A influência da privação de sono paradoxal na fisiologia do tecido adiposo branco, marrom e fígado de ratos
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Date
2017-02-13
Authors
Santos, Marcus Vinicius Lucio dos [UNIFESP]
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Antunes, Hanna Karen Moreira [UNIFESP]
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Dissertação de mestrado
Journal Title
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Volume Title
Abstract
Purpose: Verify the influence of sleep deprivation on the white, brown adipose tissue and liver physiology of rats. Methods: Thirty male wistar rats with 03-month-old were used. The animals were allocated into three groups: ten animals in the control group, ten animals in the paradoxical sleep deprivation group and ten animals in the sleep rebound group. The animals in the sleep deprivation and rebound group were subjected to the modified multiple platform method for 96 consecutive hours, then the animals in the rebound group returned to the housing to be submitted to the sleep rebound protocol for the same period. To understand the proposed objectives, the rats total mass was verified throughout the protocol. After euthanasia, animal interest tissues and blood were collected to analyze the following parameters: corticosterone, glucose, lactate, insulin, irisin, lipid profile and free fatty acids by the liquid chromatography method, enzyme immunoassay or colorimetric analysis according to the recommendation of the kit used for each parameter analyzed. Moreover, we analyzed the expression of the total and phosphorylated kinase B proteins, LC3A and PGC1-α, using western blotting method, and the COX-2, TNF-α and 8OHdG biomarkers were verified by the immunohistochemical method. Finally, rats body and tissue mass were verified, being: skeletal muscle, white adipose tissue, brown adipose tissue and liver. From these tissues, white, brown adipose tissue and liver area, diameter and nucleus density were verified by the histomorphometric method. Results: The total body mass (p≤0.01), skeletal muscle (p = 0.03), retroperitoneal adipose tissue (p = 0.01), epididymal adipose tissue (p = 0.01), liver (P≤0.01), glycaemia (p≤0.01), triacylglycerol / VLDL (p≤0.01), PGC1-α (p = 0.03), area and perimeter of white (p≤0.01) and brown adipose tissue (p≤0.01) of sleep deprivation group reduced when compared to the control group. In addition, we verify the increased in concentrations of corticosterone (p≤0.01), irisine (p≤0.01), free fatty acids (p≤0.01), LDL (p≤0.01) and LDL / HDL ratio (p = 0.02) in the same comparison. Finally, we observed an increase of aspartate aminotransferase (p = 0.01), COX-2 (p≤0.01) and 80HdG (p≤0.01) in the rebound sleep group compared to the control group. Conclusion: Sleep deprivation modifies the integrity and functionality of white, brown adipose tissue and liver, moreover, modulates lipid and glucose metabolism, as well as promotes oxidative stress and inflammation increase.
Objetivo: Verificar a influência da privação de sono na fisiologia dos tecidos adiposos branco e marrom e do fígado de ratos. Métodos: Foram utilizados trinta ratos machos, da linhagem Wistar EPM-I com 03 meses de idade. Os animais foram distribuídos em três grupos, sendo dez animais no grupo controle, dez animais no grupo privação de sono paradoxal e dez animais no grupo rebote de sono. Os animais do grupo privação e rebote de sono foram submetidos ao método modificado das plataformas múltiplas por 96 horas consecutivas, em seguida os animais do grupo rebote retornaram para caixa moradia para dormirem livremente pelo mesmo período. Após a eutanásia foram coletados os tecidos de interesse e o sangue dos animais para que se pudesse analisar os seguintes parâmetros: concentrações de corticosterona, glicose, lactato, insulina, irisina, perfil lipídico e ácidos graxos livres por meio do método de cromatografia liquida, imunoensaio enzimático ou análise colorimétrica de acordo com a recomendação do kit utilizado para cada parâmetro. Com a utilização do método de western blotting foi verificada a expressão das proteínas quinase B total e fosforilada, LC3A e PGC1-α, bem como foi verificado pelo método de imunohistoquímica os biomarcadores COX-2, TNF-α e 8OHdG. Por fim, foi verificada a massa corporal dos animais, bem como a massa dos tecidos de interesse, sendo: músculo esquelético, tecido adiposo branco, tecido adiposo marrom e fígado. Nos tecidos adiposos branco e marrom, assim como no fígado foi verificada por meio do método de histomorfometria a área, diâmetro e densidade de núcleo do tecido adiposo e fígado. Resultados: Observou-se no presente estudo redução da massa corporal total (p≤0,01), músculo esquelético (p=0,03), tecido adiposo retroperitonial (p=0,01), epididimal (p=0,01), mesentérico (p=0,01) e fígado (p≤0,01), insulina (p≤0,01), glicemia (p≤0,01), triacilglicerol/VLDL (p≤0,01), PGC1-α (p=0,03), área e perímetro do tecido adiposo branco (p≤0,01) e marrom (p≤0,01) dos animais do grupo privação de sono em comparação ao grupo controle. Ademais, pode-se observar aumento das concentrações de corticosterona (p≤0,01), irisina (p≤0,01), ácidos graxos livres (p≤0,01), LDL (p≤0,01) e razão LDL/HDL (p=0,02) na mesma comparação. Por fim, verificamos aumento das concentrações de aspartato aminotransferase (p=0,01), COX- 2 (p≤0,01) e 80HdG (p≤0,01) no grupo rebote de sono em comparação ao grupo controle. Conclusão: Concluímos que a privação de sono modifica a integridade e funcionalidade do tecido adiposo branco, marrom e fígado, modula o metabolismo lipídico e glicídico, bem como gera estresse oxidativo e inflamação.
