Influência dos contraceptivos orais em componentes da via Wnt e metabolômica de células-tronco endometriais humanas derivadas de fluido menstrual

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Data
2023-01-30
Autores
Moraes, Gabrielle Ferrante Alves de [UNIFESP]
Orientadores
Turco, Edson Guimarães Lo [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
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Resumo
Objetivo: Estudar o efeito do uso de contraceptivo hormonal oral (CHO) em células-tronco endometriais humanas (CTEs) por meio do isolamento e caracterização in vitro, da via Wnt e da metabolômica do meio de cultivo condicionado e das próprias células. Métodos: Este estudo foi dividido em 2 subestudos. Foram estudados dois grupos de voluntárias de acordo com o uso de CHO, sendo 10 voluntárias constituindo o grupo sem uso de contraceptivo (CT) e 7 voluntárias constituindo o grupo com uso de contraceptivo (CHO). Foi feito o isolamento de CTEs a partir de fluido menstrual e as células foram caracterizadas através de marcadores de superfície celular, mesenquimais (CD105 e CD146) e hematopoiéticos (CD45 e CD34), e por ensaio de diferenciação celular adipogênica, condrogênica e osteogênica, para posterior utilização nos subestudos. No subestudo I, componentes da via de sinalização Wnt, Wnt3a, Wnt7a e β-Catenina, foram avaliados quanto à sua expressão gênica, por PCR em Tempo Real, e quanto à sua expressão proteica, por Citometria de Fluxo. No subestudo II, foram avaliados os metabólitos presentes nas CTEs e aqueles secretados no meio de cultivo durante seu cultivo in vitro, a partir de análise metabolômica por MALDI-TOF. Resultados: Durante o cultivo celular, as CTEs permaneceram fenotipicamente estáveis, apresentaram alta expressão dos marcadores de superfície mesenquimais e baixa expressão dos hematopoiéticos, além de mostrarem potencial de diferenciação adipogênica, condrogênica e osteogênica. Os resultados mostraram que o nível de expressão gênica de Wnt3a, Wnt7a e β-catenina no grupo CHO foi significativamente menor do que no grupo CT, porém a expressão proteica não revelou diferenças significativas entre os grupos. Na análise para avaliar os efeitos do CHO na expressão de metabólitos, os resultados demonstraram que o grupo CT distinguiu-se claramente do grupo CHO. O perfil metabolômico das células e de seu secretôma apresentou diferença entre os grupos. Conclusão: O uso de CHO altera a expressão gênica de Wnt3a, Wnt7a e β-Catenina em CTEs, porém não altera sua expressão proteica. A análise metabolômica permitiu inferir que o metabolismo celular e, principalmente, secretômico das CTEs sofre alterações sob influência do CHO.
Objective: To study the effect of oral hormonal contraceptives (OHC) use on human endometrial stem cells (ESCs) through in vitro isolation and characterization, the Wnt pathway and metabolomics of conditioned culture medium and cells themselves. Methods: This study was divided into 2 substudies. Two volunteers groups were studied according to OHC use, with 10 volunteers constituting the group without contraceptive use (CT) and 7 volunteers constituting the group using contraceptives (OHC). ESCs were isolated from menstrual fluid and the cells were characterized by cell surface markers, mesenchymal (CD105 and CD146) and hematopoietic (CD45 and CD34), and by adipogenic, chondrogenic and osteogenic cell differentiation assay to subsequent use in substudies. In substudy I Wnt signaling pathway components, Wnt3a, Wnt7a and β-Catenin, were evaluated for their gene expression by Real Time PCR and for their protein expression by Flow Cytometry. In substudy II the metabolites present in ESCs and those secreted in the culture medium during in vitro cultivation were evaluated based on metabolomic analysis by MALDI-TOF. Results: During cell culture ESCs remained phenotypically stable, showed high expression of mesenchymal surface markers and low expression of hematopoietic markers in addition to showing potential for adipogenic, chondrogenic and osteogenic differentiation. The results showed that Wnt3a, Wnt7a and β-catenin gene expression level in OHC group was significantly lower than in the CT group, however the protein expression did not reveal significant differences between groups. In the analysis to assess the OHC effects on metabolite expression, the results demonstrated that CT group was clearly distinguished from OHC group. The cells and secretome metabolomic profile differed between groups. Conclusion: The OHC use alters the Wnt3a, Wnt7a and β-Catenin gene expression in ESCs, but does not alter their protein expression. The metabolomic analysis allowed inferring that ESCs cellular and mainly secretory metabolism undergoes changes under OHC influence.
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