Estudo de moléculas derivadas da lagarta lonomia obliqua sobre o metabolismo oxidativo de condrócitos humanos

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dc.contributor.advisorChudzinski Tavassi, Ana Marisa [UNIFESP]
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/6899353560628046pt_BR
dc.contributor.authorToledo, Thais Mingatos de [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/6977104441277863
dc.coverage.spatialSão Paulo
dc.date.accessioned2023-11-10T11:36:08Z
dc.date.available2023-11-10T11:36:08Z
dc.date.issued2023-10-05
dc.description.abstractObjetivos: Estudar a atividade do peptídeo D3, derivado de uma hemolina presente em veneno da lagarta Lonomia obliqua, no metabolismo oxidativo de condrócitos humanos, investigando seus possíveis alvos moleculares por meio de diferentes estratégias de proteômica de condrócito (NHAC-kN) sob estresse oxidativo. Métodos: Para análise proteômica de condrócitos e do secretoma foram feitos tratamentos temporais na presença e ausência do peróxido de hidrogênio e do peptídeo D3. Para identificação dos possíveis alvos do D3, utilizou-se a metodologia da quimioproteômica com marcação por tags isobáricas. Após tratamento, as proteínas extraídas foram reduzidas, alquiladas e digeridas overnight e os peptídeos tripsínicos coletados. Por fim, todas as amostras foram acidificadas, dessalinizadas e secas e ressuspendidas para análise LC-MS/MS em espectrômetro de massas Thermo Scientific Q Exactive Plus. Os dados obtidos foram analisados no software MaxQuant para identificação e quantificação de proteínas. Resultados do proteoma e do secretoma das células tiveram a significância estatística determinada pelo teste T-Student bicaudal utilizando o software Perseus, com False Discovery Rate obtidos por permutação. Resultados: A proteômica e a análise do secretoma identificaram que os principais processos modulados pelo peróxido de hidrogênio foram: resposta a proteínas não enoveladas, remodelagem da matriz extracelular e secreção. O tratamento das células estimuladas com o peróxido seguido do D3 apresentou uma melhora na manutenção da matriz extracelular saudável e indícios de menor atividade secretória relacionada à degeneração da matriz, além da diminuição do estresse do retículo endoplasmático e Golgi. A análise de quimioproteômica identificou 11 possíveis alvos, sendo que a paratimosina e a dissulfeto isomerase foram identificadas em todas as abordagens. Conclusões: Pode-se afirmar, com base nos dados analisados que o peptídeo D3 tem efeito positivo em condrócitos humanos estimulados com H2O2, favorecendo manutenção da resposta secretória, manutenção das proteínas da matriz e menor estresse oxidativo das organelas secretórias.pt_BR
dc.description.abstractObjectives: To evaluate the activity of the peptide D3 derived from hemolymph present in Lonomia obliqua caterpillar venom, in the oxidative metabolism of human chondrocytes by investigating the proteome and secretome of chondrocytes under oxidative stress in the presence of D3 and by applying chemoproteomics to identify putative molecular targets. Methods: For proteome and secretome analysis, treatments were performed with and without hydrogen peroxide and D3. To identify possible D3 targets, chemoproteomic assays were performed and peptides were labelled with tandem mass tags. After treatment, the extracted proteins were denatured, alkylated followed by an overnight trypsin digestion, and tryptic peptides were collected. Afterwards, all samples were acidified, desalted, dried and resuspended for LC-MS/MS analysis in a Thermo Scientific Q Exactive Plus mass spectrometer. The obtained data was analyzed using MaxQuant software for identification and quantification of proteins. The statistical significance of all results for proteomics and secretome was determined by two-tailed T-Student test using Perseus software. Results: Proteome and secretome analyzes showed that the main modulated processes were related to unfolded protein response, secretion of extracellular matrix proteins. Treatment of stimulated cells with peroxide and D3 showed an improvement in the maintenance of a healthy extracellular matrix and evidence of lower secretory activity related to inflammation and matrix degeneration. In addition, less proteins related to endoplasmic reticulum and Golgi stress were identified. Chemoproteomic analysis identified 11 possible targets, with parathymosin and disulfide isomerase were identified in all methodological approaches. Conclusions: Based on the analyzed data, the D3 peptide has presented effect on human chondrocytes stimulated with H2O2, favoring maintenance of the secretory response, maintenance of matrix proteins and possibly lower oxidative stress of the secretory organelles.en
dc.description.sponsorshipCoordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)pt_BR
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pt_BR
dc.description.sponsorshipID88887612671202100pt_BR
dc.emailadvisor.customana.chudzinski@butantan.gov.brpt_BR
dc.format.extent207 f.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/69458
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccesspt_BR
dc.subjectCondrócitospt_BR
dc.subjectEstresse oxidativopt_BR
dc.subjectProteômicapt_BR
dc.subjectSecretomapt_BR
dc.subjectQuimioproteômicapt_BR
dc.subjectOsteoartritept_BR
dc.titleEstudo de moléculas derivadas da lagarta lonomia obliqua sobre o metabolismo oxidativo de condrócitos humanospt_BR
dc.title.alternativeStudy of molecules derived from the caterpillar lonomia obliqua on the oxidative metabolism of human chondrocytesen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesispt_BR
unifesp.campusEscola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduateProgramCiências Biológicas (Biologia Molecular)pt_BR
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