Estudo da regulação do NF-kB no carcinoma renal metastático após terapia gênica com endostatina
| dc.contributor.advisor | Marumo, Maria Helena Bellini [UNIFESP] | |
| dc.contributor.advisorLattes | http://lattes.cnpq.br/4219112551635779 | |
| dc.contributor.author | Braga, Marina de Souza [UNIFESP] | |
| dc.contributor.authorLattes | http://lattes.cnpq.br/1219776615768903 | |
| dc.contributor.institution | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | |
| dc.coverage.spatial | São Paulo | |
| dc.date.accessioned | 2018-07-30T11:53:29Z | |
| dc.date.available | 2018-07-30T11:53:29Z | |
| dc.date.issued | 2015-05-31 | |
| dc.description.abstract | O carcinoma de células renais (CCR) representa 3% dos tumores malignos humanos e, aproximadamente, 90% das neoplasias malignas renais. O subtipo mais frequente de CCR é o de células claras (CCRcc). A maioria dos pacientes possui mutação no gene supressor tumoral de von Hippel- Lindau (VHL) o que resulta em um aumento da transcrição de vários fatores angiogênicos. O fator de transcrição кB (NF-кB) compreende uma família de proteínas, sendo que no CCR, o aumento da atividade do NF-кB correlaciona-se com o aumento de marcadores de angiogenese, apoptose e também com o desenvolvimento e progressão. Em mamíferos são conhecidos cinco membros da família Rel/NF-кB: RelA (p65), RelB, c-Rel, NF-кB1 -p105/p50 e o NF- кB2-p100/p52. Na última década vários trabalhos foram publicados correlacionando a ativação do NF-кB no CCR com a angiogênese, resistência à quimioterapia e à apoptose. A endostatina (ES) é o produto da clivagem da porção carboxi-terminal do colágeno XVIII. In vitro, ela inibe a proliferação, migração e estimula a apoptose de células endoteliais. In vivo, a eficácia da ES no tratamento de diversos tipos tumorais tem sido demonstrada. A terapia gênica pode ser definida como a transferência de material genético visando o tratamento de patologias hereditárias ou adquiridas. Neste trabalho foi avaliado a modulação do NF-кB em células Renca-EGFP de pulmões metastáticos do modelo experimental singeneico ortotópico metastático, e as alterações nos parâmetros celulares em células Renca após o silenciamento do gene nf-kb1. Na primeira etapa desse trabalho avaliou-se a ativação do NF-кB no adenocarcinoma metastático com e sem tratamento antiangiogênico com ES. O tratamento com ES levou a uma baixa expressão dos genes bcl-3, nf-kb1 e c-Rel por PCR-RT array. Foi mostrado a ligação do NF-кB ao DNA em todas as amostras, entretanto nas células do grupo ES observou-se uma redução da atividade de ligação. Foi confirmado o deslocamento da subunidade p50 no grupo Controle. A subunidade p50 teve marcação citoplasmática expressiva e difusa bem como uma significativa marcação nuclear. Nos nódulos tumorais do grupo ES a subunidade p50 apresentou marcação citoplasmática e nuclear menos intensa. A expressão da Bcl-3 foi bastante evidente no núcleo e no citoplasma das células metastáticas dos animais do grupo controle e do grupo ES. A interação física entre a p50 e a Bcl-3 foi confirmada nos extratos nucleares das células dos pulmões metastáticos. Na segunda etapa do trabalho realizamos a avaliação de parâmetros celulares da p50 nas células Renca utilizando a técnica de RNA de interferência. Ao final da transfecção foi demonstrado a inibição da expressão dos níveis de p105/ p50, e evidenciado alterações na proliferação celular, diminuição do tempo de dobramento celular nas células Renca silenciadas em relação a Renca-Mock. A análise do ciclo celular revelou um aumento significativo de células Renca silenciadas nas fases G0/G1 em relação à célula Renca-Mock. As células Renca silenciadas apresentaram também expressão diminuída da ciclina D, umas das principais proteínas reguladoras das fases G0/G1. Nossos resultados confirmaram a presença do complexo p50/ Bcl-3 em extratos nucleares de células de tumor de pulmões metastático, sugerindo que a p50 juntamente com Bcl-3 desempenham um papel regulador na transcrição de genes em RCC; e com o silenciamento do gene nf-kb1, foi mostrado a participação da p50 nas vias de sinalização da proliferação das células Renca e indicando seu potencial como alvo para terapia antitumoral. | pt_BR |
