Novos promotores constitutivos de cana-de-açúcar: caracterização in silico, isolamento e amplificação
Data
2022-07-29
Autores
Silva, Vinícios Henrique 
Orientadores
Brito, Michael dos Santos
Tipo
Trabalho de conclusão de curso
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
A Biotecnologia Vegetal, através do desenvolvimento de plantas geneticamente
modificadas (GMs) possibilita a incorporação de características vantajosas e de
interesse em variedades comerciais. No momento onde há uma demanda global por
novas fontes renováveis de geração de energia somado ao aumento populacional e a
necessidade crescente da produção global de alimentos, as plantas GMs podem
contribuir mitigando ou minimizando os impactos ambientais e a expansão das
fronteiras agrícolas, através de culturas de maior resistência, produtividade e
adaptadas às diferentes condições climáticas e estressoras. Dentre as sequências
responsáveis por controlar expressão, momento e local dos genes, os promotores
constitutivos, em específico, são responsáveis pela regulação de genes cuja
expressão ocorre ininterruptamente nos diferentes tecidos e estágios de
desenvolvimento da planta. Dessa forma, o presente estudo visou caracterizar e
avaliar in sílico novos promotores constitutivos da Cana-de-Açúcar (Saccharum spp.),
bem como, seus homólogos em Sorgo (Sorghum bicolor) e Milho (Zea mays), para o
desenvolvimento de novos vetores de transformação eficientes inicialmente para
gramíneas, mas com possibilidade de uso em outras plantas. A partir de banco de
dados genômicos e transcriptômicos, específicos para a Cana e espécies correlatas,
foram identificados 10 genes constitutivos, cuja expressão foi validada através de
ferramentas online, como BAR e Northern Virtual. A partir dessas análises, os genes
que codificam: Fator de Alongamento 1 Delta 1, Proteína Homóloga ao Fator de
Tradução SUI 1 e Arginina tRNA Ligase da cana-de-açúcar demonstraram os
melhores perfis de expressão, quando comparados aos demais genes e à Actina. A
partir destes, foram obtidas sequências promotoras, analisados os sítios para ligação
de Fatores de Transcrição (FT), bem como presença de regiões conservadas e
repetitivas entre elas. Posteriormente, foram desenhados e avaliados primers que por
sua vez foram utilizados na amplificação da região promotora dos candidatos através
da PCR, cujos resultados foram verificados através de Eletroforese em Gel de
Agarose e por fim, foi quantificado a amostra de DNA obtida. Portanto, os objetivos
estabelecidos inicialmente pelo estudo foram atingidos, ao mesmo tempo, abrindo
possibilidades para estudos posteriores relacionados à caracterização e validação de
novos promotores constitutivos para a Engenharia Genética de Plantas.