o gene Llacys1, porem diferiam entre si em relacao ao numero de tratos de pirimidina presentes nas suas regioes 3'UTR. A expressao do gene Llacys1 em sistema bacteriano so foi possivel apos a eliminacao do seu peptideo sinal, utilizando a amplificacao por PCR a partir da segunda metionina e resultando um fragmento de 870 pb denominado Llacys1'. A expressao do Llacys1' em E. coli gerou uma proteina recombinante que nao foi reconhecida pelo AcMo 2E5D3, reativo com a cisteina proteinase de 30 kDa, p30, de L. (L.) amazonensis, indicando que o gene Llacys1 codifica uma cisteina proteinase diferente da p30. O gene Llacys2 de L. (L.) amazonensis foi isolado da...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2003. 122 p.