Efeitos de peptídeos relacionados ao inibidor quimérico recombinante de Bauhinia bauhinioides, rBbKIm, e à lectina da casca de Crataeva tapia, CrataBL, no modelo de melanoma
| dc.contributor.advisor | Oliva, Maria Luiza Vilela [UNIFESP] | |
| dc.contributor.advisor-co | Bonturi, Camila Ramalho [UNIFESP] | |
| dc.contributor.advisor-coLattes | http://lattes.cnpq.br/3244614441668694 | |
| dc.contributor.advisorLattes | http://lattes.cnpq.br/5832778223847349 | pt_BR |
| dc.contributor.author | Lie, Kathleen Chwen Ming [UNIFESP] | |
| dc.contributor.authorLattes | http://lattes.cnpq.br/1945823932612407 | |
| dc.coverage.spatial | São Paulo | |
| dc.date.accessioned | 2023-03-17T18:11:32Z | |
| dc.date.available | 2023-03-17T18:11:32Z | |
| dc.date.issued | 2023-02-16 | |
| dc.description.abstract | Entre os tipos de câncer de pele, o melanoma representa cerca de 3% dos tumores cutâneos. Não é um dos tumores mais comuns, mas é um dos mais agressivos e, na ausência de tratamento eficaz, é necessário buscar novos medicamentos. No câncer em geral, a metástase é facilitada pelas proteases das células tumorais. Os inibidores de proteases, particularmente aqueles encontrados em leguminosas, são candidatos potenciais para controlar esses eventos, bloqueando a progressão do câncer. Uma forma quimérica do inibidor de calicreína denominado rBbKIm (Bauhinia bauhinioides Kallikrein inhibitor modified) foi clonada, a estrutura básica é a do inibidor encontrado em B. bauhinioides, mas inclui as sequências EPVARGDG e DRGE de BrTI (Bauhinia rufa trypsin inhibitor). Foi relatado um efeito deletério desta proteína sobre as linhagens de células tumorais da próstata DU145 e PC3. Outra proteína, CrataBL (Crataeva tapia Bark Lectin), que assim como uma lectina, é específica para oligossacarídeos presentes em proteínas glicosiladas superexpressas no microambiente tumoral, o que é importante para o crescimento tumoral. Objetivos: Estudar os efeitos de rBbKIm, CrataBL e peptídeos derivados de suas estruturas em células de melanoma. Materiais e Métodos: as células (SK-MEL-28) foram tratadas com rBbKIm, CrataBL ou peptídeos e avaliadas viabilidade, proliferação, adesão, migração, invasão, morte e ciclo celular, fragmentação celular, expressão de proteínas celulares, produção de óxido nítrico e citocinas. Resultados: Embora rBbKIm tenha sido capaz de inibir as calicreínas teciduais KLK 6 e 7, serino proteases que desempenham um papel importante no desenvolvimento do melanoma, a proteína e os peptídeos derivados da sequência de rBbKIm não interferiram na viabilidade e proliferação da SK-MEL-28, enquanto a CrataBL (100 e 200 µM) reduziu a viabilidade celular em mais de 60%. CrataBL foi resistente à proteólise, pois seu efeito na proliferação de SK-MEL-28 também foi observado após 72 h de tratamento (inibição superior a 90%). Além disso, 100 µM de proteína inibiu em mais de 80% da migração celular, mais de 100% da invasão celular, pode reduzir o nível de expressão da interleucina 6, diminuiu a capacidade das células SK-MEL-28 de aderir à laminina e induziu apoptose tardia em 48 h; além disso, foi possível observar uma diminuição nas proteínas pFAK e NF-kB 50 kDa. Embora o peptídeo derivado de sua estrutura (Pep. 27) não tenha sido eficaz em inibir a viabilidade, proliferação e invasão, ele impediu mais de 80% da migração celular em 24 e 48 h, causou uma diminuição na liberação de óxido nítrico e reduziu o número de células viáveis em 24 h. O tratamento combinado de Pep. 27 com o vemurafenibe causou aumento da apoptose precoce após 48 h. O Pep. 26, por outro lado, diminuiu a migração celular em 60%, foi capaz de reduzir a liberação de óxido nítrico, citocina PDGF-AB/BB, adesão celular ao colágeno IV e induziu apoptose precoce e tardia em até 24 h de tratamento. E embora o tratamento combinado não tenha mostrado nenhum efeito significativo em alguns eventos celulares estudados, o tratamento isolado com vemurafenibe causou diminuição da interleucina 8 e potencializou os efeitos da proteína e dos peptídeos em reduzir a liberação dessa interleucina. Conclusão: Os dados mostraram a especificidade da ação dos inibidores de proteases no bloqueio de células do melanoma, e a CrataBL bem como os peptídeos derivados de sua estrutura mostraram efeitos antitumorais importantes que devem continuar a serem investigados. | pt_BR |
