Navegando por Palavras-chave "Células-Tronco Adultas"
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- ItemSomente MetadadadosCaracterizacao do cultivo ex vivo de celulas epiteliais conjuntivais humanas sobre membrana amniotica(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2012) Silber, Paulo Caldas [UNIFESP]Objetivo: Caracterizar as celulas obtidas atraves cultivo ex vivo por expansao epitelial de fragmento conjuntival humano sobre membrana amniotica. Metodos: Fragmentos de conjuntiva de 4 x 2 mm foram coletados do fornice conjuntival de nove doadores vivos, que foram submetidos a cirurgia de pterigio. Todos os doadores assinaram termo de consentimento de acordo com o Comite de Etica da UNIFESP/EPM antes do procedimento. Cada fragmento de conjuntiva foi levado ao laboratorio de superficie ocular. Em ambiente esteril, o tecido foi dividido em dois fragmentos: um foi cultivado sobre membrana amniotica desepitelizada; o outro, em placa de cultura. As culturas foram incubadas com DMEM/HAMÆs F12 a 37ºC e 5% de CO2. Os meios de cultura foram trocados a cada dois dias por tres semanas. Apos esse periodo, as culturas sobre as placas foram fixadas para analise imunocitoquimica com citoqueratinas epiteliais (CK3, CK19), marcadores de proliferacao (Ki-67), marcador para celulas indiferenciadas (p63) e marcador para celulas-tronco (ABCG2). Os mesmos marcadores foram utilizados nas culturas sobre as membranas com atraves de imunofluorescencia. Foram realizadas tambem citologia de impressao para coloracao com HE/PAS e microscopia eletronica de transmissao. Resultados: As celulas conjuntivais de nove biopsias expandiram-se com sucesso tanto na placa de cultura quanto sobre a membrana amniotica. O crescimento sobre a placa foi estatisticamente mais significativo que sobre a membrana amniotica a partir do 10° dia de cultura (p<0,01). A partir do 14° dia de cultura, essa diferenca tornou-se maior (p<0,001). A citologia de impressao mostrou epitelio cuboide compacto, entremeado por celulas caliciformes. A microscopia eletronica demonstrou a presenca de epitelio conjuntival estratificado, evidenciando microvilosidades nas celulas mais superficiais e celulas basais com sinais de intensa atividade metabolica. A analise imunocitoquimica mostrou positividade para os anticorpos para os antigenos Ki-67(66,01), CK3(53,56%), CK19(24,39%), p63(16,69%) e ABCG2(10,35%). Na imunofluorescencia a positividade foi expressiva para todos os marcadores testados. Conclusao: Os resultados demonstram que as celulas cultivadas pelo metodo da espansao epitelial ex vivo mostram um padrao fenotipico adequado para celulas conjuntivais, mostrando um tecido estratificado, diferenciado, mas com presenca de celulas primordiais. Esse metodo representa uma alternativa na terapeutica para muitas doencas de superficie ocular
- ItemAcesso aberto (Open Access)Characterization of human adipose-derived stem cells(Sociedade Brasileira para o Desenvolvimento da Pesquisa em Cirurgia, 2012-07-01) Gaiba, Silvana; França, Lucimar Pereira De; França, Jerônimo Pereira De; Ferreira, Lydia Masako [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)PURPOSE: There is a growing scientific interest in the plasticity and therapeutic potential of adipose-derived stem cells (ASCs), which are multipotent and abundant in adipose tissue and can differentiate in vitro into multiple lineages, including adipocytes, chondrocytes, osteoblasts, neural cells, endothelial cells and cardiomyocytes. The aim of this study was to isolate, cultivate and identify ASCs. METHODS: Human adipose precursor cells were obtained from subcutaneous abdominal tissue. Recently dispersed cells were separated by density centrifugation gradient, cultured and then analyzed. RESULTS: Human ASCs were able to replicate in our culture conditions. The cells maintained their phenotypes throughout the studied period on different passages confirming they suitability for in vitro cultivation. We also induced their adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation, verifying their mesenchymal stem cells potentiality in vitro. Flow cytometry results showed that these cells expressed CD73, CD90 and CD105, (mesenchymal stem-cells markers), contrasting with the lack of expression of CD16, CD34 and CD45 (hematopoietic cells markers). CONCLUSION: It was possible to isolate human adipose-derived stem cells by in vitro cultivation without adipogenic induction, maintaining their functional integrity and high proliferation levels. The cells demonstrated adipogenic, osteogenic and chondrogenic differentiation potential in vitro.
