Avaliação e comparação de métodos laboratoriais para diagnóstico das onicomicoses – clássico, molecular e MALDI-TOF
Data
2020-12-01
Autores
Santana, Gilglecia Novaes Pereira 
Orientadores
Camargo, Zoilo Pires De
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Onychomycosis or fungal nail infection is the infection of the nail bed caused by dermatophytes, yeasts or non dermatophyte filamentous fungi. The infection is not considered serious, although it represents a public health issue due to its high prevalence and associated morbidity, which negatively influences the quality of life of patients. The general objective of this study was to evaluate laboratory methods for the precise and specific diagnosis of the etiologic agents of onychomycosis in immunocompetent (IC) and immunocompromised patients (renal transplant receptors- RTR) with clinical suspicion of onychomycosis. seen at the Dermatology Department of the Federal University of São Paulo (UNIFESP / EPM), Dermatology Service of the Heliópolis Hospital / São Paulo and Private Dermatological Office / São Paulo. Participants were included in this study only after signing the informed consent form. The clinical material of the nails was collected from 50 IC and 50 RTR patients. The isolates were identified by phenotypic, molecular methods and mass spectrometry (MALDI-TOF MS). The susceptibility profile was carried out using the broth microdilution method against the drugs amorolfine, isoconazole, terbinafine itraconazole, fluconazole. The prevalence of onychomycosis was 80% in the IC group and lowered in the RTR group with 76%. In CI patients, the prevalence of onychomycosis was found in females in 72.5%, while in the RTR group, the prevalence was in males in 78.95%. In our investigation, onychomycosis was caused mainly by dermatophytes (55.18%), followed by yeasts 24.14%, FFND and NF were similar, both with 10.34% in the total group in both groups, the T. rubrum species complex was the most frequent, followed by T. mentagrophytes variety T. interdigitale. Regarding yeasts in our investigation, there was a predominance of the genus Candida among the isolates, with the complex of species C. parapsilosis prevalent in both groups. However, in our study, the presence of FFND was found only in the IC group, where no immunodeficiency was observed. As for the identification by mass spectrometry (MALDI-TOF MS), the on-line MSI-IHEM platform, produced significantly better results compared to the Biotyper Bruker database. Based on the high identification rate and the low percentage of errors, our study suggests that the on-line MSI platform is a promising method for the identification of fungi. Despite the statistical similarity between phenotypic and molecular techniques and mass spectrometry (MSI-IHEM Platform), our results reinforce that the molecular technique is more accurate, sensitive to the level of the species complex, providing correct identification, with precision and no error, even without using specific markers, this makes it the gold standard method in our study and has also been reported by several authors. Our data also revealed that the and susceptibility of the isolated species is similar to those described in the literature.
Onicomicose ou infecção fúngica das unhas, é a infecção do leito ungueal, causada por dermatófitos, leveduras ou fungos filamentosos não dermatófitos. A infecção não é considerada grave, embora represente uma questão de saúde pública devido a sua alta prevalência e morbidade associada, que influenciam de maneira negativa a qualidade de vida dos pacientes. O objetivo geral desse estudo foi avaliar os métodos laboratoriais para o diagnóstico preciso e específico dos agentes etiológicos das onicomicoses, em pacientes imunocompetentes (IC) e imunocomprometidos (Receptores de transplante renal- RTR) com suspeita clínica de onicomicoses. atendidos no Departamento de Dermatologia da Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP/ EPM), Serviço de Dermatologia do Hospital Heliópolis/São Paulo e Consultório Dermatológico Particular/São Paulo. Os participantes foram incluídos nesse estudo somente após a assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE). O material clínico das unhas, foi coletado de 50 pacientes IC E 50 RTR. Os isolados foram identificados por métodos fenotípicos, moleculares e por espectrometria de massa (MALDI-TOF MS). O perfil de susceptibilidade foi realizado pelo método de microdiluição em caldo frente aos fármacos amorolfina, isoconazol, terbinafina itraconazol, fluconazol. A prevalência da onicomicose foi de 80% no grupo IC e menor no grupo RTR com 76%. Nos pacientes IC, a predominância de onicomicose foi constatada no sexo feminino em 72,5%, enquanto no grupo RTR a prevalência foi do sexo masculino em 78,95%. Em nossa investigação as onicomicoses foram provocadas principalmente por dermatófitos (55,18%), seguido das leveduras 24,14%, fungos filamentosos não dermatófitos (FFND) e fungos que não frutificaram (NF) foram semelhantes, ambos com 10,34% no grupo total. Em ambos os grupos, o complexo de espécies T. rubrum foi o mais frequente, seguido pelo T. mentagrophytes variedade T. interdigitale. Com relação às leveduras em nossa investigação, houve predominância do gênero Candida entre os isolados, sendo o complexo de espécies C. parapsilosis prevalente em ambos os grupos. No entanto em nosso trabalho, a presença de FFND foi constatada apenas no grupo IC, onde nenhuma imunodeficiência foi observada. Quanto a identificação pela espectrometria de massa (MALDI-TOF MS), a plataforma on-line MSI-IHEM, produziu resultados significantemente melhores em comparação com o banco de dados da Biotyper Bruker. Baseado na alta taxa de identificação e baixo percentual de erros, nosso estudo sugere que a plataforma on-line MSI-IHEM é um método promissor para a identificação de fungos. Apesar da semelhança estatística entre as técnicas fenotípica, molecular e a espectrometria de massa (Plataforma on-line MSI-IHEM), nossos resultados reforçam que a técnica molecular é mais acurada, sensível a nível de complexo de espécies, fornecendo identificação correta e sem nenhum erro, mesmo sem utilizarmos marcadores específicos, isso faz dela o método mais sensivel em nosso estudo, sendo também reportado por vários autores. Nossos dados, também revelaram que a suscetibilidade das espécies isoladas é semelhante aos descritos na literatura.