| dc.description.abstract | Among the types of skin cancer, melanoma represents about 3% of skin tumors. It is not one of the most common tumors, but it is one of the most aggressive and, in the absence of effective treatment, it is necessary to look for new drugs. In cancers (in general), metastasis is facilitated by the proteases of tumor cells. Protease inhibitors, especially protease inhibitors found in legumes, are potential candidates for controlling these events by blocking cancer progression. A chimeric form of the kallikrein inhibitor called rBbKIm (Bauhinia bauhinioides Kallikrein inhibitor modified) has been cloned, the basic structure is from the inhibitor found in B. bauhinioides, and the EPVARGDG and GERD sequences of BrTI (Bauhinia rufa trypsin inhibitor) were included. A deleterious effect of this protein on the prostate tumor cell lines DU145 and PC3 has been reported. Another protein, CrataBL (Crataeva tapia Bark Lectin), which as a lectin, is specific for oligosaccharides present in overexpressed glycosylated proteins in the tumor microenvironment, which is important for tumor growth. Objectives: To investigate the effects of rBbKIm, CrataBL, and peptides derived from their structures in melanoma assays. Materials and Methods: Cells (SK-MEL-28) were treated with rBbKIm, CrataBL, or peptides, and the viability, proliferation, adhesion, migration, invasion, death and cell cycle, cell fragmentation, expression of cell proteins, production of nitric oxide and cytokines were evaluated. Results: Although rBbKIm is capable of inhibiting tissue kallikrein KLK 6 and 7, serine proteases that play an important role in the development of melanoma, both the protein and the peptides derived from rBbKIm sequence did not interfere in viability and proliferation of SK-MEL-28, while CrataBL (100 and 200 µM) reduced cell viability by more than 60%. CrataBL proved to be resistant to proteolysis, as its effect on SK-MEL-28 proliferation was also observed after 72 h of treatment (inhibition greater than 90%). Furthermore, 100 µM of protein inhibited more than 80% of cell migration, more than 100% of cell invasion, reduced the expression level of interleukin 6, decreased the ability of SK-MEL-28 cells to adhere to laminin and induced late apoptosis within 48 h; in addition, it was possible to observe a decrease in pFAK and NF-kB 50 kDa proteins. Although the peptide derived from its structure (Pep. 27) was not effective in inhibiting viability, proliferation and invasion, it prevented more than 80% of cell migration at 24 and 48 h, caused a decrease in nitric oxide release and reduced the number of viable cells in 24 h. The combined treatment of Pep. 27 with vemurafenib caused an increase in early apoptosis after 48 h. The Pep. 26, on the other hand, reduced cell migration by 60%, was able to reduce the release of nitric oxide, the PDGF-AB/BB cytokine, cell adhesion to collagen IV, and induced early and late apoptosis within 24 h of treatment. And although the combined treatment did not show any significant effect on some cellular events studied, the isolated treatment with vemurafenib caused a decrease in interleukin 8 and potentiated the effects of the protein and peptides in reducing the release of this interleukin. Conclusion: The data indicated the specificity of the effect of protease inhibitors in blocking melanoma cells, and CrataBL as well as the peptides derived from its structure, demonstrated antitumor effects, which should continue to be investigated. | pt_BR |
| dc.description.sponsorship | Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) | pt_BR |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | pt_BR |
| dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | pt_BR |
| dc.description.sponsorshipID | Fapesp - 2018/21372-7 | pt_BR |
| dc.emailadvisor.custom | olivaml.bioq@epm.br | pt_BR |
| dc.format.extent | 114 f. | pt_BR |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/67261 | |
| dc.language | por | pt_BR |
| dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo | pt_BR |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | pt_BR |
| dc.subject | Câncer | pt_BR |
| dc.subject | Lectina | pt_BR |
| dc.subject | Melanoma | pt_BR |
| dc.subject | Peptídeos | pt_BR |
| dc.subject | Inibidor de proteases | pt_BR |
| dc.title | Efeitos de peptídeos relacionados ao inibidor quimérico recombinante de Bauhinia bauhinioides, rBbKIm, e à lectina da casca de Crataeva tapia, CrataBL, no modelo de melanoma | pt_BR |
| dc.title.alternative | Effects of peptides related to the recombinant Bauhinia bauhinioides chimeric inhibitor, rBbKIm, and Crataeva tapia bark lectin, CrataBL, on the melanoma model | en |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | pt_BR |
| unifesp.campus | Escola Paulista de Medicina (EPM) | pt_BR |
| unifesp.graduateProgram | Ciências Biológicas (Biologia Molecular) | pt_BR |