Regulação da expressão gênica, endereçamento celular e secreção de antígenos de superfície de Trypanosoma cruzi.

dc.contributor.advisorSilveira Filho, José Franco da [UNIFESP]
dc.contributor.authorBayer-Santos, Ethel [UNIFESP]
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.date.accessioned2015-12-06T23:45:51Z
dc.date.available2015-12-06T23:45:51Z
dc.date.issued2013
dc.description.abstractOs antigenos de superficie GP82 e GP90 sao membros da familia das trans-sialidases expressos na superficie de formas metaciclicas de Trypanosoma cruzi que apresentam funcoes opostas no processo de invasao das celulas de mamiferos. GP82 e uma adesina que promove a invasao celular, enquanto GP90 atua como modulador negativo da interiorizacao do parasita. O objetivo desta tese foi estudar alguns aspectos da regulacao da expressao e trafego intracelular dessas proteinas durante o processo de metaciclogenese, e tambem mecanismos de secrecao envolvidos na liberacao para o meio extracelular. Primeiramente, investigamos o papel da regiao 3' nao traduzida (3'UTR) na regulacao postranscricional do gene GP82. Utilizando como reporter o gene da proteina verde fluorescente (GFP) fusionado a 3'UTR da GP82, observamos que essa regiao induz aumento da expressao de GFP em formas metaciclicas, enquanto diminui a expressao de GFP em epimastigotas. Em seguida, uma serie de delecoes (Δ1-Δ4) foram realizadas para identificar elementos cis envolvidos nessa regulacao. Os resultados sugerem a presenca de mais de um elemento cis na 3'UTR do gene GP82, os quais devem se ligar a diferentes RBPs (RNA binding proteins) que podem estar ativas ou nao, dependendo do estagio de desenvolvimento do parasita. Em seguida, estudamos a expressao dos genes GP82 e GP90 durante o processo de metaciclogenese. Demonstramos que os mRNAs e proteinas GP82 e GP90 sao expressos em formas intermediarias durante a metaciclogenese, atingindo altos niveis nas formas metaciclicas completamente diferenciadas. Ao contrario das formas metaciclicas, nas quais GP82 e GP90 estao localizadas na superficie celular, nas formas intermediarias, essas proteinas estao principalmente localizadas em compartimentos intracelulares. Em formas intermediarias, a GP82 esta distribuida em estruturas vesiculares localizadas na regiao posterior do parasita, enquanto que GP90 localiza-se proximo a regiao da bolsa flagelar. Esses resultados mostram que os mecanismos envolvidos no controle da expressao de GP82 e GP90 estao operantes/ativos no inicio do processo de diferenciacao, e que diferentes vias de secrecao sao responsaveis pelo enderecamento dessas glicoproteinas ate a superficie celular. Por fim, o secretoma e os mecanismos de secrecao de proteinas de formas epimastigotas e metaciclicas foram estudados utilizando-se diferentes metodologias e analise proteomica. Observamos que tanto epimastigotas como tripomastigotas metaciclicos secretam proteinas na forma soluvel e/ou associada a vesiculas, as quais sao produzidas por ao menos dois mecanismos diferentes. Utilizando um protocolo de ultracentrifugacao, o sobrenadante de cultura dos parasitas foi fracionado em tres fracoes: a primeira, enriquecida em vesiculas maiores semelhantes a ectossomos; a segunda, enriquecida em vesiculas menores semelhantes a exossomos; e a terceira, contendo proteinas soluveis nao associadas a vesiculas. Analise proteomica quantitativa revelou grande diversidade de proteinas envolvidas em varios processos celulares, muitas das quais apresentam potencial papel na virulencia e patogenese. Esses resultados ampliam nosso conhecimento sobre o secretoma do T. cruzipt
dc.description.provenanceMade available in DSpace on 2015-12-06T23:45:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013en
dc.description.sourceBV UNIFESP: Teses e dissertações
dc.description.sponsorshipConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)
dc.format.extent94 p.
dc.identifier.citationSão Paulo: [s.n.], 2013. 94 p.
dc.identifier.fileepm-3041012184464.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22480
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsAcesso restrito
dc.subjectTrypanosoma cruzipt
dc.subjectExpressão Gênicapt
dc.subjectTransporte Proteicopt
dc.subjectAntígenospt
dc.subjectVesículas Secretóriaspt
dc.titleRegulação da expressão gênica, endereçamento celular e secreção de antígenos de superfície de Trypanosoma cruzi.pt
dc.title.alternativeRegulation of gene expression, cellular addressing and secretion of Trypanosoma cruzi surface antigensen
dc.typeTese de doutorado
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt
unifesp.graduateProgramMicrobiologia e imunologia – São Paulo
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