Caracterização ultraestrutural da parede de microrganismos sob ação do CPP AIP6

Página do item simplificado
dc.contributor.advisorSilva, Emerson Rodrigo da [UNIFESP]
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/7800589206457326pt_BR
dc.contributor.authorSouza, Louise Eloá Araújo [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/6243002423243007pt_BR
dc.coverage.spatialSão Paulopt_BR
dc.date.accessioned2023-09-19T14:23:34Z
dc.date.available2023-09-19T14:23:34Z
dc.date.issued2023-09-12
dc.description.abstractIntrodução: O penta peptídeo RLRWR (AIP6) pertence ao grupo dos peptídeos de penetração celular (CPPs) mais curtos já reportados na literatura. A presença de argininas em sua composição confere grande cationicidade a esta sequência, tornando-a também candidata a apresentar propriedades antimicrobianas. Embora a interação de CPPs com células de mamífero seja amplamente investigada, estudos sobre os efeitos dessas moléculas sobre a parede celular de microrganismos não são realizados com a mesma intensidade. Nesta dissertação, investigamos a interação do peptídeo AIP6 com a parede celular de microrganismos-modelo utilizando técnicas de microscopia de força atômica (AFM) capazes de fornecer detalhes físico-químicos com resolução ultra alta. Desenvolvemos protocolos de análise que nos permitiram obter detalhes tridimensionais dessas interfaces, tanto em amostras fixadas quanto em células vivas mantidas em meio líquido. Também realizamos a caracterização da assinatura espectroscópica da parede em escala nanoscópica. Até onde temos conhecimento, trata-se da primeira vez que a ação de CPPs é avaliada por meio da combinação dessas técnicas de microscopia. Objetivo: obtenção de detalhes tridimensionais, em escala nanométrica, de paredes de procariotos e eucariotos submetidos à ação de um CPP. Além disso, também investigamos a assinatura espectroscópica dessas superfícies por meio da combinação de AFM com espectroscopia de infravermelho. Por fim, também pretendemos fornecer informações sobre o comportamento físico-químico do peptídeo e de sua capacidade de nanoestruturação. Materiais e métodos: O comportamento de nanoestruturação do peptídeo foi avaliado por fluorimetria, enquanto sua estrutura secundária foi avaliada por dicroísmo circular. Os modelos celulares procariotos foram as bactérias E. coli e B. subtilis, enquanto o modelo eucarioto foi a levedura S. cerevisiae. As células foram cultivadas em meios nutrientes padrão, sendo a concentração inibitória mínima (MIC) do AIP6 determinada pelo método de diluição seriada com análise de densidade ótica ao longo do tempo. Experimentos de AFM convencional e de nanoespectroscopia (AFM-IR) foram realizados em lâminas fixadas contendo células previamente incubadas com o peptídeo. Análises em células vivas foram realizadas em BioAFM.. Resultados e discussão: Foram encontradas MICs de 0.07 e 0.6 mg/mL, respectivamente, para bactérias Gram-positivas da espécie B. subtilis e Gram-negativas do tipo E. coli. As análises ultraestruturais da parede permitiram a observação de deformações, bem como a formação de domínios peptídicos foi identificada através da assinatura espectroscópica. No caso de células de levedura, não foram observadas grandes deformações, no entanto, verificamos em espectroscopia de infravermelho a aparição de várias vibrações que sugerem que o peptídeo estimula a produção de beta-glucanos em S. cerevisae. Conclusão: O peptídeo AIP6 mostrou afinidade pelas paredes celulares de bactérias, especialmente B. subtilis, enquanto não foi verificada ação antimicrobiana contra S. cerevisae. Nos procariotos, foi observada a formação de domínios peptídicos que provavelmente induzem a formação de poros. No caso de eucariotos, também foi verificada a formação de alguns domínios peptídicos, porém, em grau muito menor. Nesse caso, encontramos dados que sugerem que o AIP6 estimula a produção de beta-glucanos que recobrem a parede celular e facilitam a agregação entre células de levedura.pt_BR
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pt_BR
dc.description.sponsorshipID22/03056-6pt_BR
dc.emailadvisor.customer.silva@unifesp.brpt_BR
dc.format.extent107 f.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/69154
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccesspt_BR
dc.subjectMicroscopia de força atômicapt_BR
dc.subjectPeptídeo de Penetração Celularpt_BR
dc.subjectLevedurapt_BR
dc.subjectBactériapt_BR
dc.subjectNanotecnologiapt_BR
dc.titleCaracterização ultraestrutural da parede de microrganismos sob ação do CPP AIP6pt_BR
dc.title.alternativeUltrastructural characterization of the cell wall of microganisms under action of the CPP AIP6en
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesispt_BR
unifesp.campusEscola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduateProgramCiências Biológicas (Biologia Molecular)pt_BR
unifesp.knowledgeAreaBiofísicapt_BR
unifesp.researchAreaBiofísica molecularpt_BR
Arquivos
Pacote Original
Agora exibindo 1 - 1 de 1
Imagem de Miniatura
Nome:
Louise_Eloa_Araujo Souza-FINAL.pdf
Tamanho:
5.73 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Descrição:
Arquivo principal
Baixar
Licença do Pacote
Agora exibindo 1 - 1 de 1
Imagem de Miniatura
Nome:
license.txt
Tamanho:
5.7 KB
Formato:
Item-specific license agreed upon to submission
Descrição:
Baixar
Coleções
PPG - Ciências Biológicas (Biologia Molecular)