- ItemAcesso aberto (Open Access)Comparação de diferentes meios para o cultivo ex vivo de células epiteliais do limbo(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2013) Loureiro, Renata Ruoco [UNIFESP]; Nishi, Mauro [UNIFESP]; http://lattes.cnpq.br/6155425562548936; http://lattes.cnpq.br/2496083182527463; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)Objetivo: Comparar a eficacia de tres diferentes meios de cultura para o crescimento, diferenciacao, proliferacao e viabilidade de celulas-tronco epiteliais do limbo cultivadas ex vivo. Metodos: As culturas de celulas epiteliais do limbo foram estabelecidas a partir de 10 rimas corneo-esclerais cultivadas em tres diferentes meios de cultura: Supplemental Hormonal Epithelial Medium (SHEM), Keratinocyte Serum-Free Medium (KSFM) e Epilife. O desempenho das culturas de celulas epiteliais do limbo em cada meio foi avaliado de acordo com os seguintes parametros: area de crescimento e migracao epitelial; imunocitoquimica para ATP-binding cassette member 2 (ABCG2), p63, Ki67, citoqueratina 3 (CK3) e vimentina (VMT); reacao em cadeia da polimerase via transcriptase reversa (RT-PCR) em tempo real para CK3, ABCG2 e p63, e viabilidade celular utilizando a coloracao Hoechst. Resultados: As celulas epiteliais do limbo cultivadas em SHEM apresentaram migracao mais rapida, em comparacao com KSFM e Epilife. A analise imunocitoquimica evidencia que as celulas cultivadas em meio SHEM apresentaram menor expressao de marcadores relacionados com celulas-tronco epiteliais (ABCG2), e celulas indiferenciadas (p63), e maior porcentagem de celulas positivas para epitelio diferenciado (CK3), quando comparado com KSFM e Epilife. Na analise da RT-PCR, a expressao de ABCG2 foi estatisticamente maior para Epilife em comparacao ao SHEM. A expressao de p63 foi estatisticamente maior para Epilife quando comparada com SHEM e KSFM. Por outro lado, expressao de CK3 foi significativamente menor em KSFM quando comparada com SHEM. Conclusao: Com base em nossos resultados, concluimos que as celulas cultivadas nos meios KSFM e Epilife apresentaram maior porcentagem de celulas-tronco epiteliais limbicas, quando comparadas com as celulas cultivadas no meio SHEM
- ItemAcesso aberto (Open Access)Comparative study of technique to obtain stem cells from bone marrow collection between the iliac crest and the femoral epiphysis in rabbits(Sociedade Brasileira para o Desenvolvimento da Pesquisa em Cirurgia, 2009-10-01) Eça, Lilian Piñero Marcolin; Ramalho, Renata Belmonte; Oliveira, Isis Sousa [UNIFESP]; Gomes, Paulo Oliveira [UNIFESP]; Pontes, Paulo [UNIFESP]; Ferreira, Alice Teixeira [UNIFESP]; Mazzetti, Marcelo Paulo Vaccari [UNIFESP]; Stem Cell Research Institute; Sacred Heart University; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP); Lusiada University of Santos Department Plastic SurgeryPURPOSE: To assess the technique for the collection of rabbit bone marrow stem cells from different regions to be used as an experimental model in regenerative medicine. METHODS: Thirty rabbits were allocated into 2 groups: GROUP A, n=8, animals that underwent bone marrow blood (BMB) harvesting from the iliac crest; and GROUP B: including 22 rabbits that underwent BMB harvesting from the femur epiphysis. After harvesting, mononuclear cells were isolated by density gradient centrifugation (Ficoll - Histopaque). The number of mononuclear cells per ml was counted in a Neubauer chamber and cell viability was checked through Tripan Blue method. RESULTS: Harvesting from the iliac crest yielded an average of 1 ml of BMB and 3,6.10(6) cells/ml over 1 hour of surgery, whereas an average of 3ml of BMB and 11,79.10(6) cells./ml were obtained in 30 min from the femur epiphysis with a reduced animal death rate. CONCLUSION: The analysis for the obtention of a larger number of mononuclear cells/ml from rabbit bone marrow blood was more satisfactory in the femur epiphysis than in the iliac crest.
- ItemSomente MetadadadosModulacao do fenotipo de celulas tronco cultivadas sobre bioceramicas de fosfato de calcio(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2011) Lobo, Sonja Ellen [UNIFESP]O tecido osseo e o segundo tecido mais comumente transplantado em todo o mundo e sua perda representa um problema de Saúde publica de dificil solucao. Os procedimentos de enxertia comumente utilizados para as reconstrucoes de grandes perdas osseas baseiam-se em enxertos autologos, homologos, xenologos ou aloplasticos, todos porem com importantes vantagens e desvantagens. Desta forma, a engenharia de tecidos, baseada na premissa de que a associacao de celulas tronco a matrizes e/ou moleculas bioativas pode suportar e favorecer a osteogenese, tem recebido grande enfase e corresponde a mais promissora alternativa terapeutica. Celulas tronco com comprovado potencial osteogenico tem sido isoladas de diferentes tecidos; da mesma forma, matrizes (biomateriais ou scaffolds) de distintas origens, composicoes quimicas e estruturas fisicas tem sido estudadas e consideradas como potenciais carreadores para essas celulas. Desta forma, o estabelecimento de parametros e caracteristicas a serem apresentados pelos biomateriais, assim como a definicao da melhor fonte de ceulas tronco a serem associados aos mesmos e de suma importancia. Este estudo teve como objetivos: 1- analisar a capacidade osteogenica de celulas tronco mesenquimais humanas associadas a seis tipos de bioceramicas bifasicas de fosfatos de calcio; 2- comparar a modulacao do fenotipo de celulas tronco isoladas de diversos tecidos (medula ossea, tecido adiposo e polpa dental) assim como de pre-osteoblastos, quando cultivadas sobre a bioceramica que apresentar melhores resultados na primeira parte deste estudo. Para tanto, a adesao celular, viabilidade e proliferacao das celulas sobre as bioceramicas assim como a expressao de genes responsaveis pelo cometimento das celulas indiferencidadas com a linhagem osteogenica foram quantificados. Ademais, as sinteses de fosfatase alcalina e osteocalcina tambem foram mensuradas. Este estudo demonstrou que tanto a composicao quimica quanto as caracteristicas fisicas dos biomateriais influenciam no comportamento das celulas tronco. Dentre os seis tipos de bioceramicas analisadas (3 em forma de granulos e 3 em forma de blocos) evidenciou-se que os granulos permitiram maior proliferacao de celulas quando comparados aos blocos. Alem disso, dentre os granulos, os de particulas correspondentes a 20-40 mesh promoveram um significante aumento de expressao de sialoproteina ossea e osteopontina pelas celulas tronco mesenquimais. Esta expressao foi maior nos grupos onde as celulas foram cultivadas em meio de cultura controle, comparados aos grupos onde as celulas foram cultivadas em meio de cultura para diferenciacao osteogenica. Quando da comparacao do comportamento de celulas tronco mesenquimais com as celulas do tecido adiposo e da polpa dental, esse mesmo biomaterial foi capaz de promover uma regulacao positiva (upregulation) do genes responsaveis pelo cometimento de celulas indiferenciadas com a linhagem osteocondroblastica (Runx2 e SOX9) nos tres tipos celulares estudados. Tal regulacao tambem foi maior no meio de cultura controle, quando comparado ao meio de cultura para diferenciacao osteogenica e o tempo de ocorrencia dessa regulacao positiva variou de acordo com o tipo celular. Quando da utilizacao do meio de cultura para diferenciacao osteogenica, houve uma tendencia de diminuicao da expressao de SOX9 com um aumento da expressao de PPARγ. Com relacao aos pre-osteoblastos, a expressao de sialoproteina ossea foi observada somente quando essas celulas foram cultivadas sobre as bioceramicas e da mesma forma, tal expressao foi maior em meio de cultura controle quando comparado ao meio de inducao osteogenica. Essses dados estao em concordancia com o conceito de osteoinducao intrinsica das bioceramicas, demonstrado ate o momento somente pela formacao ossea ectopica in vivo, atraves do uso de alguns biomateriais de fosfatos de calcio, sem a adicao de qualquer molecula bioativa ou fator de crescimento externo. Os mecanismos moleculares responsaveis por tal regulacao ainda necessitam ser esclarecidos. O comportamento in vivo e a longo prazo da utilizacao de celulas tronco derivadas do tecido adiposo para reconstrucoes osseas, requer maiores exploracoes, devido a constante expressao de PPARγ. Alem disso, a possivel diferenciacao odontoblastica das celulas tronco derivadas da polpa dental tambem requer analises in vivo a longo prazo, para que estas possam ser consideradas para aplicacoes clinicas, em reconstrucoes osseas. Concluiu-se que as bioceramicas bifasicas de fosfatos de calcio representam uma excelente alternativa para serem utilizadas como carreadoras de celulas tronco e sao capazes de modularem o fenotipo das mesmas, induzindo-as para o cometimento com a linhagem osteogenica. Assim, algumas bioceramicas bifasicas sao osteoindutoras, e nao somente osteocondutoras, e sua associacao com celulas tronco da medula ossea abre novas perspectivas para o tratamento de pacientes portadores de grandes perdas osseas
- ItemSomente MetadadadosSexualidades E Identidades De Gênero No Contexto Do Cárcere: Representações Sociais De Jovens Presidiárias(Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), 2017-06-29) Moraes, Silvia Piedade De [UNIFESP]; Bretas, Jose Roberto Da Silva [UNIFESP]; Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)This qualitative research had as objective to know the Social Representations of young people of the female prison system on sexuality, gender identities, affective-sexual orientation, sexual practices and behaviors associated with the experience of desire and sexuality in the prison system. The study included 30 women aged between 18 and 29 years in prison at the Santana Women's Penitentiary in São Paulo. As a theoretical-methodological contribution, the Theory of Social Representations and Queer Theory were used. The narratives were organized in ten thematic maps and a profile of the participants in short stories. The study concludes that women experience relationships of vulnerability before going to jail, but do not submit to the role of victim. It is perceptible how they appropriate autonomy and how it impacts their intimate relationships in prison. Most have affective-sexual relationships with other women without giving themselves sexual orientation or gender identity. Sexuality has proved to be a fluid and open field of wide possibilities and filled with strategies of resilience and pleasure. The relationships between them are organized in a binary way, emphasizing that the subjects who carry expressions of masculinities have a greater decision on the intimacy of the couple. For many, prison was the opportunity to meet orgasm and open up to new possibilities of desire. The state was pointed out as failing to establish sexuality as a human right guaranteed by law.