Efeitos da reposição estrogênica na cartilagem articular de fêmur de ratas diabéticas e ovariectomizadas
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Data
2016-08-30
Autores
Fernandes, Alexandre Saeki [UNIFESP]
Orientadores
Simões, Manuel de Jesus [UNIFESP]
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Resumo
The degeneration of the articular cartilage is often observed in menopausal women, estrogen deficiency is one of the main causes of this degeneration. Furthermore, studies indicate that diabetes mellitus also causes negative effects on articular cartilage, however, the effects associated with the lack of estrogen, diabetes and estrogen replacement cartilage articulate are poorly understood. To assess the effects associated with the estrogen deficiency and diabetes (Di) and of estrogen replacement of articular cartilage in rats. Methods: 50 adult female rats at 3 months of age were ovariectomized (OVX) and after 21 days, divided in five groups: GI - (Ovx); GII (Ovx - treated with 10mg / kg per day of estrogen (Est) subcutaneously; GIII - (OVX + Di induced by streptozotocin (65?g / kg); GIV (OVX + Di + Est), GV - Sham-Di. After 60 consecutive days of treatment, animals were euthanized, the distal femurs containing articular cartilage collected and fixed in 10% formaldehyde buffered saline and embedded in paraffin. Sections (4?m in thickness) were stained with hematoxylin and eosin for histomorphometric analysis, submitted to histochemistry of red picrosirius (PS) for evaluation of collagen fibers and Alcian Blue (AB) for quantification of glycosaminoglycans (GAGs) and immunohistochemical methods cleaved caspase-3 and Ki67. Quantitative data will be statistically analyzed for comparison between groups (p<0.05). Results: We observed a smaller thickness of the articular cartilage and amount of glycosaminoglycans, more caspase-3 positive cleaved chondrocytes, birefringence of collagen fibers in GIII (Ovx-Di) compared the other groups. Conclusion: Our results demonstrate that diabetes combined with ovariectomy has a deleterious effect on the articular cartilage of rat femur. In addition, treatment with estrogen showed little or no impact on the measured parameters.
A deficiência estrogênica é considerada uma das principais causas de osteoporose e osteoartrite em mulheres na menopausa, sendo que a reposição hormonal com estrogênios tem-se mostrado eficaz contra a perda óssea e degeneração da cartilagem articular tanto em modelos animais quanto em mulheres na menopausa. Entretanto, os efeitos benéficos dos estrogênios na cartilagem articular ainda não são muito bem compreendidos e controversos. Por outro lado, estudos indicam que o diabetes mellitus também causa efeitos negativos na cartilagem articular, porém, não se conhece se os efeitos dos estrogênios na cartilagem articular podem ser influenciados pelo diabetes mellitus. Objetivo: Avaliar os efeitos dos estrogênios na cartilagem articular de ratas diabéticas. Métodos: 50 ratas adultas, 3 meses de idade, normais ou diabéticas (Di) induzidas por estreptozotocina, foram ovariectomizadas (Ovx). Após 21 dias, o ciclo estral das ratas foi avaliado por colpocitologia durante 4 dias consecutivos para confirmação do quadro de anestro-permanente. Posteriormente as ratas foram divididas em 5 grupos: GI (Ovx-controle); GII (Ovx-tratado com 10?g/Kg/dia de estrôgenios); GIII (Ovx-Di); GIV (Ovx-Di e tratado com 10?g/Kg/dia de estrogênios) e GV (Sham-Di) pesadas semanalmente. Após 60 dias consecutivos de tratamento, os animais foram eutanasiados, os fêmures distais contendo a cartilagem articular coletados e fixados em formaldeído a 10% e incluídos em parafina. Cortes com 4 ?m de espessura foram corados pela hematoxilina e eosina para análise histomorfométrica, submetidos aos métodos histoquímicos do picrosirius red (PS) para avaliação das fibras colágenas e ao Alcian Blue (AB) para quantificação dos glicosaminoglicanos (GAGs) e métodos imuno-histoquímicos caspase-3 clivada e Ki67. Os dados quantitativos foram submetidos à análise estatística para comparação entre os grupos (p<0,05). Resultados: Uma menor espessura da cartilagem articular e quantidade de glicosaminoglicanos, maior número de condrócitos caspase-3 clivada positivos, birrefringência das fibras colágenas no GIII (Ovx-Di). Conclusão: Nossos resultados demonstram que a diabetes combinada com a ovariectomia exerce efeito deletério na cartilagem articular de fêmur de ratas. Além disso, o tratamento com estrogénio mostrou pouco ou nenhum impacto sobre os parâmetros medidos.
A deficiência estrogênica é considerada uma das principais causas de osteoporose e osteoartrite em mulheres na menopausa, sendo que a reposição hormonal com estrogênios tem-se mostrado eficaz contra a perda óssea e degeneração da cartilagem articular tanto em modelos animais quanto em mulheres na menopausa. Entretanto, os efeitos benéficos dos estrogênios na cartilagem articular ainda não são muito bem compreendidos e controversos. Por outro lado, estudos indicam que o diabetes mellitus também causa efeitos negativos na cartilagem articular, porém, não se conhece se os efeitos dos estrogênios na cartilagem articular podem ser influenciados pelo diabetes mellitus. Objetivo: Avaliar os efeitos dos estrogênios na cartilagem articular de ratas diabéticas. Métodos: 50 ratas adultas, 3 meses de idade, normais ou diabéticas (Di) induzidas por estreptozotocina, foram ovariectomizadas (Ovx). Após 21 dias, o ciclo estral das ratas foi avaliado por colpocitologia durante 4 dias consecutivos para confirmação do quadro de anestro-permanente. Posteriormente as ratas foram divididas em 5 grupos: GI (Ovx-controle); GII (Ovx-tratado com 10?g/Kg/dia de estrôgenios); GIII (Ovx-Di); GIV (Ovx-Di e tratado com 10?g/Kg/dia de estrogênios) e GV (Sham-Di) pesadas semanalmente. Após 60 dias consecutivos de tratamento, os animais foram eutanasiados, os fêmures distais contendo a cartilagem articular coletados e fixados em formaldeído a 10% e incluídos em parafina. Cortes com 4 ?m de espessura foram corados pela hematoxilina e eosina para análise histomorfométrica, submetidos aos métodos histoquímicos do picrosirius red (PS) para avaliação das fibras colágenas e ao Alcian Blue (AB) para quantificação dos glicosaminoglicanos (GAGs) e métodos imuno-histoquímicos caspase-3 clivada e Ki67. Os dados quantitativos foram submetidos à análise estatística para comparação entre os grupos (p<0,05). Resultados: Uma menor espessura da cartilagem articular e quantidade de glicosaminoglicanos, maior número de condrócitos caspase-3 clivada positivos, birrefringência das fibras colágenas no GIII (Ovx-Di). Conclusão: Nossos resultados demonstram que a diabetes combinada com a ovariectomia exerce efeito deletério na cartilagem articular de fêmur de ratas. Além disso, o tratamento com estrogénio mostrou pouco ou nenhum impacto sobre os parâmetros medidos.
Descrição
Citação
FERNANDES, Alexandre Saeki. Efeitos da reposição estrogênica na cartilagem articular de fêmur de ratas diabéticas e ovariectomizadas. 2016. 70 f. Dissertação (Mestrado em Biologia Estrutural e Funcional) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.