Estudos bioquímicos em camundongos C57BL/6 submetidos à variação da concentração de treonina na dieta
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Data
2016-09-30
Autores
Bruno Neto, Giuseppe [UNIFESP]
Orientadores
Assunção, Nilson Antônio de [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Methylglyoxal (MGO) is an alpha-dicarbonyl compound endogenously synthesized by metabolism which has several proposed routes of synthesis in the body, among them, from the essential amino acid threonine. MGO also has cytotoxic effects in the body, and its concentration is regulated through the cycle of the glyoxalases that transform it into lactate. With the interference in some metabolic pathways, some alteration in the alpha-dicarbonyl synthesis can be provoked, being able to modify the concentrations of this compound in the organism. Therefore, the objective of this work is to standardize an experimental model through the provision of a diet for male C57Bl / 6 mice, altering one of the MGO synthesis pathways by interfering with the concentration of threonine available in the diet of the animals. Weighing and evaluation of feed consumption were performed weekly and glycemic index evaluation at the end of the protocol. The method of determination of reduced Glutathione (GSH) and Oxidized Glutathione (GSSG) was validated and later these compounds were quantified in the animals' livers. The profile of the metabolites present in the liver was also evaluated by direct infusion in a mass spectrometer (Q-TOF). The weights of the animals treated with threonine (CT) 24 ± 1.67 g and 30 ± 2.24 g, were higher than those animals submitted to the diet with absence of threonine (ST), 11 ± 1.79 g 21 ± 1.17 g. Regarding the GSH and GSSG levels, there was no significant difference (p <0.05) between the groups. Values ??ranged from 0.83 ± 0.62 mmol / g to 1.44 ± 0.36 ?mol / g GSH for the CT groups for 60, 80 and 90 days respectively, and ranged from 1.43 ± 0.15 mmol / G, at 0.07 ± 0.08 mmol / g GSH for the ST treated groups for the same periods. GSSG concentrations also showed no differences between groups ranging from 0.38 ± 0.20 mmol / g to 0.31 ± 0.11 mmol / g for the CT groups and 0.28 ± 0.12 mmol / g , At 0.61 ± 0.33 mmol / g, for the ST groups. The method of Glutathione determination was validated with satisfactory results, with a LOD and LOQ below 0.1 mmol / ml for GSH and GSSG. The alterations observed by the standardization of the experimental model of the animals showed that the interference in only one of the MGO pathways had an effect on the metabolism of the animals and on the behavior of the metabolites present in the liver.
O metilglioxal (MGO) é um composto alfa-dicarbonilo sintetizado endogenamente pelo metabolismo que possui diversas vias propostas de síntese no organismo, dentre elas, a partir do aminoácido essencial treonina. O MGO também possui efeitos citotóxicos no organismo, tendo sua concentração regulada por meio do ciclo das glioxalases que o transformam em lactato. Com a interferência em algumas vias metabólicas, alguma alteração na síntese do alfa-dicarbonilo pode ser provocada, podendo modificar as concentrações deste composto no organismo. Assim sendo, o objetivo deste trabalho é padronizar um modelo experimental por meio da disponibilização de uma dieta para camundongos C57Bl/6 machos, alterando uma das vias de síntese de MGO a partir da interferência na concentração de treonina disponibilizada na dieta dos animais. Foram realizadas pesagens e avaliação do consumo de ração semanalmente e avaliação do índice glicêmico ao final do protocolo. O método de determinação de Glutationa reduzida (GSH) e Glutationa Oxidada (GSSG) foi validado e posteriormente estes compostos foram quantificados nos fígados dos animais. O perfil dos metabólitos presentes no fígado também foi avaliado por infusão direta em espectrômetro de massas (Q-TOF). Os pesos dos animais tratados com a treonina (CT) 24 ± 1,67 g a 30 ± 2,24 g, mostraram-se maiores do que os dos animais submetidos à dieta com ausência de treonina (ST), 11 ± 1,79 g a 21 ± 1,17 g. Quanto aos níveis de GSH e GSSG não houve diferença significativa (p<0,05) entre os grupos. Os valores variaram de 0,83 ± 0,62 mmol/g a 1,44 ± 0,36 µmol/g de GSH para os grupos CT durante 60, 80 e 90 dias respectivamente, e variaram de 1,43 ± 0,15 mmol/g, a 0,07 ± 0,08 mmol/g de GSH para os grupos tratados ST para os mesmos períodos. As concentrações de GSSG também não mostraram diferenças entre os grupos variando de 0,38 ± 0,20 mmol/g a 0,31 ± 0,11 mmol/g, para os grupos CT e de 0,28 ± 0,12 mmol/g, a 0,61 ± 0,33 mmol/g, para os grupos ST. O método de determinação de Glutationa foi validado apresentando resultados satisfatórios, com um LOD e LOQ abaixo de 0,1 mmol/ml para GSH e GSSG. As alterações observadas pela padronização do modelo experimental dos animais mostraram que a interferência em apenas uma das vias do MGO surtiu efeito no metabolismo dos animais e no comportamento dos metabólitos presentes no fígado.
