PPG - Biologia Estrutural e Funcional
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- ItemEmbargoEfeitos do Hidrogel/AnxA12-26 na periodontite em camundongos selvagens e geneticamente deficientes para Anexina A1 (AnxA1-/-)(Universidade Federal de São Paulo, 2024-06) Silva, Bruna Carolina [UNIFESP]; Oliani, Sonia Maria [UNIFESP]; Stabili, Morgana Rodrigues Guimarães ; http://lattes.cnpq.br/6182929017622942; http://lattes.cnpq.br/5102737730539655; http://lattes.cnpq.br/2013164121026399A periodontite é uma inflamação crônica do periodonto, em que os patógenos bacterianos iniciam uma resposta inflamatória local, que estimula o sistema imune inato e pode progredir por meio dos tecidos periodontais pela ação de citocinas e mediadores biológicos. Diversos estudos clínicos e pré-clínicos têm investigado a eficácia de agentes modulatórios da resposta imune no tratamento adjunto da periodontite, e os resultados têm se mostrado promissores. Considerando as diversas atividades biológicas previamente descritas, a proteína Anexina A1 (AnxA1) é uma importante moduladora endógena do processo inflamatório. Várias pesquisas têm mostrado o efeito protetor do peptídeo mimético Ac2-26 nos processos inflamatórios agudos e crônicos em resposta à infecção. No entanto, as ações da AnxA1 têm sido pouco estudadas na periodontite. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da aplicação local do Hidrogel/AnxA12-26 sobre a degradação dos tecidos periodontais mineralizados e não mineralizados, associado a progressão da periodontite em camundongos selvagens (WT) e geneticamente deficientes para AnxA1 (AnxA1-/-). A periodontite foi induzida com ligadura no 1° molar superior de camundongos machos C57BL/6, WT e AnxA1-/-(n = 10/grupo), seguida de aplicações locais de Hidrogel/AnxA12-26 e/ou água destilada (H2Od), por 7 e 14 dias. Os seguintes aspectos foram analisados: análises histopatológicas (Hematoxilina-Eosina, Azul de Toluidina e Picrosirius Red), imuno-histoquímicas para as expressões de ANXA1 e FPR2, ainda TNF-α, MMP-13, Runx2 por RT-qPCR, reabsorção óssea por Microtomografia computadorizada (µCT) e para análises de colágeno a Microscopia por Geração de Segundo-Harmônico (SHG). Após lesão, os animais tratados com Hidrogel/AnxA12-26 não apresentaram reações adversas e as avaliações histopatológicas, após 7 e 14 dias, mostraram redução das células inflamatórias no tecido gengival desse grupo experimental. Enquanto, nos camundongos WT e AnxA1-/-tratados com H2Od observamos exacerbado infiltrado inflamatório e aumento dos mastócitos de mucosa (MMCs). A aplicação local do hidrogel na mucosa diminuiu a expressão do mediador pró inflamatório TNF-α, enquanto nos AnxA1-/-a expressão foi significativamente aumentada. O tratamento Hidrogel/AnxA12-26, pelas análises de Picrosirius e SHG, mostra eficiência para impedir degradação do colágeno na matriz extracelular dos tecidos gengivais e redução na expressão de MMP-13. Diferentemente, os grupos tratados com água destilada apresentam maior perda do colágeno, com fibras desorganizadas e irregulares, e aumento na degradação de MMP-13. A maturação óssea foi avaliada pela expressão de Runx2 nos tecidos periodontais monstrando que os animais AnxA1-/- tiveram redução significativa da expressão de Runx2. Além disso, observamos imunorreatividade para ANXA1-FPR2 nas células ósseas (osteócitos, osteoblastos e osteoclastos) em todos os grupos com periodontite. Na análise de µCT, os camundongos AnxA1-/- demonstram maior perda óssea alveolar em 7 dias, enquanto os tratados com Hidrogel/AnxA12-26 não mostram efeitos significativos na periodontite experimental. No entanto, este tratamento reduz o número de osteoclastos nas lacunas de Howship no período de 7 dias. Em conjunto, nossos resultados mostram que o Hidrogel/AnxA12-26 é um biomaterial compatível com os tecidos gengivais, eficiente na regulação do processo inflamatório e remodelamento tecidual, contribuindo assim para aumentar o arsenal terapêutico na doença periodontal.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Estudo da expressão e metilação dos genes NRN1, TNFAIP3 E LRRC37A2 no câncer gástrico(Universidade Federal de São Paulo, 2024-04-19) Santos, Leonardo Caires [UNIFESP]; Smith, Marília de Arruda Cardoso [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/5761924688385176; http://lattes.cnpq.br/1932895317366751O câncer gástrico (CG) tem elevada incidência e mortalidade no mundo. Estudos dos mecanismos epigenéticos em cancer têm sido realizados com frequência para um melhor entendimento da regulação da expressão gênica e para a identificação de novos biomarcadores. Foi feita uma análise de array de expressão gênica em linhagens de câncer gástrico tratadas e não tratadas com 5-azacitidina, onde encontramos 83 genes que são potencialmente modulados por metilação de DNA em linhagens celulare CG. Nós selecionamos os genes NRN1, TNFAIP3 e LRRC37A2 para serem avaliados quanto a sua expressão e metilação em tecidos gástricos tumorais e não tumorais adjacentes. O aumento da expressão de NRN1 e TNFAIP3 foi associado aos tumores avançados. Observou-se aumento da expressão de NRN1 e TNFAIP3 assossiado a menores níveis de metilação na região promotora. Redução da metilação na região promotora de NRN1 foi associada aos estágios avançados do tumor e presença de infecção por Helicobacter pylori. A diminuição da expressão de LRRC37A2 e aumento de metilação em regiões específicas do seu promotor estão associadas ao pior prognóstico. Esses resultados sugerem que alguns genes podem ser utilizados na prática clínica para estratificar pacientes que estão mais propícios a se beneficiarem por terapias epigenéticas.
