Efeitos das infusões de muscimol e AP5 no subículo dorsal sobre a aquisição e a consolidação do condicionamento de medo ao contexto em ratos
Data
2019-11-28
Autores
Braga de Melo, Márcio 
Orientadores
Oliveira, Maria Gabriela Menezes de
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
The dorsal hippocampus (DH) has a well-known role in the contextual fear conditioning (CFC) and spatial information. Involvement of the DH in CFC has been established by showing that its muscimol-induced temporary inactivation impairs CFC consolidation while acquisition is hindered by blocking DH glutamatergic NMDA receptors with AP5. The dorsal subiculum (DSub) is also involved in spatial information and it is necessary for retrieval of the CFC. Moreover, the DSub is a major output from the hippocampus through pathways that seemingly relies on NMDA-dependent synaptic plasticity. However, the implication of the DSub in the CFC consolidation is still unclear. Our aim was to assess the effects of intra-DSub muscimol or AP5 infusion on CFC acquisition and consolidation. The DSub of 3-to-4-month-old male Wistar rats were bilaterally cannulated (AP=-6.4 mm, ML=±3.8 mm, DV=- 3.4 mm). CFC training consisted of applying a footshock (1s/0.8mA – after a 120s delay) as the unconditioned stimulus. A 5-min test was done 48h later, and freezing was assessed as the behavioral conditioned response. All groups received 0.2ul/hemisphere infusions 5min before or immediately after the training. Data from animals with incorrect cannula implantation were excluded. To control for bias such as shock sensitivity and emotional reaction, we employed a hippocampal-independent procedure: step-through inhibitory avoidance (ST IA). Freezing was analyzed by the generalized estimating equations (GEE) method, with group and time-bin (minute-by-minute) as independent factors. IAST latency was analyzed by generalized linear model (GzLM), with group as the only independent factor. LSD posthoc test was applied when appropriate. The pre or posttraining intra-DSub muscimol infusion impairs the CFC. The pre-training intra-DSub AP5 infusion did not impair CFC, but the post-training manipulation did. Our data, together with the literature, suggest that the integrity of the DSub, as structure, is necessary only for the CFC consolidation. Furthermore, the NMDA receptors in this region are also necessary for the consolidation, but not for the CFC acquisition, a different pattern from the observed in the DH. The lack of drug effect on ST IA latency indicates that controlled factors did not account for the observed differences.
O hipocampo dorsal (HD) é uma região fundamental no condicionamento de medo ao contexto (CMC), provavelmente devido ao seu envolvimento com informações espaciais. A inativação temporária do HD com muscimol prejudica a consolidação do CMC, enquanto o bloqueio NMDA dessa região com AP5 prejudica a aquisição. O subículo dorsal (SubD) também está envolvido com informações espaciais e é necessário para evocação do CMC. Além disso, o SubD é uma das principais vias de saída do hipocampo, recebendo projeções que podem apresentar plasticidade sináptica dependente de NMDA. Contudo, o envolvimento do SubD na consolidação do CMC ainda não é totalmente claro. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo investigar os efeitos das infusões de muscimol e AP5 no SubD sobre a aquisição e a consolidação do CMC. Para tanto, ratos Wistar machos foram bilateralmente canulados no SubD. O CMC consistiu em um treino de 3 minutos com um choque nas patas após 120s, e um teste de 5 minutos, 48h depois, com o congelamento, minuto a minuto, como parâmetro comportamental. Os grupos foram alocados em salina, muscimol e AP5 e todos receberam doses de 0.2ul/hemisfério 5min antes ou imediatamente após o treino do CMC. Foram excluídos das análises aqueles animais que não apresentaram correta implantação de cânulas. Para controlar fatores como sensibilidade ao choque e reatividade emocional a um estímulo aversivo, além de um aprendizado geral, foi utilizada uma versão hipocampo independente da esquiva inibitória step-through (EI ST). Os efeitos grupo e tempo sobre o congelamento no teste de CMC foram analisados por generalized estimating equations (GEE), seguidas de posthocs LSD quando necessário. O efeito grupo sobre a latência no teste de EI ST foi analisado por generalized linear model (GzLM). Infusões pré ou pós-treino de muscimol no SubD prejudicaram o CMC. A infusão prétreino de AP5 não prejudicou o CMC, mas a pós-treino sim. Nossos dados, em conjunto com a literatura, sugerem que a integridade do SubD, enquanto estrutura, é necessária apenas para a consolidação do CMC. Além disso, os receptores NMDA nessa região também são necessários para consolidação, mas não para aquisição do CMC, diferente do observado no HD. Os resultados negativos na EI ST indicam que os fatores controlados não são responsáveis pelos prejuízos mostrados no CMC.
O hipocampo dorsal (HD) é uma região fundamental no condicionamento de medo ao contexto (CMC), provavelmente devido ao seu envolvimento com informações espaciais. A inativação temporária do HD com muscimol prejudica a consolidação do CMC, enquanto o bloqueio NMDA dessa região com AP5 prejudica a aquisição. O subículo dorsal (SubD) também está envolvido com informações espaciais e é necessário para evocação do CMC. Além disso, o SubD é uma das principais vias de saída do hipocampo, recebendo projeções que podem apresentar plasticidade sináptica dependente de NMDA. Contudo, o envolvimento do SubD na consolidação do CMC ainda não é totalmente claro. Neste sentido, o presente trabalho teve como objetivo investigar os efeitos das infusões de muscimol e AP5 no SubD sobre a aquisição e a consolidação do CMC. Para tanto, ratos Wistar machos foram bilateralmente canulados no SubD. O CMC consistiu em um treino de 3 minutos com um choque nas patas após 120s, e um teste de 5 minutos, 48h depois, com o congelamento, minuto a minuto, como parâmetro comportamental. Os grupos foram alocados em salina, muscimol e AP5 e todos receberam doses de 0.2ul/hemisfério 5min antes ou imediatamente após o treino do CMC. Foram excluídos das análises aqueles animais que não apresentaram correta implantação de cânulas. Para controlar fatores como sensibilidade ao choque e reatividade emocional a um estímulo aversivo, além de um aprendizado geral, foi utilizada uma versão hipocampo independente da esquiva inibitória step-through (EI ST). Os efeitos grupo e tempo sobre o congelamento no teste de CMC foram analisados por generalized estimating equations (GEE), seguidas de posthocs LSD quando necessário. O efeito grupo sobre a latência no teste de EI ST foi analisado por generalized linear model (GzLM). Infusões pré ou pós-treino de muscimol no SubD prejudicaram o CMC. A infusão prétreino de AP5 não prejudicou o CMC, mas a pós-treino sim. Nossos dados, em conjunto com a literatura, sugerem que a integridade do SubD, enquanto estrutura, é necessária apenas para a consolidação do CMC. Além disso, os receptores NMDA nessa região também são necessários para consolidação, mas não para aquisição do CMC, diferente do observado no HD. Os resultados negativos na EI ST indicam que os fatores controlados não são responsáveis pelos prejuízos mostrados no CMC.
Descrição
Citação
BRAGA DE MELO, Márcio. Efeitos das infusões de muscimol e AP5 no subículo dorsal sobre a aquisição e a consolidação do condicionamento de medo ao contexto em ratos. 2019. 39 f. Dissertação (Mestrado em Psicobiologia) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo.