Navegando por Palavras-chave "Tiorredoxinas"

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    Estudo da associação da TXNIP com as ERK1/2 MAP Quinases durante a migração nuclear da Tiorredoxina induzida por óxido nítrico
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2008) Ogata, Fernando Toshio [UNIFESP]; Monteiro, Hugo Pequeno [UNIFESP]
    O sistema da Tiorredoxina (TRX) altamente conservado durante o processo de evolucao dos seres vivos, e um dos mantenedores do estado redox intracelular. No modelo experimental utilizado no desenvolvimento deste trabalho - celulas tumorais humanas HeLa, expostas aos agentes estressores peroxido de hidrogenio, H2O2, ou o nitrosotiol S-nitroso-N-acetilpenicilamina (SNAP) -, observamos que a TRX antes retida no citoplasma, acumulava-se no nucleo em um processo dependente da via das MAPKs ERK 1/2. Mostramos com o desenvolvimento de nosso trabalho que esta ativacao das MAPKs diminui a expressao de uma proteina reguladora dos niveis citoplasmaticos da TRX, a TXNIP. Por outro lado, quando nao permitimos que ocorra a diminuicao da expressao da TXNIP ou quando incrementamos os niveis de expressao desta proteina, o processo de migracao nuclear da TRX nao acontece. Com estas observacoes avancamos rumo ao entendimento do papel da TRX em processos como aqueles associados a sobrevivencia de celulas quando expostas a condicoes de estresse.
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    Estudo do envolvimento da proteína tiorredoxina-1 na morte celular induzida por óxido nítrico associado ao metabolismo de nitrosotióis
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2006) Arai, Roberto Jun [UNIFESP]; Monteiro, Hugo Pequeno [UNIFESP]
    As interações do NO ou das espécies reativas dele derivados com proteínas celulares possuem um critico papel no mecanismo de sinalização celular, sendo em parte reguladas por sistemas redutores intracelulares. Dentre eles, a proteína redutora de 12kDa TRX-l possui uma importante função na manutenção redox de proteínas. Entretanto, o papel da TRX-l no mecanismo de restauração de proteínas modificadas covalentemente pelo NO não está bem esclarecido. Neste estudo, nós investigamos o efeito da superexpressão da proteína TRX- I no controle dos níveis de nitrosotióis e nitrotirosinas e seu impacto na viabilidade celular e na sinalização anti-apoptótica. O papel da expressão da TRX-I na viabilidade de células HeLa expostas a concentrações crescentes de aSNO foi inicialmente demonstrado pela diminuição da expressão TRX-l e pela indução da ativação da CPP32 e da morte celular. Em seguida, a indução da expressão da TRX- I em células HeLa utilizando o sistema de expressão condicional (Tet-system), conferiu maior resistência à morte celular promovida pelo aSNO. Nestas células, nós observamos um significante decréscimo dos níveis de nitrosotióis e um robusto aumento dos níveis de nitrito e nitrotirosinas. O envolvimento de sinalizadores intracelulares envolvidos no mecanismo da viabilidade celular ERKI/2, p38 e JNKI/2 foi investigado. Em células HeLa parentais, nossos achados indicaram um critico papel das MAP quinases ERK 1/2 na resistência ao aSNO. Em concordância, a superexpressão da TRX-l resultou no aumento da atividade basal de EIq<.I/2 e um robusto aumento de sua atividade em células tratadas com aSNO. Portanto, o aumento da resistência celular ao nitrosotiol conferido pela superexpressão da TRX-l pode estar associado ao aumento da capacidade celular em catabolizar nitrosotióis e ao aumento da atividade da sinalização anti-apoptótica via MAP quinases ERK1/2.
