Caracterização funcional do LOPAP (ativador de protrombina da lagarta Lanomia oblíqua)

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dc.contributor.advisorChudzinski-Tavassi, Ana Marisa [UNIFESP]
dc.contributor.authorFritzen, Marcio [UNIFESP]
dc.date.accessioned2015-12-06T23:02:21Z
dc.date.available2015-12-06T23:02:21Z
dc.date.issued2002
dc.description.abstractA lagarta Lonomia obliqua é encontrada no sul do Brasil, e o contato da pele humana com suas cerdas, em forma de "espinhos", causa entre outros sintomas, uma severa síndrome hemorrágica devido a coagulopatia de consumo, ocasionada por procoagulantes (ativadores de protrombina e fator X da coagulaçao. Na Venezuela, uma outra espécie de lagarta, a Lonomia achelous, é responsável por acidentes semelhantes, porém, a síndrome hemorrágica foi atribuída a uma fibrinólise primária desencadeada por proteínas fibrinolíticas capazes de degradar o Fator XIII da coagulaçao. Objetivo: Caracterizaçao estrutural e funcional do Lopap (ativador de protrombina), presente no extrato bruto de cerdas da L. obliqua. Métodos: O extrato de cerdas foi preparado em tampao salina-fosfato pH 7,4 e submetido a uma cromatografia de gel filtraçao em Sephadex G75 em tampao Tris-HCI 50 mM, NaCI 100 mM pH 8,0. Após diálise e concentraçao, o pool das fraçoes ativas foi submetida a uma cromatografia de troca iônica (PA-DEAE) eluída com um gradiente linear de NaCI (0-500 mM). As fraçoes ativas foram concentradas e submetidas a uma fase reversa em HPLC (coluna C4) eluída com um gradiente linear de acetonitrila (35-55 por cento) e a fraçao ativa foi recromatografada e eluída com um gradiente linear de acetonitrila (43-53 por cento). A atividade do extrato e das fraçoes eluídas foi monitorada pela capacidade de geraçao de trombina a partir de protrombina humana usando o substrato cromogênico S-2238. Foi determinado o pl do Lopap e foram realizados ensaios de atividade enzimática e determinaçao do ponto de hidrólise de substratos fluorogênicos sintetizados com seqüências baseadas nos sítios de clivagem da protrombina, hidrólise da protrombina e análise dos fragmentos por SDS-PAGE, teste de atividade fibrinolítica sobre placas de fibrina humana, atividade na presença e ausência dos componentes do complexo protrombinase, atividade do LOPAP e da trombina formada na agregaçao plaquetária e inibiçao desta atividade pela antitrombina III. Com o extrato das cerdas foram realizados testes de atividade fibrinolítica sobre placas de fibrina humana, atividade fibrinogenolítica e coagulaçao do fibrinogênio purificado, atividade ativadora de plasminogênio e coagulaçao de plasma humano. Resultados: Foi purificada uma proteína de 69 kDa que possue um pl de 6,1 e com atividade procoagulante capaz de ativar o fator II em ensaios com substrato...(au)pt
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
dc.format.extent110 p.
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 2002. 110 p. ilustab.
dc.identifier.fileepm-018009.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/18084
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/restrictedAccess
dc.subjectCoagulação Sanguíneapt
dc.subjectProtrombinapt
dc.subjectPlaquetaspt
dc.titleCaracterização funcional do LOPAP (ativador de protrombina da lagarta Lanomia oblíqua)pt
dc.title.alternativeCharacterization functional of LOPAP(Lanomia obliqua prothrombin activator protease)en
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt
unifesp.graduateProgramCiências Biológicas (Biologia Molecular)
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