Efeito do peptídeo mimético Ac9-22, derivado da Anexina A1, sobre a degeneração e regeneração muscular esquelética, induzida pelo veneno da serpente Bothrops asper

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dc.contributor.advisorMoreira, Vanessa [UNIFESP]
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/1310560200014128pt_BR
dc.contributor.authorAlecrim, Nicolas Nascimento [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/7793670939300094pt_BR
dc.coverage.spatialSão Paulopt_BR
dc.date.accessioned2022-03-02T15:41:44Z
dc.date.available2022-03-02T15:41:44Z
dc.date.issued2022-02-09
dc.description.abstractOs acidentes ofídicos são um problema de saúde pública de ordem mundial, sendo que na América Latina, a maioria dos acidentes são causados pelas serpentes do gênero Bothrops, os quais caracterizados por manifestações clínicas sistêmicas e locais. Dentre os efeitos locais destacamos a mionecrose, alterações na matriz extracelular, ruptura da microcirculação e proeminente reação inflamatória, as quais são causados por miotoxinas fosfolipásicas e metaloproteinases. Estas alterações locais prejudicam o processo de regeneração do tecido muscular, podendo resultar em fibrose e possível perda de função muscular. A soroterapia antiofídica é eficiente no tratamento dos efeitos sistêmicos, mas não é efetiva para sanar os efeitos locais causados pelo veneno, como a inflamação e a injúria tecidual. Com isso, se faz necessário a investigação de novos agentes para terapias auxiliares ao tratamento. A Anexina 1 (AnxA1), uma proteína endógena localizada na superfície de vários tipos celulares, exerce efeitos biológicos variados em diversos sistemas, como atividade anti-inflamatória, manutenção de integridade do citoesqueleto e da matriz extracelular, apoptose, além de estimulação de proliferação e diferenciação celular. Neste contexto, os peptídeos miméticos da AnxA1 podem ser considerados novas fontes de moléculas terapêuticas, pois mantêm a atividade da proteína endógena. O objetivo do presente estudo foi testar a atividade do peptídeo Ac9-22, derivado da AnxA1, sobre a degeneração e regeneração do tecido muscular esquelético, após injúria induzida pelo veneno de serpente Bothrops asper (VBa), quanto: i) à função contrátil do tecido e ii) à produção de TGFβ, IL-1β, IL-6 e VEGF. Grupos distintos de camundongos Swiss machos (CEUA 1996230920) receberam VBa i.m. (50 µg/50 µL) no músculo gastrocnêmio direito ou solução salina (SS) no músculo contralateral (controle). Após 30 min, 24, 48 e 72 h da injeção i.m., grupos distintos de camundongos foram tratados por via intraperitoneal (i.p.) com Ac9-22 (1 mg/kg), ou SS. Após 3, 7 e 28 dias do tratamento i.m., os músculos foram coletados para análise da função contrátil (curva de força X frequência e curva de fadiga), além de quantificação de IL-1β, IL-6, TNF-α e VEGF em homogenato do tecido muscular por enzimaimunoensaio. No período de regeneração (28 dias), os músculos dos animais tratados com VBa i.m. e SS i.p. apresentaram maior resistência à fadiga (p<0,05) quando comparados aos grupos controles (SS i.m.+ SS i.p.), enquanto o músculo do grupo tratado com VBa i.m. e Ac9-22 i.p. apresentou resistência à fadiga similar ao grupo SS i.m. + SS i.p. (controle). Quanto ao teste de força X frequência não foram obtidas alterações significativas entre os grupos estudados. Animais tratados com Ac9-22 i.p. apresentaram elevada produção VEGF tecidual (p<0,05), após 7 e 28 dias do tratamento com VBa i.m, quando comparados aos animais VBa i.m.+ SS i.p. dos mesmos períodos. Na fase degenerativa (3 dias) animais VBa+Ac9-22 apresentaram diminuição significativa (p<0,05) dos níveis teciduais de IL-1β, mas não de IL-6 e TNF-α, comparados aos grupos VBa.+SS. Por outro lado, músculos de animais VBa+Ac9-22 apresentaram aumento significativo (p<0,05) de produção de IL-1β, IL-6, TNF-α, (p<0,05), no período inicial da regeneração (7 dias), quando comparados aos respectivos grupos VBa+SS. A partir dos resultados obtidos, o peptídeo mimético da ANX1, Ac9-22, é capaz de promover eventos que levam à aceleração e recobramento da atividade funcional do tecido muscular em regeneração, por meio da ativação de agentes pró-angiogênico e pró-miogênico, e por diminuir o processo inflamatório agudo e degenerativo, por inibir produção de citocinas pro-inflamatórios, induzida pela injeção do VBa. Dessa maneira, este peptídeo pode ser considerado um potencial protótipo terapêutico, para ser aplicado no tratamento e melhora da qualidade da regeneração do tecido muscular esquelético, após injúria causado pelo envenenamento botrópico.pt_BR
