Avaliação da interação entre o papilomavírus bovino e a célula hospedeira

Página do item simplificado
dc.contributor.advisorKerkis, Irina Kerkis [UNIFESP]pt
dc.contributor.advisor-coStocco, Rita de Cássia
dc.contributor.advisor-coLatteshttp://lattes.cnpq.br/8807278169991830
dc.contributor.authorMelo, Thatiana Correa de [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/2425111638231335
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)pt
dc.date.accessioned2018-07-30T11:44:38Z
dc.date.available2018-07-30T11:44:38Z
dc.date.issued2015-02-27
dc.description.abstractBovine papillomaviruses (BPVs) are oncogenic virus, with epithelium and mucous tropism, associated to benign lesions which can progress to malignancy, principally in presence of the environmental co-factors. Currently, there are 13 types of BPV described, classified in three genres: Delta, Epsilon and Xipapillomavirus. Objectives: This study aimed to identify the interaction between the BPV with primary cell cultures, as well as the virus with peripheral blood cells from bovines infected by BPV with different clinical characteristics of bovine papillomatosis. The viral activity was evaluated through the BPV proteins expression, morphological alterations and levels of clastogenicity. Methods: Samples of peripheral blood and tissue were collected from bovines uninfected by BPV, as well as, animals with cutaneous papillomas, esophagus and urinary bladder papillomas. The tissue samples were submitted to histopathological analysis and BPV detection. Primary cell cultures of each tissue sample were stablished and submitted to the investigation for lineage characterization by morphology, cytoskeletal (vimentin, cytokeratin, E-cadherin, ?-cathenin and actin), focal adhesion (vinculin), expression of E7 oncoprotein, replication (E2 e E1^E4) and capsid protein (L1) of BPV. Cell circle alterations, the levels of clastogenicity and the virus particle presence were analyzed in these systems. Results and Discussion: the presence of viral DNA, in episomal state, was detected in the passages of cell culture (P1-P6). Furthermore, the viral proteins expression was detected by RT-PCR, immunofluorescence and flow cytometry. Oncoprotein E7 was identified in cytoplasmatic region, the E2 and E1^E4 proteins were identified in the nucleus and cytoplasm and the L1 protein was present in nuclear and perinuclear region of culture cell and peripheral mononuclear cells (PBMCs). These same proteins were detected in paraffined tissue, being observed in epithelium and dermis. High levels of clastogenicity were identified both in cell culture and PBMCs in all groups of animals with papillomas, but not detected on uninfected bovines. Electron microscopy analysis showed the presence of structures very similar to virus particles. Culture cells from animals infected by BPV showed double labeling of vimentin/cytokeratin and alteration in the labeling standard of E-cadherin and ?-cathenin. Specifically, ?-cathenin was expressed in the cytoplasm and nucleus. These data suggest that these cells could be suffering an epithelial-mesenchymal transition (EMT). The EMT is responsible for the invasion/migration of cells with transformed phenotype, contributing to the metastasis genesis. Furthermore, the culture cells infected by BPV showed nuclear and depolarized F-actin. The protein was retracted in the cellular matrix. The presence of lamelipoids was detected. Probably, these alterations are result of viral protein activity. Conclusion: DNA virus presence in the passages, morphologic alterations and clastogenicity, as well as, the presence of BPV particles and protein expression represent strong evidences that the virus is active, occurring virus assembling in vitro. Alterations in cytoskeleton proteins and co-expression of proteins of epithelial and mesenchymal origin point out that the culture cells are suffering neoplastic modifications, characterized by EMT.en