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    Acesso aberto (Open Access)
    Importância da tiorredoxina-1 nos efeitos citotóxicos diferenciais dos s-nitrosotióis-aril-butanamidas sobre linhagens celulares humanas normais e de carcinoma mamário
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2019-02-28) Fugimoto, Mariana [UNIFESP]; Monteiro, Hugo Pequeno [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6154759166234850; http://lattes.cnpq.br/0116205876238766; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
    Female breast cancer is the one that affects most women worldwide, and it is classified according to the estrogen receptor (ER) expression, with ER- tumors being more aggressive and having worse prognosis. Nitric oxide (NO) is a gaseous free radical produced by organisms distributed through all phyla, acting as a signaling mediator in various cell types. NO-mediated cellular signaling occurs through post-translational modifications in proteins, responsible for physiological as well as pathological mechanisms. The manipulation of endogenous NO concentrations through administration of NO donors would be an interesting and viable method of therapy, with unexplored therapeutic potential. In physiological conditions, cells remain in a reducing environment, and its redox balance is maintained by antioxidant systems, such as the Thioredoxin-1 system (Trx-1), which has been shown to be overexpressed in several cancers and associated with aggressive tumor growth, resistance to conventional therapies, and decreased survival rates. Trx-1 is an appropriate molecular target for the study of the regulation of these processes, as well as in the development of new compounds that aim to alter the availability of this protein and of cell oxidants that may alter the cellular environment. Purpose: The objective of this study was to test the susceptibility of different cell lines to concentrations of S-nitrosothiols ortho and meta-chloro-SNOKs, in order to characterize them as compounds with antitumor activity that would exert their cytotoxic action preferentially on tumor cell lines. Methods: Four cell lines were used - two human breast cancer cell lines, one ER+ (MCF-7) and one ER- (MDA-MB-231); and two normal human mammary cell lines (HUVEC and MCF-10A). All cell lines were tested for viability assays, measurement of intra- and extracellular NO concentrations, cell death verification, and expression level of Pro-Caspase 3, PARP, cleaved PARP and Trx-1 proteins. Results: Differential toxicity of SNOKs to tumor lineages was demonstrated in cell viability assays and cell death assay. These results were correlated with higher intra and extracellular NO concentrations found in the tumor cell lines after incubation with the compounds. Differential toxicity was related to an xxiv apoptotic process due to a lower expression of Pro-Caspase 3 and Trx-1 proteins, and presence of cleavage of PARP protein. Conclusion: The studied compounds stimulate proliferation and/or maintain cell viability in the tumor cell lines when incubated at low concentrations, while inducing cell death at higher concentrations. These compounds presented molecular characteristics that make them as potential chemotherapeutic agents in the treatment of several types of cancer. Given the relevance of the results and potential chemotherapy to be explored further investigation of the mechanisms and pathways presented here would be of great clinical relevance in the future.
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    Regulação da expressão gênica de TXNIP, inibidora fisiológica da tiorredoxina, sob estímulo de espécies reativas do oxigênio e do nitrogênio
    (Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Ogata, Fernando Toshio [UNIFESP]; Monteiro, Hugo Pequeno [UNIFESP]
    A Tiorredoxina (Trx-1) e uma proteina multifuncional, constituida de 105 residuos de aminoacidos. Trx-1 desempenha papeis distintos, podendo atuar como uma quimiocina no meio extracelular ou regular o ambiente redox intracelular. Ao exercer este papel regulador pode tambem atuar no nucleo como moduladora da atvidade de fatores de transcricao. Neste contexto, os processos que regulam a atividade de Trx-1 tambem sao muito importantes. Nosso grupo de pesquisa tem investigado os mecanismos pelos quais ocorre a migracao nuclear da Trx-1 mediante a estresse provocado por especies reativas (do oxigenio ou do nitrogenio) e as relacoes deste evento com a sobrevivencia ou morte celular. Anteriormente foi mostrado que a migracao nuclear da Trx-1 estimulada por condicoes de estresse nitrosativo estava associada a ativacao da via Ras u ERK1/2 MAP quinases. Neste trabalho, focou-se na investigacao do controle da expressao da proteina reguladora fisiologica da Trx-1, TXNIP (Thioredoxin binding protein u Thioredoxin interacting protein) e o envolvimento deste mecanismo com a migracao nuclear de Trx-1. Os resultados demonstram que sob condicoes de estresse oxidativo/nitrosativo ocorre a diminuicao da expressao de TXNIP, esta acontece em multiplos niveis (regulacao do promotor, microRNAs e niveis da proteina) e que a ativacao da via Ras u ERK1/2 MAP quinases e importante para regular este mecanismo. Alem disso, a expressao de TXNIP esta diretamente relacionada a localizacao intracelular de Trx-1: quando aquela esta aumentada, nao ha translocacao desta apos estresse; ja na ausencia da primeira, por silenciamento, a segunda encontra-se no nucleo na condicao controle, nao observada na linhagem parental