Avaliação e monitoramento dos contatos intradomiciliares de pacientes com hanseníase: sorologia para detecção de anticorpos anti-PGL-I e avaliação da reatividade a proteínas recombinantes do Mycobacterium leprae
Data
2016-04-27
Autores
Silva, Eliane Aparecida 
Orientadores
Tomimori, Jane
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Leprosy, a chronic disease with high infectivity and low pathogenicity, manifests by dermato-neurological signs and symptoms and may cause physical disabilities and deformities. The leprosy elimination strategy is based on case detection in the early stages of the disease and the effectiveness of chemotherapy. In order to assist in the diagnosis of the disease, serological tests have been developed. Thus, this study aims to: I. to validate the utility of fusion antigen LID-1 associated with the synthetic disaccharide (ND-O) of phenolic glycolipid-I (PGL-I), in field work; II. to identify the number of leprosy cases diagnosed in Rondonópolis-MT during five years of followup of household contacts at the time of diagnosis of the index case, using clinical and serological exams (IgM anti ND-O-BSA and IgM/IgG anti ND-O-LID-1). In the period from 2009 to 2010, in Rondonopolis-MT, active search for new leprosy cases and their household contacts was carried out. From this work, in the present study we evaluated serum samples, clinical and epidemiological data of diagnosed leprosy cases classified by bacteriological, histological and clinical criteria (n = 174); household contacts who lived with the index cases at diagnosis or in the last five years (n = 409); individuals from endemic areas without diagnosis and family history of leprosy (n = 53); patients diagnosed with pulmonary tuberculosis (n = 12). Household contacts were followed (n = 186) over a five-year period. Blood was collection by venipuncture for serological tests at diagnosis and during follow-up of five years, in addition, dermatological and neurological examination were performed. For enzyme immunoassay for the detection of anti-PGL-I antibody (ND-O-BSA) were considered positive OD ? 0.150 and for the anti-ND-O-LID-1 immunodot positivity was given in crosses (0,5+, 1+, 2+, 3+). Results of antibodies serum levels stratified by clinical form (43 tuberculoid, 63 borderline-tuberculoid, 30 borderline-borderline, 12 borderline-lepromatous, 07 lepromatous, 19 indeterminate) showed higher positivity for the rapid testing in MB patients: 100% for VV and DV, and 73.33% for DD. Individuals PB showed 7.20% positivity to the rapid test. The positivity of anti-PGL-I ELISA among 409 contacts was low (3.17%) and for the anti-ND-O-LID-1 rapid test was 14.66%, with nine positive samples 1+ and 51 positive 0,5+. In the first evaluation, nine (2.20%) contacts were diagnosed with leprosy, six were negative for both serological tests, two 0,5+ for LID-1 and negative for PGL-I and one 1+ to LID -1 and positive to PGL-I. When comparing all patients r2 = 0.8444 correlation was obtained indicating good agreement between the serological tests. Correlation r2 = 0.7382 was found between results of ND-O-LID-1 and bacterial index of MB patients.The results showed that levels of anti-ND-O-BSA antibodies by ELISA correspond to semi-quantitative results of anti-ND-O-LID-1 in the rapid test. Clinical examination of household contacts proved to be a good procedure for active case finding, as it detected new leprosy cases in 2.2% of examined contacts. The followup of household contacts for five years made possible the detection of 3.22% of new cases among contacts. The quantification of anti-ND-O-BSA by ELISA can be used as a laboratory tool to indicate exposure to M. leprae in contacts. Positive serology may indicate infection with M. leprae, without necessarily evolution to disease. All these observations allowed us to conclude that individuals with positive serology should be followed for longer periods than recommended by the control program.