O metilglioxal (MGO) é um composto alfa-dicarbonilo sintetizado endogenamente pelo metabolismo que possui diversas vias propostas de síntese no organismo, dentre elas, a partir do aminoácido essencial treonina. O MGO também possui efeitos citotóxicos no organismo, tendo sua concentração regulada por meio do ciclo das glioxalases que o transformam em lactato. Com a interferência em algumas vias metabólicas, alguma alteração na síntese do alfa-dicarbonilo pode ser provocada, podendo modificar as concentrações deste composto no organismo. Assim sendo, o objetivo deste trabalho é padronizar um modelo experimental por meio da disponibilização de uma dieta para camundongos C57Bl/6 machos, alterando uma das vias de síntese de MGO a partir da interferência na concentração de treonina disponibilizada na dieta dos animais. Foram realizadas pesagens e avaliação do consumo de ração semanalmente e avaliação do índice glicêmico ao final do protocolo. O método de determinação de Glutationa reduzida (GSH) e Glutationa Oxidada (GSSG) foi validado e posteriormente estes compostos foram quantificados nos fígados dos animais. O perfil dos metabólitos presentes no fígado também foi avaliado por infusão direta em espectrômetro de massas (Q-TOF). Os pesos dos animais tratados com a treonina (CT) 24 ± 1,67 g a 30 ± 2,24 g, mostraram-se maiores do que os dos animais submetidos à dieta com ausência de treonina (ST), 11 ± 1,79 g a 21 ± 1,17 g. Quanto aos níveis de GSH e GSSG não houve diferença significativa (p<0,05) entre os grupos. Os valores variaram de 0,83 ± 0,62 mmol/g a 1,44 ± 0,36 µmol/g de GSH para os grupos CT durante 60, 80 e 90 dias respectivamente, e variaram de 1,43 ± 0,15 mmol/g, a 0,07 ± 0,08 mmol/g de GSH para os grupos tratados ST para os mesmos períodos. As concentrações de GSSG também não mostraram diferenças entre os grupos variando de 0,38 ± 0,20 mmol/g a 0,31 ± 0,11 mmol/g, para os grupos CT e de 0,28 ± 0,12 mmol/g, a 0,61 ± 0,33 mmol/g, para os grupos ST. O método de determinação de Glutationa foi validado apresentando resultados satisfatórios, com um LOD e LOQ abaixo de 0,1 mmol/ml para GSH e GSSG. As alterações observadas pela padronização do modelo experimental dos animais mostraram que a interferência em apenas uma das vias do MGO surtiu efeito no metabolismo dos animais e no comportamento dos metabólitos presentes no fígado.
Descrição
Citação
BRUNO NETO, Giuseppe. Estudos bioquímicos em camundongos C57BL/6 submetidos à variação da concentração de treonina na dieta. 2016. 67 f. Dissertação (Mestrado em Medicina Translacional) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.