dc.description.abstractSnake bites are a public health problem of the world order, and in Latin America, most accidents are caused by Bothrops genus snakes, which causes local and systemic clinical manifestations. Among the local effects, we highlight myonecrosis, changes in the extracellular matrix, disruption of microcirculation, and prominent inflammatory reaction. These symptoms are caused by phospholipase myotoxins and metalloproteinases, which impairs the muscle tissue regeneration process, possibly resulting in fibrosis and loss of muscle function. Antivenom serotherapy is efficient to treat systemic effects, but not the local effects caused by the venom inoculation, such as inflammation and the local injury, highlighting the need to investigate new biomolecules for auxiliary therapies as treatment. Annexin 1 (AnxA1), an endogenous protein located on the surface of several cell types, exerts various biological effects in different body systems, such as anti-inflammatory activity, maintenance of cytoskeleton and extracellular matrix integrity, apoptosis, in addition to stimulation of proliferation and cell differentiation. In this context, AnxA1 mimetic peptides can be considered new sources of therapeutic molecules, as they maintain the activity of the endogenous protein. The aim of the present study was to evaluate the activity of the peptide Ac9-22, derived from AnxA1, on the degeneration and regeneration of skeletal muscle tissue, after injury induced by the Bothrops asper snake venom (VBa), regarding: i) the contractile function of the tissue and ii) the production of TGFβ, IL-1β, IL-6 and VEGF. Separate groups of male Swiss mice (CEUA 1996230920) received VBa i.m. (50 µg/50 µL) in the right gastrocnemius muscle, or saline solution (SS) in the contralateral muscle (control). After 30 min, 24, 48 and 72 h of i.m. injection, separate groups of mice were treated intraperitoneally (i.p.) with Ac9-22 (1 mg/kg), or SS. After 3, 7 and 28 days of im treatment, the muscles were collected for analysis of contractile function (strength x frequency curve and fatigue curve), in addition to quantification of IL-1β, IL-6, TNF-α and VEGF in muscle tissue homogenate by enzyme immunoassay. In the regeneration period (28 days), the muscles of the animals treated with VBa i.m. and SS i.p. showed greater resistance to fatigue (p<0.05) when compared to the control groups (SS i.m.+ SS i.p.), while the muscle of the group treated with VBa i.m. and Ac9-22 i.p. showed fatigue resistance similar to the SS i.m. + SS i.p. (control). As for the strength X frequency test, no significant changes were obtained between the studied groups. Animals treated with Ac9-22 i.p. showed high tissue VEGF production (p<0.05), after 7 and 28 days of treatment with VBa i.m., when compared to VBa i.m.+ SS i.p. of the same periods. In the degenerative phase (3 days) VBa+Ac9-22 animals showed a significant decrease (p<0.05) in tissue levels of IL-1β, but not of IL-6 and TNF-α, compared to VBa+SS groups. On the other hand, muscles from VBa+Ac9-22 animals showed a significant increase (p<0.05) in the production of IL-1β, IL-6, TNF-α, (p<0.05) in the initial period of regeneration (7 days), when compared to the respective VBa+SS groups. From the results obtained, the ANX1 mimetic peptide Ac9-22 can promote activities that lead to the acceleration and recovery of the functional activity, of the regenerating muscle tissue, through the activation of pro-angiogenic and pro-myogenic agents, and by decreasing the acute and degenerative inflammatory process, by inhibiting the production of proinflammatory cytokines, induced by the injection of VBa. So, this peptide can be considered a potential pharmaceutical compound to be applied in the treatment of snakebite victims, leading to a significant improvement of the muscle tissue regeneration process, after injury caused by bothropic envenomation.en
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pt_BR
dc.description.sponsorshipID2020/06606-1pt_BR
dc.format.extent52 f.pt_BR
dc.identifier.citationALECRIM, N. N. Efeito do peptídeo mimético Ac9-22, derivado da Anexina A1, sobre a degeneração e regeneração muscular esquelética, induzida pelo veneno da serpente Bothrops asper. São Paulo, 2022. 52 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Biomedicina) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, 2022.pt_BR
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/11600/63231
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesspt_BR
dc.subjectAnexina A1pt_BR
dc.subjectMiotoxicidadept_BR
dc.subjectInflamaçãopt_BR
dc.subjectRegeneração tecidualpt_BR
dc.subjectBothrops asperpt_BR
dc.titleEfeito do peptídeo mimético Ac9-22, derivado da Anexina A1, sobre a degeneração e regeneração muscular esquelética, induzida pelo veneno da serpente Bothrops asperpt_BR
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesispt_BR
unifesp.campusEscola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduacaoBiomedicinapt_BR
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