Avaliação do uso combinado da imunização ativa com MAB 10.D7 e passiva com MAB 3F12E7 em modelo de melanoma murino B16F10
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Data
2019-04-25
Autores
Hamaguchi, Barbara [UNIFESP]
Orientadores
Moraes, Jane Zveiter De [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Melanoma is an aggressive and lethal type of cancer which requires new approaches to be effectively treated. Angiogenesis-directed immunotherapy may contribute to refrain tumoral growth and metastization. Our group has successfully developed two monoclonal antibodies (mAb): 3F12E7, which recognizes fibroblast growth factor 2 (FGF2), and 10.D7 that interferes with vascular endothelial growth factor (VEGF) activity, both showing promising results in combating tumoral development. Objective: To verify the existence of combining effects in combining both mAbs over B16F10 tumor growth inhibition. Methods: Groups of C57Bl/6 mice were actively immunized twice with a sevenday interval with either mAb 10.D7 or irrelevant mAb conjugated with KLH. Ten days after the second immunization, mice were subcutaneously inoculated with B16F10 cells. Thereafter, mice were treated with either mAb 3F12E7 or irrelevant antibody by intraperitoneal injection, for five consecutive times every 48 hours. The animals had their sera collected for evaluation of VEGF-binding antibodies on immunization, inoculation and euthanasia days, and tumor volume was measured daily. After euthanasia, tumors were excised and histological sections evaluated for the presence of necrosis and CD31+ vessels. Results: Mice treated with 10.D7/3F12E7 presented the lowest tumoral volumes and greater delay on tumor establishment when compared to the other groups of treatments. Also, the smallest tumors were found in those animals with higher levels of VEGF-binding antibodies. Higher necrosis rates were observed in groups 10.D7/Irrelevant and 10.D7/3F12E7, which was inversely proportional to the presence of CD31+ vessels. Data were compared by means of one-way ANOVA test, p <0.05. Conclusion: There is a combined effect on the inhibition of tumor development when immunizations with mAbs 10.D7 and 3F12E7 are associated.
O melanoma é um câncer de caráter agressivo e letal que necessita de novas abordagens para ser tratado de maneira eficaz. A imunoterapia focada no processo de angiogênese pode contribuir para deter o crescimento tumoral e metastatização. Nosso laboratório já desenvolveu com sucesso o anticorpo monoclonal (mAb) 3F12E7 que interfere com o fator de crescimento de fibroblasto 2 (FGF2) e o mAb 10.D7, que interfere com o fator de crescimento de endotélio vascular (VEGF), cada um deles demonstrando resultados muito promissores no combate ao desenvolvimento tumoral. Objetivo: Verificar se existe efeito combinado no uso combinado dos dois mAbs sobre o crescimento de tumor B16F10. Métodos: Grupos de camundongos C57Bl/6 foram imunizados ativamente duas vezes com o mAb 10D7 ou anticorpo Irrelevante conjugados a KLH, com intervalo de sete dias entre as imunizações. Após dez dias da segunda imunização, os animais foram inoculados por via subcutânea com células B16F10. Em seguida, foram tratados com o mAb 3F12E7 ou anticorpo irrelevante por injeção intraperitoneal por cinco vezes seguidas em intervalos de 48 horas. Os animais tiveram seus soros coletados para avaliação de anticorpos ligantes de VEGF nos dias das imunizações, da injeção de B16F10 e da eutanásia, e os volumes tumorais mensurados diariamente. Após eutanásia, os tumores foram excisionados e os cortes histológicos avaliados quanto à presença de necrose e de vasos CD31+. Resultados: Os animais que receberam tratamento 10.D7/3F12E7 apresentaram os menores volumes tumorais e maior retardo no estabelecimento do tumor em relação aos demais tratamentos, sendo que os menores tumores foram encontrados nos animais que apresentaram níveis mais altos de anticorpos ligantes de VEGF. Maiores índices de necrose foram encontrados nos grupos 10.D7/Irrelevante e 10.D7/3F12E7, em relação inversamente proporcional à presença de vasos CD31+. Dados comparados por meio do teste de multicomparação ANOVA (one-way ANOVA), adotando-se nível de significância p < 0,05. Conclusão: Existe efeito combinado sobre a inibição do desenvolvimento tumoral, quando as imunizações com mAbs 10.D7 e 3F12E7 são associadas.
O melanoma é um câncer de caráter agressivo e letal que necessita de novas abordagens para ser tratado de maneira eficaz. A imunoterapia focada no processo de angiogênese pode contribuir para deter o crescimento tumoral e metastatização. Nosso laboratório já desenvolveu com sucesso o anticorpo monoclonal (mAb) 3F12E7 que interfere com o fator de crescimento de fibroblasto 2 (FGF2) e o mAb 10.D7, que interfere com o fator de crescimento de endotélio vascular (VEGF), cada um deles demonstrando resultados muito promissores no combate ao desenvolvimento tumoral. Objetivo: Verificar se existe efeito combinado no uso combinado dos dois mAbs sobre o crescimento de tumor B16F10. Métodos: Grupos de camundongos C57Bl/6 foram imunizados ativamente duas vezes com o mAb 10D7 ou anticorpo Irrelevante conjugados a KLH, com intervalo de sete dias entre as imunizações. Após dez dias da segunda imunização, os animais foram inoculados por via subcutânea com células B16F10. Em seguida, foram tratados com o mAb 3F12E7 ou anticorpo irrelevante por injeção intraperitoneal por cinco vezes seguidas em intervalos de 48 horas. Os animais tiveram seus soros coletados para avaliação de anticorpos ligantes de VEGF nos dias das imunizações, da injeção de B16F10 e da eutanásia, e os volumes tumorais mensurados diariamente. Após eutanásia, os tumores foram excisionados e os cortes histológicos avaliados quanto à presença de necrose e de vasos CD31+. Resultados: Os animais que receberam tratamento 10.D7/3F12E7 apresentaram os menores volumes tumorais e maior retardo no estabelecimento do tumor em relação aos demais tratamentos, sendo que os menores tumores foram encontrados nos animais que apresentaram níveis mais altos de anticorpos ligantes de VEGF. Maiores índices de necrose foram encontrados nos grupos 10.D7/Irrelevante e 10.D7/3F12E7, em relação inversamente proporcional à presença de vasos CD31+. Dados comparados por meio do teste de multicomparação ANOVA (one-way ANOVA), adotando-se nível de significância p < 0,05. Conclusão: Existe efeito combinado sobre a inibição do desenvolvimento tumoral, quando as imunizações com mAbs 10.D7 e 3F12E7 são associadas.
Descrição
Citação
HAMAGUCHI, Bárbara. Avaliação do uso combinado da imunização ativa com mAb 10.D7 e imunização passiva com mAb 3F12E7 em modelo de melanoma murino B16F10 . 2019. 83f. Dissertação ( Mestrado em Biologia Molecular) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2019.