Objetivo: Verificar a influência da privação de sono na fisiologia dos tecidos adiposos branco e marrom e do fígado de ratos. Métodos: Foram utilizados trinta ratos machos, da linhagem Wistar EPM-I com 03 meses de idade. Os animais foram distribuídos em três grupos, sendo dez animais no grupo controle, dez animais no grupo privação de sono paradoxal e dez animais no grupo rebote de sono. Os animais do grupo privação e rebote de sono foram submetidos ao método modificado das plataformas múltiplas por 96 horas consecutivas, em seguida os animais do grupo rebote retornaram para caixa moradia para dormirem livremente pelo mesmo período. Após a eutanásia foram coletados os tecidos de interesse e o sangue dos animais para que se pudesse analisar os seguintes parâmetros: concentrações de corticosterona, glicose, lactato, insulina, irisina, perfil lipídico e ácidos graxos livres por meio do método de cromatografia liquida, imunoensaio enzimático ou análise colorimétrica de acordo com a recomendação do kit utilizado para cada parâmetro. Com a utilização do método de western blotting foi verificada a expressão das proteínas quinase B total e fosforilada, LC3A e PGC1-α, bem como foi verificado pelo método de imunohistoquímica os biomarcadores COX-2, TNF-α e 8OHdG. Por fim, foi verificada a massa corporal dos animais, bem como a massa dos tecidos de interesse, sendo: músculo esquelético, tecido adiposo branco, tecido adiposo marrom e fígado. Nos tecidos adiposos branco e marrom, assim como no fígado foi verificada por meio do método de histomorfometria a área, diâmetro e densidade de núcleo do tecido adiposo e fígado. Resultados: Observou-se no presente estudo redução da massa corporal total (p≤0,01), músculo esquelético (p=0,03), tecido adiposo retroperitonial (p=0,01), epididimal (p=0,01), mesentérico (p=0,01) e fígado (p≤0,01), insulina (p≤0,01), glicemia (p≤0,01), triacilglicerol/VLDL (p≤0,01), PGC1-α (p=0,03), área e perímetro do tecido adiposo branco (p≤0,01) e marrom (p≤0,01) dos animais do grupo privação de sono em comparação ao grupo controle. Ademais, pode-se observar aumento das concentrações de corticosterona (p≤0,01), irisina (p≤0,01), ácidos graxos livres (p≤0,01), LDL (p≤0,01) e razão LDL/HDL (p=0,02) na mesma comparação. Por fim, verificamos aumento das concentrações de aspartato aminotransferase (p=0,01), COX- 2 (p≤0,01) e 80HdG (p≤0,01) no grupo rebote de sono em comparação ao grupo controle. Conclusão: Concluímos que a privação de sono modifica a integridade e funcionalidade do tecido adiposo branco, marrom e fígado, modula o metabolismo lipídico e glicídico, bem como gera estresse oxidativo e inflamação.
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Citation
SANTOS, Marcus Vinicius Lucio dos. A influência da privação de sono paradoxal na fisiologia do tecido adiposo branco, marrom e fígado de ratos. 2017. 107f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Saúde e Sociedade, Universidade Federal de São Paulo, Santos, 2017.