Regulação da expressão gênica, endereçamento celular e secreção de antígenos de superfície de Trypanosoma cruzi.
Data
2013
Autores
Bayer-Santos, Ethel 
Orientadores
Silveira Filho, José Franco da
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
Os antigenos de superficie GP82 e GP90 sao membros da familia das trans-sialidases expressos na superficie de formas metaciclicas de Trypanosoma cruzi que apresentam funcoes opostas no processo de invasao das celulas de mamiferos. GP82 e uma adesina que promove a invasao celular, enquanto GP90 atua como modulador negativo da interiorizacao do parasita. O objetivo desta tese foi estudar alguns aspectos da regulacao da expressao e trafego intracelular dessas proteinas durante o processo de metaciclogenese, e tambem mecanismos de secrecao envolvidos na liberacao para o meio extracelular. Primeiramente, investigamos o papel da regiao 3' nao traduzida (3'UTR) na regulacao postranscricional do gene GP82. Utilizando como reporter o gene da proteina verde fluorescente (GFP) fusionado a 3'UTR da GP82, observamos que essa regiao induz aumento da expressao de GFP em formas metaciclicas, enquanto diminui a expressao de GFP em epimastigotas. Em seguida, uma serie de delecoes (Δ1-Δ4) foram realizadas para identificar elementos cis envolvidos nessa regulacao. Os resultados sugerem a presenca de mais de um elemento cis na 3'UTR do gene GP82, os quais devem se ligar a diferentes RBPs (RNA binding proteins) que podem estar ativas ou nao, dependendo do estagio de desenvolvimento do parasita. Em seguida, estudamos a expressao dos genes GP82 e GP90 durante o processo de metaciclogenese. Demonstramos que os mRNAs e proteinas GP82 e GP90 sao expressos em formas intermediarias durante a metaciclogenese, atingindo altos niveis nas formas metaciclicas completamente diferenciadas. Ao contrario das formas metaciclicas, nas quais GP82 e GP90 estao localizadas na superficie celular, nas formas intermediarias, essas proteinas estao principalmente localizadas em compartimentos intracelulares. Em formas intermediarias, a GP82 esta distribuida em estruturas vesiculares localizadas na regiao posterior do parasita, enquanto que GP90 localiza-se proximo a regiao da bolsa flagelar. Esses resultados mostram que os mecanismos envolvidos no controle da expressao de GP82 e GP90 estao operantes/ativos no inicio do processo de diferenciacao, e que diferentes vias de secrecao sao responsaveis pelo enderecamento dessas glicoproteinas ate a superficie celular. Por fim, o secretoma e os mecanismos de secrecao de proteinas de formas epimastigotas e metaciclicas foram estudados utilizando-se diferentes metodologias e analise proteomica. Observamos que tanto epimastigotas como tripomastigotas metaciclicos secretam proteinas na forma soluvel e/ou associada a vesiculas, as quais sao produzidas por ao menos dois mecanismos diferentes. Utilizando um protocolo de ultracentrifugacao, o sobrenadante de cultura dos parasitas foi fracionado em tres fracoes: a primeira, enriquecida em vesiculas maiores semelhantes a ectossomos; a segunda, enriquecida em vesiculas menores semelhantes a exossomos; e a terceira, contendo proteinas soluveis nao associadas a vesiculas. Analise proteomica quantitativa revelou grande diversidade de proteinas envolvidas em varios processos celulares, muitas das quais apresentam potencial papel na virulencia e patogenese. Esses resultados ampliam nosso conhecimento sobre o secretoma do T. cruzi
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2013. 83f.
SANTOS, Ethel Bayer. Regulação da expressão gênica, endereçamento Celular e secreção de antígenos de superfície deTrypanosoma cruzi. 2013. 83f. Tese (Doutorado em Microbiologia e Imunologia) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2013.
SANTOS, Ethel Bayer. Regulação da expressão gênica, endereçamento Celular e secreção de antígenos de superfície deTrypanosoma cruzi. 2013. 83f. Tese (Doutorado em Microbiologia e Imunologia) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2013.