- ItemEmbargoEfeito antiapoptótico e antissenescência do açaí liofilizado (Euterpe Oleracea Martius) sobre as células germinativas masculinas(Universidade Federal de São Paulo, 2024-04-15) Mumcu, Merve [UNIFESP]; Vilela, Vanessa Vendramini [UNIFESP]; Gomes, Ana Clara da Costa Nunes [UNIFESP]; https://lattes.cnpq.br/3419372674559999; https://lattes.cnpq.br/7430244790148504; https://lattes.cnpq.br/1795670842574045O açaí (Euterpe oleracea Mart.) possui inúmeras propriedades benéficas à saúde e vem sendo utilizado no tratamento de enfermidades ligadas à síndrome metabólica e ao envelhecimento. O modelo experimental de indução à senescência, utilizando o tratamento de roedores com D-galactose, apresenta características indicativas de comprometimento cognitivo, motor e reprodutivo muito semelhantes àquelas observadas no envelhecimento natural em roedores e tem potencial para mimetizar o perfil de danos que caracterizam a idade paterna avançada. O presente estudo buscou verificar se o açaí protege a integridade da cromatina das células germinativas masculinas, por meio da modulação da expressão de da SIRT1 e ação anti-apoptótica, sob indução à senescência pela D-galactose por 4 semanas de tratamento. Ratos machos (n=24) foram subdivididos em 4 grupos: o grupo DG foi submetido ao tratamento com D-galactose em doses diárias de 200mg/kg de peso corpóreo, por 4 semanas; o grupo DGA recebeu, além do tratamento com a D-galactose, suplementação com 200mg/kg de açaí liofilizado diluído em água destilada, 5 vezes por semana; o grupo controle (C) e açaí (A) receberam, respectivamente, água destilada e açaí. Após os tratamentos, todos os animais foram anestesiados e os órgãos reprodutivos foram coletados e pesados. O tecido testicular foi processado para a quantificação de SIRT1, receptor de leptina, BAX e BCL-2. A quantificação das células germinativas apoptóticas e da qualidade da cromatina dos espermatozóides armazenados na cauda do epidídimo foram verificadas. O monosacarídio D-galactose apresentou acentuado aumento no número de células TUNEL-positivas e redução na qualidade da cromatina, o que foi significantemente revertido pelo açaí. Entretanto a expressão da receptor de leptina, BAX e BCL-2 testiculares, bem como a protaminação do DNA espermático, não apresentaram significância estatística, mas indicaram tendência de alteração para o grupo envelhecido (DG). Nas condições experimentais aqui propostas, a ação antienvelhecimento do açaí, via ativação de SIRT1, apresentou-se como uma tendência, porém, não foi detectada significância estatística quando o grupo suplementado com açaí (DGA) foi comparado ao grupo envelhecido (DG). Os resultados sugerem que o açaí apresenta efeito anti-apoptótico e protetor da qualidade genômica das células germinativas, provavelmente por via de ativação da SIRT1.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Efeito da melatonina sobre o perfil de miRNA de espermatozoides, regiões do cérebro e cerebelo de ratos Wistar(Universidade Federal de São Paulo, 0015-04-24) Nascimento, Mísia Helena da Silva Ferro [UNIFESP]; Teixeira, Taiza Stumpp [UNIFESP]; Amaral, Fernanda Gaspar [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6398402888086154; http://lattes.cnpq.br/1024329256080770Introdução: A melatonina é sintetizada exclusivamente à noite, em diversos organismos. Nos mamíferos, a melatonina se origina nos pinealócitos presentes na glândula pineal. Dentre várias funções associadas a melatonina, a ação e influência do hormônio na espermatogênese é de particular interesse porque os gametas transferem não apenas informações genéticas, mas também epigenéticas para o embrião. Sabe-se que o espermatozoide é rico em miRNAs, que são transferidos para o embrião e podem configurar os mecanismos de herança epigenética paterna. Objetivo: investigar a influência da melatonina afeta a expressão de miRNA nos espermatozoides, regiões do cérebro e cerebelo de ratos. Metodologia: Esse estudo compreendeu três grupos experimentais: PINX, PINX MEL e controle. O primeiro consiste em animais que sofreram remoção da glândula pineal. O grupo PINX MEL foi composto por