Onicomicose ou infecção fúngica das unhas, é a infecção do leito ungueal, causada por dermatófitos, leveduras ou fungos filamentosos não dermatófitos. A infecção não é considerada grave, embora represente uma questão de saúde pública devido a sua alta prevalência e morbidade associada, que influenciam de maneira negativa a qualidade de vida dos pacientes. O objetivo geral desse estudo foi avaliar os métodos laboratoriais para o diagnóstico preciso e específico dos agentes etiológicos das onicomicoses, em pacientes imunocompetentes (IC) e imunocomprometidos (Receptores de transplante renal- RTR) com suspeita clínica de onicomicoses. atendidos no Departamento de Dermatologia da Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP/ EPM), Serviço de Dermatologia do Hospital Heliópolis/São Paulo e Consultório Dermatológico Particular/São Paulo. Os participantes foram incluídos nesse estudo somente após a assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE). O material clínico das unhas, foi coletado de 50 pacientes IC E 50 RTR. Os isolados foram identificados por métodos fenotípicos, moleculares e por espectrometria de massa (MALDI-TOF MS). O perfil de susceptibilidade foi realizado pelo método de microdiluição em caldo frente aos fármacos amorolfina, isoconazol, terbinafina itraconazol, fluconazol. A prevalência da onicomicose foi de 80% no grupo IC e menor no grupo RTR com 76%. Nos pacientes IC, a predominância de onicomicose foi constatada no sexo feminino em 72,5%, enquanto no grupo RTR a prevalência foi do sexo masculino em 78,95%. Em nossa investigação as onicomicoses foram provocadas principalmente por dermatófitos (55,18%), seguido das leveduras 24,14%, fungos filamentosos não dermatófitos (FFND) e fungos que não frutificaram (NF) foram semelhantes, ambos com 10,34% no grupo total. Em ambos os grupos, o complexo de espécies T. rubrum foi o mais frequente, seguido pelo T. mentagrophytes variedade T. interdigitale. Com relação às leveduras em nossa investigação, houve predominância do gênero Candida entre os isolados, sendo o complexo de espécies C. parapsilosis prevalente em ambos os grupos. No entanto em nosso trabalho, a presença de FFND foi constatada apenas no grupo IC, onde nenhuma imunodeficiência foi observada. Quanto a identificação pela espectrometria de massa (MALDI-TOF MS), a plataforma on-line MSI-IHEM, produziu resultados significantemente melhores em comparação com o banco de dados da Biotyper Bruker. Baseado na alta taxa de identificação e baixo percentual de erros, nosso estudo sugere que a plataforma on-line MSI-IHEM é um método promissor para a identificação de fungos. Apesar da semelhança estatística entre as técnicas fenotípica, molecular e a espectrometria de massa (Plataforma on-line MSI-IHEM), nossos resultados reforçam que a técnica molecular é mais acurada, sensível a nível de complexo de espécies, fornecendo identificação correta e sem nenhum erro, mesmo sem utilizarmos marcadores específicos, isso faz dela o método mais sensivel em nosso estudo, sendo também reportado por vários autores. Nossos dados, também revelaram que a suscetibilidade das espécies isoladas é semelhante aos descritos na literatura.