Efeito da fragmentação de dna espermático no desenvolvimento e no perfil lipídico de blastocistos de camundongos

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dc.audience.educationlevelDoutorado
dc.contributor.advisorLopes, Paula Intasqui [UNIFESP]
dc.contributor.authorMelo, Augusto Azzolini De [UNIFESP]
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)pt
dc.date.accessioned2021-01-19T16:32:23Z
dc.date.available2021-01-19T16:32:23Z
dc.date.issued2019-12-17
dc.description.abstractObjectives: To evaluate the effect of sperm DNA fragmentation on the development and metabolism of mice blastocysts. Method: Male FVB/NJ and female C57BL/6J mice were used. Initially, a study to validate an experimental model of sperm DNA fragmentation induction was performed. For this, thirteen males were submitted to testicular heat stress (Heat stress group, n=13), and fourteen males, not submitted to heat stress, formed the control group (n=14). In these groups, sperm concentration, motility and DNA fragmentation by an alkaline comet assay were analyzed. With the validation of this model, two substudies were performed, to evaluate the effect of sperm DNA fragmentation on: (1) embryos produced by in vitro fertilization and cultivated until the blastocyst stage, and (2) embryos fertilized in vivo and collected on blastocyst stage. Embryos from the Control and Heat stress groups were evaluated regarding their development, using cleavage rate, blastocyst rate, and viability rate, and lipid profile, by mass spectrometry (microQTOF-QII). Groups were compared using an unpaired Student’s t test or the Mann-Whitney test (p<0.05). Results: In the validation of the experimental model, groups did not differ regarding sperm concentration and motility. However, the Heat stress group presented an increase in sperm DNA fragmentation. In both substudies, groups did not differ regarding cleavage rate (only for substudy 1), blastocyst rate and percentage of viable cells. On the other hand, blastocysts from the Heat stress group presented a decrease in total cell count when compared to those of the Control group. In substudy 1, the Heat stress group presented an increase in the flavonoids class of lipids. In substudy 2, this group presented a decrease in the glycerolipids, fatty acids, sphingolipids, and glycerophospholipids categories. Conclusion: The proposed experimental model of sperm DNA fragmentation induction through heat stress allowed the study of the effects of sperm DNA fragmentation on embryo development. Embryos generated with sperm from mice induced to high sperm DNA fragmentation do no present alterations on their development, but present a decreased total number of cells. On the other hand, embryo lipid profile is altered due to sperm DNA fragmentation.en
dc.description.abstractObjetivos: Avaliar o efeito da fragmentação de DNA dos espermatozoides no desenvolvimento e no perfil lipídico de blastocistos de camundongos. Método: Foram utilizados camundongos machos da linhagem FVB/NJ e fêmeas da linhagem C57BL/6J. Primeiramente, foi realizado um estudo para validação do modelo experimental de indução da fragmentação do DNA dos espermatozoides. Para isso, treze machos foram submetidos ao estresse térmico testicular (grupo Estresse térmico, n=13) e quatorze machos constituíram o grupo controle, não submetido ao estresse térmico (n=14). Nesses grupos, foram analisadas a concentração, motilidade e fragmentação do DNA dos espermatozoides por ensaio cometa alcalino. Uma vez validado o modelo, dois subestudos foram realizados, para avaliar o efeito da fragmentação do DNA dos espermatozoides em: (1) embriões fertilizados in vitro e cultivados até o estágio de blastocisto e (2) embriões fertilizados in vivo, por cópula dos animais, e coletados em estágio de blastocisto. Os embriões dos grupos Controle e Estresse Térmico foram avaliados quanto ao seu desenvolvimento através da taxa de clivagem, taxa de blastocisto e viabilidade embrionária, e quanto ao seu perfil lipídico por espectrometria de massas (microTOF-QII). Os grupos foram comparados pelo teste t de Student ou pelo teste de Mann-Whitney (p<0,05). Resultados: Na validação do modelo experimental, os grupos não diferiram quanto à concentração e motilidade dos espermatozoides. Entretanto, o grupo Estresse térmico apresentou maior fragmentação do DNA dos espermatozoides. Em ambos os subestudos, os grupos não diferiram quanto à taxa de clivagem (apenas subestudo 1) e de blastocisto e à porcentagem de células viáveis. Por outro lado, os blastocistos do grupo Estresse térmico apresentaram um total de células menor do que os do grupo Controle. No subestudo 1, o grupo Estresse térmico apresentou um aumento na classe de lipídeos flavonoides. No subestudo 2, este grupo apresentou uma diminuição nas categorias glicerolipídeos, ácidos graxos, esfingolipídeos e glicerofosfolipídeos. Conclusão: O modelo de indução de fragmentação do DNA dos espermatozoides por estresse térmico permitiu o estudo experimental dos efeitos da fragmentação do DNA dos espermatozoides no desenvolvimento embrionário. Os embriões originados de espermatozoides de camundongos induzidos à alta fragmentação de DNA não apresentam alterações em seu desenvolvimento embrionário, apesar de apresentarem um número total de células menor. Por outro lado, o perfil de lipídeos dos embriões é alterado pela fragmentação do DNA dos espermatozoides.pt
dc.description.sourceDados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2019)
dc.identifierhttps://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=8222381pt
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59460
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsAcesso restrito
dc.subjectBlastocysten
dc.subjectDna Fragmentationen
dc.subjectEmbryonic Developmenten
dc.subjectFertilization In Vitroen
dc.subjectLipidsen
dc.subjectBlastocistopt
dc.subjectDesenvolvimento Embrionáriopt
dc.subjectFertilização In Vitropt
dc.subjectFragmentação Do Dnapt
dc.subjectLipídeospt
dc.titleEfeito da fragmentação de dna espermático no desenvolvimento e no perfil lipídico de blastocistos de camundongospt
dc.typeTese de doutorado
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicinapt
unifesp.graduateProgramMedicina (Urologia)pt
unifesp.knowledgeAreaReprodução Humana E Andrologiapt
unifesp.researchAreaEstudo Do Desenvolvimento Embrionário, De Células-Tronco Embrionárias E Mesenquimais E De Células De Pluripotência Induzidapt
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