A hanseníase, doença crônica de alta infectividade e baixa patogenicidade, manifesta-se por meio de sinais e sintomas dermato-neurológicos, podendo acarretar incapacidades físicas e deformidades. A estratégia da eliminação da hanseníase é baseada na detecção de casos na fase inicial da doença e na efetividade do tratamento poliquimioterápico. Para auxiliar no diagnóstico oportuno da doença, testes sorológicos têm sido desenvolvidos. Deste modo, este estudo tem por objetivos: I validar a utilidade do teste rápido anti-proteína recombinante de fusão LID-1 associada ao dissacarídeo sintético ND-O do glicolipídeo fenólico-I (PGL-I), em trabalho de campo; II identificar o número de casos de hanseníase diagnosticados em Rondonópolis-MT, durante cinco anos de seguimento dos contatos intradomiciliares a partir do momento do diagnóstico do caso índice, por meio de exames clínicos e sorológicos (IgM anti PGL-I e IgM/IgG anti-ND-O-Lid-1). No período de 2009 a 2010, em Rondonópolis-MT, foi realizada busca ativa de casos novos de hanseníase e de seus contatos intradomiciliares. A partir deste trabalho, no presente estudo utilizamos amostra de soros, dados clínico e epidemiológico de: casos novos de hanseníase diagnosticados e classificados pelos critérios baciloscópico, histológico e clínico (n=174); contatos intradomiciliares que residiam com os casos índices no diagnóstico ou nos últimos cinco anos (n=409); indivíduos de área endêmica sem diagnóstico e história familiar de hanseníase (n=53); pacientes com diagnóstico de tuberculose pulmonar (n=12). Os contatos intradomiciliares foram seguidos (n=186) pelo período de cinco anos. A coleta de sangue por punção venosa e sem anticoagulante foi feita para ensaios sorológicos no momento do diagnóstico e no seguimento dos cinco anos, além do exame dermato-neurológico. Para o ensaio imunoenzimático para detecção de anticorpos anti-PGL-I (ND-O-BSA) foram considerados positivos D.O. ? 0,150 e para o immunodot anti-ND-O-LID-1 a positividade foi dada em cruzes (0,5+, 1+, 2+, 3+). Os xxiv resultados de detecção sérica de anticorpos estratificados por forma clínica (43 tuberculóide, 63 dimorfo-tuberculóide, 30 dimorfo-dimorfo, 12 dimorfo-virchowiano, 07 virchowiano, 19 indeterminada), revelaram maior positividade para o teste rápido bem pacientes MB: 100% para VV e DV e 73,33% para DD. Indivíduos PB apresentaram 7,20% de positividade no teste rápido. A positividade do anti-PGL-I por ELISA entre os 409 contatos foi baixa (3,17%) e ao teste rápido anti-ND-O-LID-1 foi de 14,66%, sendo nove amostras positivas 1+ e 51 positivas 0,5+. Na primeira avaliação, nove (2,20%) contatos foram diagnosticados com hanseníase, sendo seis com sorologia negativa para ambos os testes, dois 0,5+ para o LID-1 e negativo para PGL-I, e um 1+ para LID-1 e PGL-I positivo. Ao se comparar todos pacientes foi obtida correlação r2 = 0,8444 indicando boa concordância dos testes sorológicos. Correlação r2= 0,7382 foi encontrada entre resultados do ND-O-LID-1 e índice baciloscópico da lesão dos pacientes MB. Os resultados mostraram que os níveis de anticorpos anti-ND-OBSA pela técnica de ELISA correspondem aos resultados semi-quantitativos de anti-ND-O-LID-1 pelo teste rápido. O exame clínico de contatos intradomiciliares mostrou ser um bom procedimento para busca ativa de casos, pois detectou casos novos de hanseníase em 2,2% dos contatos examinados. O seguimento dos contatos intradomiciliares durante cinco anos possibilitou a detecção de 3,67% de casos novos entre os contatos. A quantificação de anticorpos por ambas técnicas pode ser utilizada como ferramenta laboratorial para indicar exposição ao M. leprae em contatos. A soropositividade pode indicar infecção pelo M. leprae, sem haver necessariamente desenvolvimento da doença. Todas estas observações nos permitem concluir que indivíduos com sorologia positiva devam ser acompanhados por períodos mais longos, além do recomendado pelo Programa de Controle.
A hanseníase, doença crônica de alta infectividade e baixa patogenicidade, manifesta-se por meio de sinais e sintomas dermato-neurológicos, podendo acarretar incapacidades físicas e deformidades. A estratégia da eliminação da hanseníase é baseada na detecção de casos na fase inicial da doença e na efetividade do tratamento poliquimioterápico. Para auxiliar no diagnóstico oportuno da doença, testes sorológicos têm sido desenvolvidos. Deste modo, este estudo tem por objetivos: I validar a utilidade do teste rápido anti-proteína recombinante de fusão LID-1 associada ao dissacarídeo sintético ND-O do glicolipídeo fenólico-I (PGL-I), em trabalho de campo; II identificar o número de casos de hanseníase diagnosticados em Rondonópolis-MT, durante cinco anos de seguimento dos contatos intradomiciliares a partir do momento do diagnóstico do caso índice, por meio de exames clínicos e sorológicos (IgM anti PGL-I e IgM/IgG anti-ND-O-Lid-1). No período de 2009 a 2010, em Rondonópolis-MT, foi realizada busca ativa de casos novos de hanseníase e de seus contatos intradomiciliares. A partir deste trabalho, no presente estudo utilizamos amostra de soros, dados clínico e epidemiológico de: casos novos de hanseníase diagnosticados e classificados pelos critérios baciloscópico, histológico e clínico (n=174); contatos intradomiciliares que residiam com os casos índices no diagnóstico ou nos últimos cinco anos (n=409); indivíduos de área endêmica sem diagnóstico e história familiar de hanseníase (n=53); pacientes com diagnóstico de tuberculose pulmonar (n=12). Os contatos intradomiciliares foram seguidos (n=186) pelo período de cinco anos. A coleta de sangue por punção venosa e sem anticoagulante foi feita para ensaios sorológicos no momento do diagnóstico e no seguimento dos cinco anos, além do exame dermato-neurológico. Para o ensaio imunoenzimático para detecção de anticorpos anti-PGL-I (ND-O-BSA) foram considerados positivos D.O. ? 0,150 e para o immunodot anti-ND-O-LID-1 a positividade foi dada em cruzes (0,5+, 1+, 2+, 3+). Os xxiv resultados de detecção sérica de anticorpos estratificados por forma clínica (43 tuberculóide, 63 dimorfo-tuberculóide, 30 dimorfo-dimorfo, 12 dimorfo-virchowiano, 07 virchowiano, 19 indeterminada), revelaram maior positividade para o teste rápido bem pacientes MB: 100% para VV e DV e 73,33% para DD. Indivíduos PB apresentaram 7,20% de positividade no teste rápido. A positividade do anti-PGL-I por ELISA entre os 409 contatos foi baixa (3,17%) e ao teste rápido anti-ND-O-LID-1 foi de 14,66%, sendo nove amostras positivas 1+ e 51 positivas 0,5+. Na primeira avaliação, nove (2,20%) contatos foram diagnosticados com hanseníase, sendo seis com sorologia negativa para ambos os testes, dois 0,5+ para o LID-1 e negativo para PGL-I, e um 1+ para LID-1 e PGL-I positivo. Ao se comparar todos pacientes foi obtida correlação r2 = 0,8444 indicando boa concordância dos testes sorológicos. Correlação r2= 0,7382 foi encontrada entre resultados do ND-O-LID-1 e índice baciloscópico da lesão dos pacientes MB. Os resultados mostraram que os níveis de anticorpos anti-ND-OBSA pela técnica de ELISA correspondem aos resultados semi-quantitativos de anti-ND-O-LID-1 pelo teste rápido. O exame clínico de contatos intradomiciliares mostrou ser um bom procedimento para busca ativa de casos, pois detectou casos novos de hanseníase em 2,2% dos contatos examinados. O seguimento dos contatos intradomiciliares durante cinco anos possibilitou a detecção de 3,67% de casos novos entre os contatos. A quantificação de anticorpos por ambas técnicas pode ser utilizada como ferramenta laboratorial para indicar exposição ao M. leprae em contatos. A soropositividade pode indicar infecção pelo M. leprae, sem haver necessariamente desenvolvimento da doença. Todas estas observações nos permitem concluir que indivíduos com sorologia positiva devam ser acompanhados por períodos mais longos, além do recomendado pelo Programa de Controle.
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SILVA, Eliane Aparecida. Avaliação e monitoramento dos contatos intradomiciliares de pacientes com hanseníase: sorologia para detecção de anticorpos anti-PGL-I e avaliação da reatividade a proteínas recombinantes do Mycobacterium leprae. 2016. 112 f. Tese (Doutorado em Medicina Translacional) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, 2016