Isolamento e caracterizacao de genes codificadores de cisteina proteinases de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis

Isolamento e caracterizacao de genes codificadores de cisteina proteinases de amastigotas de Leishmania (L.) amazonensis

Título alternativo Isolation and characterization of genes encoding cysteine proteinases of Leishmania (L.) amazonensis
Autor Castanho, Fernanda Lasakosvitsch Autor UNIFESP Google Scholar
Resumo O enfoque do presente trabalho foi o isolamento e a caracterizacao de dois genes codificadores de cisteina proteinases de formas amastigotas de L. (L.) amazonensis, LIacys1 e Llacys2. O gene Llacys1 foi obtido pela amplificacao por PCR, utilizando-se oligonucleotideos derivados da regiao codificadora do gene Lpcys1 de Leishmania (L.) pifanoi e DNA genomico de L. (L.) amazonenses, originando um fragmento de 1.08 kb. O gene Llacys1 foi clonado e sequenciado e a analise da sua sequencia mostrou que ele apresenta alta identidade com genes codificadores de cisteina proteinases de varias especies de Leishmania, tais como Lpcys1 de L. (L.) pifanoi, Lmcpa de L. (L.) mexicana, cpa de L. (L.) major e Ldccys2 de L. (L.) chagasi. A analise da sequencia predita de aminoacidos mostrou que a proteinase codificada pelo Llacys1 apresenta a pre e a pro-regiao, assim como os residuos conservados de cisteina e histidina presentes no sitio catalitico dessas enzimas e os motivos conservados caracteristicos de cisteina proteinases do tipo catepsina L. Foram tambem observados nessa sequencia alguns provaveis epitopos de classe I e II do MHC. Dois clones foram isolados de uma genoteca de cDNA de amastigotas de L. (L.) amazonensis previamente construida em vetor AZipLox, 2A1 e 3A, que apresentaram 100 por cento de identidade com o gene Llacys1, porem diferiam entre si em relacao ao numero de tratos de pirimidina presentes nas suas regioes 3'UTR. A expressao do gene Llacys1 em sistema bacteriano so foi possivel apos a eliminacao do seu peptideo sinal, utilizando a amplificacao por PCR a partir da segunda metionina e resultando um fragmento de 870 pb denominado Llacys1'. A expressao do Llacys1' em E. coli gerou uma proteina recombinante que nao foi reconhecida pelo AcMo 2E5D3, reativo com a cisteina proteinase de 30 kDa, p30, de L. (L.) amazonensis, indicando que o gene Llacys1 codifica uma cisteina proteinase diferente da p30. O gene Llacys2 de L. (L.) amazonensis foi isolado da...(au)
Palavra-chave Leishmania
Isoformas de Proteínas
Endopeptidases
Idioma Português
Data de publicação 2003
Publicado em São Paulo: [s.n.], 2003. 122 p.
Publicador Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extensão 122 p.
Direito de acesso Acesso restrito
Tipo Tese de doutorado
Endereço permanente http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18574

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