dc.description.abstractOs papilomavírus bovino (BPV) são vírus oncogênicos, com tropismo para o epitélio e mucosa, associados a lesões benignas que podem progredir à malignidade, principalmente quando na presença de co-fatores ambientais. Atualmente existem 13 tipos de BPVs descritos, classificados em três gêneros: Delta, Epsilon e Xipapillomavirus. Objetivo: Identificar a interação do BPV com células obtidas de culturas primárias e sangue periférico, provenientes de bovinos infectados, apresentando diferentes características clínicas da papilomatose. Métodos: A atividade viral foi avaliada através da análise de expressão de proteínas do BPV por RT- PCR, imunofluorescência, citometria de fluxo, alterações morfológicas e clastogênicas. Foram coletadas amostras de sangue e biópsias de animais não infectados pelo BPV e de animais infectados com o vírus, com papilomatose cutânea, papilomas de esôfago e papilomas de bexiga. Os fragmentos de tecido foram analisados histopatologicamente e, submetidos à detecção de DNA viral. Foram estabelecidos cultivos primários de cada grupo. Cada linhagem foi caracterizada de acordo com a morfologia, marcação de proteínas do citoesqueleto (vimentinas, citoqueratina, E- caderina, ?-catenia e actina) e adesão focal (vinculina), expressão da oncoproteína E7, proteínas de replicação (E2 e E1^E4) e do capsídeo (L1) do BPV, alterações clastogênicas, ciclo celular e investigação da presença de partículas virais nestes sistemas. Resultados e Discussão: Detectou-se a presença do DNA viral por PCR, sendo identificada por hibridização in situ a presença do genoma viral no estado epissomal em passagens celulares (P1-P6) dos cultivos estabelecidos. Além disso, a expressão da proteína E7 (região citoplasmática), das proteínas E2 e E1^E4 (núcleo e citoplasma) e da proteína L1 (região nuclear e perinuclear) foi observada nas células de cultivo primário e em células mononucleadas de sangue periférico (PBMCs). Estas mesmas proteínas foram detectadas por imunoistoquímica em tecido parafinado, sendo observada a expressão na região do epitélio e da derme. Níveis elevados de clastogenicidade foram identificados, tanto no cultivo quanto nos PBMCs, nos grupos de animais clinicamente afetados (papiloma cutâneo e papiloma interno). Análises de microscopia eletrônica evidenciaram a presença de estruturas similares a partículas virais. As células de cultivo dos grupos clinicamente afetados por BPV apresentaram dupla marcação de vimentina/citoqueratina e padrão de marcação alterado de E-caderina e ?- catenina. A ??catenina se mostrou expressa no citoplasma e no núcleo. Estes dados sugerem que essas células se encontram em transição epitélio-mesênquima (TEM). A TEM é responsável pela invasão/migração de células com fenótipo cancerígeno, contribuindo na gênese de metástases. As células cultivadas com BPV possuíam: F-actina nuclear e F- actina despolimerizadas e retraídas na matriz celular. Além disso, foi observada a formação de lamelipóidios. Provavelmente estas alterações são decorrentes da atividade de proteínas virais. Conclusões: A presença de DNA do vírus nas passagens, alterações morfológicas e clastogênicas, bem como a presença de supostas partículas do BPV e expressão de proteínas representam evidências de que o vírus pode estar se montando e mantendo atividade in vitro. Alterações tanto das proteínas do citoesqueleto, quanto a co-expressão de proteínas de origem epitelial e mesenquimal apontam para as primeiras modificações celulares de um processo de desenvolvimento neoplásico.pt
dc.identifierhttps://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3109553pt
dc.identifier.citationMELO, Thatiana Correa de. Avaliação da interação entre o papilomavírus bovino e a célula hospedeira. 2015. Tese (Doutorado em Biologia Estrutural e Funcional) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015.
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47510
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.subjectPapilomavírus bovinoen
dc.subjectPrimary cultureen
dc.subjectProtein expression bpven
dc.subjectOncogenic virusen
dc.subjectClastogenicityen
dc.subjectBovinoen
dc.subjectPapilomavírus bovinopt
dc.subjectCultura primáriapt
dc.subjectExpressão de proteínas do bpvpt
dc.subjectVírus oncogênicopt
dc.subjectClastogênesept
dc.subjectBovinopt
dc.titleAvaliação da interação entre o papilomavírus bovino e a célula hospedeirapt
dc.title.alternativeEvaluation of the interaction between bovine papillomavirus and the host cellen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt
unifesp.graduateProgramBiologia Estrutural e Funcionalpt
unifesp.knowledgeAreaCiências biológicaspt
unifesp.researchAreaBiologia geralpt
Arquivos
Pacote Original
Agora exibindo 1 - 1 de 1
Imagem de Miniatura
Nome:
Thatiana Corrêa de Melo-A.pdf
Tamanho:
10.85 MB
Formato:
Adobe Portable Document Format
Descrição:
Tese Doutorado
Baixar
Coleções
PPG - Biologia Estrutural e Funcional