Análise dos aspectos funcionais dos espermatozoides e dos níveis de peroxidação lipídica no plasma seminal de pacientes portadores de tumor de células germinativas de testículo pré e pós-orquiectomia
Data
2016-03-29
Autores
Andrade, Maria Beatriz Ribeiro de 
Orientadores
Spaine, Deborah Montagnini
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Objective: To verify if quality of spermatozoa from men with testicular germ cell tumors is better before or after orchiectomy. Methods: This prospective study was carried out including 24 patients with testicular germ cell tumors. The patients provided one semen sample before they were submitted to unilateral orchiectomy, and one other semen sample 30 days after the surgery. After collection by masturbation and liquefaction, an aliquot of the semen sample was used for semen analysis and another was used to evaluate sperm mitochondrial activity, DNA fragmentation and acrosomal integrity. The remaining volume was centrifuged and the supernatant seminal plasma was used to evaluate lipid peroxidation levels. Mitochondrial activity was determined by a colorimetric stain (3,3? ? diaminobenzidine ? DAB) and classified as DAB I (all mitochondrial active), DAB II (more than 50% mitochondrial active), DAB III (less than 50% mitochondrial active) and DAB IV (all mitochondrial inactive). Sperm DNA fragmentation was assessed by an Alkaline Comet assay, in which sperm were classified as high DNA integrity (class I and II) to high DNA fragmentation (class III and IV). Acrossome integrity was determined by a fluorescent probe (PNA ? FITC) and assessed by fluorescent microscopy. Lipid peroxidation levels were quantified by measuring thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) levels, and were described in TBARS nmol/mL. Pre and Post-orchiectomy sample were compared using a paired Student?s T test (normal distribution) or a paired Wilcoxon test, when appropriate (p?0.05). Results: No significant difference was observed in semen analysis. A significant decrease in DNA fragmentation (p=0.019) and lipid peroxidation (p=0.014), and an increase in mitochondrial activity (p=0.048) was observed after orchiectomy. Conclusions: Based on our findings, the semen quality from men with testicular germ cell tumors is better quality after orchiectomy.
Objetivo: Comparar se as análises seminal e funcional dos espermatozoides e os níveis de peroxidação lipídica do plasma seminal de pacientes com tumor de células germinativas do testículo diferem antes e após a orquiectomia. Método: Estudo prospectivo realizado incluindo amostras de 24 homens portadores de tumor de células germinativas do testículo pré-orquiectomia e até 30 dias após a realização da orquiectomia. Após a coleta de sêmen por masturbação uma alíquota foi utilizada para a análise seminal e outra para a avaliação da atividade mitocondrial, da integridade do acrossoma e da integridade do DNA dos espermatozoides. O volume remanescente de sêmen foi centrifugado e o plasma seminal sobrenadante foi utilizado para a avaliação dos níveis de peroxidação lipídica do plasma seminal. A atividade mitocondrial foi avaliada pelo método de coloração por 3,3? - diaminobenzidina (DAB) e classificadas em DAB classe I (100% da peça intermediária corada), DAB classe II (mais de 50% da peça intermediária corada), DAB classe III (menos de 50% da peça intermediária corada) e DAB classe IV (ausência de coloração na peça intermediária). A integridade do acrossoma foi avaliada através da sonda fluorescente PNA (Peannut agglutinin)-FITC (Fluorescein isothiocyanite). Duzentas células por amostra foram classificadas em acrossoma íntegro e não íntegro. A integridade do DNA espermático foi avaliada através da eletroforese de célula única em gel de agarose em solução alcalina (ensaio cometa). Duzentos espermatozoides por amostra foram classificados em Cometa classe I (célula com halo ao seu redor e com o núcleo corado, sem cauda de cometa evidente), Cometa classe II (célula com formação de cauda de cometa e com o núcleo pouco descorado), Cometa classe III (célula com cauda de cometa totalmente formada, porém com o núcleo parcialmente corado) e Cometa classe IV (célula com cauda de cometa totalmente formada e com o núcleo completamente descorado). O nível de peroxidação lipídica do plasma seminal foi avaliados pela mensuração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As amostras pré e pós-orquiectomia foram comparadas através do teste t de Student para amostras pareadas (distribuição normal) e através do teste não paramétrico de Wilcoxon para amostras pareadas. Para todo o estudo, foi adotado um ? de 5%. Resultados: As amostras pós-orquiectomia apresentaram maior porcentagem de cometa classe II (p= 0,019), menor porcentagem de cometa classe III (p= 0,028), menor porcentagem de DAB classe III (p= 0,048) e menor índice de TBARS (nmol/mL) (p= 0,014). Não foram encontradas diferenças nos parâmetros da análise seminal. Conclusão: Os resultados deste estudo permitem concluir que amostras seminais obtidas de homens com tumor de células germinativas do testículo, colhidas após a orquiectomia, apresentam melhor qualidade funcional dos espermatozoides e níveis menores de peroxidação lipídica do plasma seminal do que aquelas obtidas previamente à cirurgia.
