Processamento e solubilização das isoformas com 65 e 90 kda da enzima conversora de angiotensina i (eca) nas células mesangiais
| dc.contributor.advisor | Casarini, Dulce Elena Casarini [UNIFESP] | pt |
| dc.contributor.author | Aragao, Danielle Sanches [UNIFESP] | |
| dc.contributor.institution | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | pt |
| dc.date.accessioned | 2018-07-27T15:50:47Z | |
| dc.date.available | 2018-07-27T15:50:47Z | |
| dc.date.issued | 2013-10-30 | |
| dc.description.abstract | A ECA é uma zinco dipeptidil carboxipeptidase envolvida na regulação da pressão arterial e na homeostase eletrolítica e de fluidos. Apresenta-se sob as formas somática e germinal, ambas transcritas a partir de um único gene e descritas como proteínas transmembranicas tipo I e que são proteoliticamente processadas próximas à membrana plasmática, na porção extracelular, sendo seus domínios ativos C e N liberados da superfície celular pela ação de secretases ou sheddases ainda não descritas na literatura. Suas isoformas solúveis N-domínio foram descritas apresentando 108 kDa (68 kDa na forma deglicosilada) no fluido ileal, outra com 90 kDa, presente em tecidos, células mesangiais (CMs) e urina de ratos SHR e com 65 kDa, presente em tecidos, CMs primárias ou imortalizadas, proximais, células IMCD e urina de ratos normotensos (Wistar). Uma vez que as CMs apresentam as formas somática e solúveis N-domínio da ECA e constituem-se um modelo experimental adequado ao estudo do processo de shedding dessa enzima, o objetivo deste estudo foi investigar a existência de uma ou mais secretases que possam atuar na hidrólise da ECA de alta massa molecular (somática), originando então as isoformas N-domínio com 90 e 65 kDa nestas células. Neste estudo, foram utilizadas culturas de CMs imortalizadas de camundongo e primárias de ratos SHR, cujos lisados celulares foram purificados separadamente com a utilização dos substratos fluorogênicos construídos a partir da clivagem C-terminal da ECA somática para as possíveis enzimas responsáveis pela geração das isoformas solúveis N-domínio: S1 para secretase geradora da ECA com 65 kDa (Abz- RWGVFSGRTPQ-EDDnp) e S2 para a secretase geradora da ECA com 90 kDa (Abz- EYQWHPPLPDNYQ-EDDnp). Foram obtidos dois pools cromatográficos no processo de purificação para o lisado de ambas as culturas, sendo que o número 2 apresentou maior atividade sobre os substratos, tendo o conteúdo proteico posteriormente analisado e sequenciado, levando à identificação de serino proteases. A Matriptase-3, com massa molecular de 80 kDa, foi a enzima identificada com homologia às serino proteases SH1 (48kDa) e STH2 (60 kDa, semelhante à Matriptase-3), purificadas de urina humana e que foram capazes de clivar a ECA somática e gerar isoformas com 65 e 90 kDa. O pool 2, oriundo da purificação da CMI, foi capaz de clivar a ECA somática gerando uma isoforma com 65 kDa. Estes resultados sugerem que as isoformas Ndomínio da ECA, com massas moleculares de 65 e 90 kDa, são geradas a partir de diferentes serino proteases presentes nas CMs de animais normotensos e hipertensos e que, provavelmente, possuem modulações distintas nesses modelos experimentais, uma vez que a isoforma com 90 kDa está presente somente em animais e indivíduos com hipertensão ou predispostos geneticamente ao desenvolvimento dessa patologia. | pt |
| dc.description.source | Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016) | |
| dc.format.extent | 210 p. | |
| dc.identifier | https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=130642 | pt |
| dc.identifier.citation | ARAGAO, Danielle Sanches. Processamento e solubilização das isoformas com 65 e 90 kda da enzima conversora de angiotensina i (eca) nas células mesangiais. 2013. 210 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2013. | |
| dc.identifier.file | 2013-0478.pdf | |
| dc.identifier.uri | http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46749 | |
| dc.language.iso | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/restrictedAccess | |
| dc.subject | enzima conversora de angiotensina | en |
| dc.subject | enzima conversora de angiotensina | pt |
| dc.subject | isoformas solúveis | pt |
| dc.subject | shedding | pt |
| dc.subject | células mesangiais | pt |
| dc.title | Processamento e solubilização das isoformas com 65 e 90 kda da enzima conversora de angiotensina i (eca) nas células mesangiais | pt |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | |
| unifesp.campus | São Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM) | pt |
| unifesp.graduateProgram | Medicina (Nefrologia) | pt |
| unifesp.knowledgeArea | Ciências da saúde | pt |
| unifesp.researchArea | Medicina | pt |