| dc.description.abstract | Renal cell carcinoma (RCC) accounts for 3% of human malignancies and approximately 90% of renal malignancies. Clear cell renal cell carcinoma (ccRCC) is the most common subtype of RCC. Most kidney cancer patients have mutations in the von Hippel-Lindau (VHL) gene which results in increased transcription of several angiogenic factors. The кB transcription factor (NF-кB) comprises a family of proteins, and in the RCC. In RCC, increased NF-кB activity has been correlated to increased apoptosis, expression of angiogenesis markers and tumoral progression. In mammals, five members of the Rel / NF-кB family are known: RelA (p65), RELB, c-Rel, NF-кB1 -p105 / p50 and NF-кB2-p100 / p52. Several studies have been correlated the NF-кB activation in RCC to angiogenesis, chemoresistance and apoptosis. Endostatin (ES) is the product of cleavage of the carboxy-terminal portion of collagen XVIII. In vitro, ES inhibits proliferation, migration and stimulates apoptosis of endothelial cells. However, the efficacy of ES in vivo has been described in the treatment of various tumor types. Gene therapy can be defined as the transfer of genetic material intended for the treatment of inherited or acquired diseases. In this work, NF-кB activation was evaluated in the metastatic adenocarcinoma model after the treatment with antiangiogenic gene therapy and changes in cell parameters Renca cells after the silencing of nf-kb1 gene. In the first stage of this work evaluated the NF-кB activation in metastatic adenocarcinoma with and without anti-angiogenic treatment with ES. ES treatment led to a low expression of bcl-3, nf-kb1 and c-Rel genes by RT-PCR array. It was shown NF-кB binding to DNA in all the samples, however the cells of ES group observed a reduction of binding activity. The displacement of the subunit p50 in the control group was confirmed. The p50 subunit was expressive and diffuse cytoplasmic labeling and a significant nuclear staining. Tumor nodules in the ES group to p50 subunit showed less intense cytoplasmic and nuclear staining. The expression of Bcl-3 was quite evident in the nucleus and cytoplasm of metastatic cells from the control group and the ES group. The physical interaction between p50 and Bcl-3 was confirmed in nuclear extracts from cells of metastatic lungs. In the second stage of the work we performed the evaluation of the cellular p50 parameter settings in Renca cells using RNA interference technique. At the end of the transfection was demonstrate inhibition of the expression levels of p105 / p50 and evident changes in cell proliferation, decreased cellular folding Renca cells silenced in time relative to Renca-Mock. The cell cycle analysis revealed a significant increase in the Renca cells silenced in the G0 / G1 phase compared to Renca-Mock cell. The silenced Renca cells also showed decreased expression of cyclin D, one of the main regulatory proteins phase G0 / G1. Our results confirmed the presence of the complex p50 / Bcl-3 in nuclear extracts of lung metastatic tumor cells, suggesting that p50 together with Our results confirmed the presence of the p50 / Bcl-3 complex in the nuclear extract of tumor cells from metastatic lung, suggesting that p50 together with Bcl-3 play a regulatory role during the gene transcription from RCC. However, nf-kb1 gene silencing confirmed the involvement of the p50 signaling pathway during the proliferation of Renca cells, indicating it as potential target for anti-tumor therapy. | en |
| dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | |
| dc.description.sponsorshipID | FAPESP: 2010/18969-0 | |
| dc.identifier | https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2392263 | |
| dc.identifier.citation | BRAGA, Marina de Souza. Estudo da regulação do NF-kB no carcinoma renal metastático após terapia gênica com endostatina. 2015. Tese (Doutorado em Nefrologia) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015. | pt_BR |
| dc.identifier.uri | http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48747 | |
| dc.language.iso | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | |
| dc.subject | NF-kB | pt_BR |
| dc.subject | Endostatina | pt_BR |
| dc.subject | Angiogênese | pt_BR |
| dc.subject | Silenciamento | pt_BR |
| dc.subject | p50 - nf-kb1 | pt_BR |
| dc.subject | Processos neoplásicos | pt_BR |
| dc.subject | Carcinoma de células renais | pt_BR |
| dc.subject | Terapia genética | pt_BR |
| dc.title | Estudo da regulação do NF-kB no carcinoma renal metastático após terapia gênica com endostatina | pt_BR |
| dc.title.alternative | Study of NF-kB adjustment in metastatic renal cell carcinoma after gene therapy with endostatin | en |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | |
| unifesp.campus | São Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM) | |
| unifesp.graduateProgram | Medicina (Nefrologia) | |
| unifesp.knowledgeArea | Ciências da saúde | |
| unifesp.researchArea | Medicina |
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