Objetivo: Comparar se as análises seminal e funcional dos espermatozoides e os níveis de peroxidação lipídica do plasma seminal de pacientes com tumor de células germinativas do testículo diferem antes e após a orquiectomia. Método: Estudo prospectivo realizado incluindo amostras de 24 homens portadores de tumor de células germinativas do testículo pré-orquiectomia e até 30 dias após a realização da orquiectomia. Após a coleta de sêmen por masturbação uma alíquota foi utilizada para a análise seminal e outra para a avaliação da atividade mitocondrial, da integridade do acrossoma e da integridade do DNA dos espermatozoides. O volume remanescente de sêmen foi centrifugado e o plasma seminal sobrenadante foi utilizado para a avaliação dos níveis de peroxidação lipídica do plasma seminal. A atividade mitocondrial foi avaliada pelo método de coloração por 3,3? - diaminobenzidina (DAB) e classificadas em DAB classe I (100% da peça intermediária corada), DAB classe II (mais de 50% da peça intermediária corada), DAB classe III (menos de 50% da peça intermediária corada) e DAB classe IV (ausência de coloração na peça intermediária). A integridade do acrossoma foi avaliada através da sonda fluorescente PNA (Peannut agglutinin)-FITC (Fluorescein isothiocyanite). Duzentas células por amostra foram classificadas em acrossoma íntegro e não íntegro. A integridade do DNA espermático foi avaliada através da eletroforese de célula única em gel de agarose em solução alcalina (ensaio cometa). Duzentos espermatozoides por amostra foram classificados em Cometa classe I (célula com halo ao seu redor e com o núcleo corado, sem cauda de cometa evidente), Cometa classe II (célula com formação de cauda de cometa e com o núcleo pouco descorado), Cometa classe III (célula com cauda de cometa totalmente formada, porém com o núcleo parcialmente corado) e Cometa classe IV (célula com cauda de cometa totalmente formada e com o núcleo completamente descorado). O nível de peroxidação lipídica do plasma seminal foi avaliados pela mensuração de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). As amostras pré e pós-orquiectomia foram comparadas através do teste t de Student para amostras pareadas (distribuição normal) e através do teste não paramétrico de Wilcoxon para amostras pareadas. Para todo o estudo, foi adotado um ? de 5%. Resultados: As amostras pós-orquiectomia apresentaram maior porcentagem de cometa classe II (p= 0,019), menor porcentagem de cometa classe III (p= 0,028), menor porcentagem de DAB classe III (p= 0,048) e menor índice de TBARS (nmol/mL) (p= 0,014). Não foram encontradas diferenças nos parâmetros da análise seminal. Conclusão: Os resultados deste estudo permitem concluir que amostras seminais obtidas de homens com tumor de células germinativas do testículo, colhidas após a orquiectomia, apresentam melhor qualidade funcional dos espermatozoides e níveis menores de peroxidação lipídica do plasma seminal do que aquelas obtidas previamente à cirurgia.
Descrição
Citação
ANDRADE, Maria Beatriz Ribeiro de. Análise dos aspectos funcionais dos espermatozoides e dos níveis de peroxidação lipídica no plasma seminal de pacientes portadores de tumor de células germinativas de testículo pré e pós-orquiectomia. 2016. 25 f. Dissertação (Mestrado em Medicina: Urologia) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.