animais pinealectomizados que tiveram suplementação de melatonina. O grupo controle não sofreu manipulação. Os miRNAs foram extraídos dos espermatozoides, hipotálamo, córtex pré-frontal e cerebelo para análise de sua expressão por RT-qPCR. Foram analisados 8 miRNAs-alvos: miR-18a-5p, miR-34a-5p, miR-106b-5p, miR-132-5p, miR-195-5p, miR-219a-5p, miR-182-5p e Let-7g-5p. Foi realizada também análise de bioinformática buscando compreender as possíveis implicações biológicas das alterações da expressão dos miRNAs analisados. Resultados: Os animais pinealectomizados apresentaram redução da expressão de todos os miRNAs avaliados nos espermatozoides e de alguns desses miRNAs no cérebro e cerebelo. A administração da melatonina exógena levou à restauração da expressão desses miRNAs nos espermatozoides e também em algumas regiões do cérebro. A análise bioinformática indicou que todos os miRNAs analisados estão envolvidos em processos biológicos relacionados a neurogênese, sinapses e ao comportamento. Conclusão: O presente estudo sugere que a deficiência de melatonina afeta de forma significativa a expressão de miRNAs relacionados ao neurodesenvolvimento e à neurofisiologia em espermatozoides de ratos pinealectomizados. Estudos futuros são de grande valia a fim de esclarecer quais os significados biológicos dessas alterações para os animais pinealectomizados e se elas podem ter impacto para sua prole.
- ItemRestritoEfeitos da carbamazepina sobre espermatozoides epididimários e a capacidade reprodutiva de ratos adultos e possíveis impactos sobre o desenvolvimento reprodutivo da prole (geração F1)(Universidade Federal de São Paulo, 2024-01-15) Santos, Marina Nunes dos [UNIFESP]; Oliva, Samara Urban [UNIFESP]; Miraglia, Sandra Maria [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/7489168456011888; http://lattes.cnpq.br/5886968082690915; http://lattes.cnpq.br/7075826792106019INTRODUÇÃO: A carbamazepina (CBZ) é um fármaco amplamente utilizado no controle de convulsões, no tratamento da neuralgia do trigêmeo e de desordens afetivas. Alterações nas características seminais, nos níveis de hormônios sexuais, na espermatogênese e na fertilidade masculina têm sido observadas durante e após tratamentos prolongados com CBZ. Apesar da falta de estudos que evidenciem a ação desse medicamento sobre o epidídimo e o processo de maturação espermática, é importante considerar possíveis efeitos diretos da CBZ nos espermatozoides epididimários, dada sua alta lipossolubilidade. OBJETIVOS: Portanto, este estudo teve como objetivos investigar: a) a possível ação direta da CBZ sobre parâmetros quantitativos, qualitativos e funcionais dos espermatozoides epididimários em ratos adultos; b) os efeitos da CBZ em ratos machos tratados desde a pré-puberdade até a fase adulta sobre o desenvolvimento da genitália externa, qualidade espermática, comportamento sexual e capacidade reprodutiva; c) a possível ocorrência de malformações congênitas na prole de ratos machos tratados com CBZ; d) os efeitos sobre a reprodução masculina em ratos da geração F1. RESULTADOS: Até o momento, nossos resultados indicam impactos substanciais na qualidade espermática e na saúde reprodutiva masculina tanto na exposição aguda quanto na crônica à CBZ. Os espermatozoides epididimários apresentaram uma série de alterações significativas, incluindo redução na motilidade progressiva, deterioração na integridade da cromatina, fragmentação do DNA nuclear e alterações morfológicas, particularmente nas regiões da cabeça e cauda do espermatozoide. Além disso, é importante destacar que, apesar de não terem sido observadas alterações no comportamento sexual dos animais tratados cronicamente com CBZ, foram identificadas alterações placentárias significativas em animais submetidos a essa exposição crônica. Adicionalmente, observou-se a ocorrência de alterações esqueléticas na prole desses animais. CONCLUSÕES: As alterações espermáticas quantitativas e qualitativas observadas em diferentes protocolos de tratamento, níveis de dosagem de CBZ e em grupos etários enfatizam os efeitos multifacetados da CBZ na espermatogênese e maturação espermática.