Marcadores moleculares do cromossomo Y em DNA de mucosa oral e sangue periferico de pacientes com Síndrome de Turner
Data
2020-08-05
Autores
Barbosa, Lene Garcia 
Orientadores
Castro, Angela Maria Spinola E
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Considering the high percentage of mosaicism and the possible clinical impact of the presence of fragments of the Y chromosome in patients with Turner Syndrome, we proposed in this study to develop a multiplex polymerase chain reaction (mPCR) to evaluate the presence of these fragments in two tissues with origin different embryonic cells, such as peripheral blood lymphocytes (mesoderm) and oral mucosa cells (ectoderm). DNA samples were collected from 109 patients. Primers for mPCR were built with the help of the MPprimer program to assess possible interactions between them. Two genes present on the Y chromosome and one on the X were used. The amplified samples were evaluated by conventional electrophoresis on 1.8% agarose gel and subsequently by capillary electrophoresis. We found 14 patients (12.8%) with positive molecular markers for Y chromosome, both in the blood and in the oral mucosa swab. The karyotype showed a sensitivity of 95.8%, but a specificity of 28.6% in relation to the molecular test. In conclusion, the mPCR protocol established in this study, combined with capillary electrophoresis, proved to be efficient for identifying Y fragments and must be used in the outpatient routine. The study of tissues of different embryological origin, such as blood and oral tissue obtained the same degree of agreement, as well as the same sensitivity and specificity.
Considerando a alta porcentagem de mosaicismo e o possível impacto clínico da presença de fragmentos do cromossomo Y nas pacientes com Síndrome de Turner, propusemos neste estudo desenvolver uma reação em cadeia da polimerase multiplex (mPCR) para avaliar a presença destes fragmentos em dois tecidos com origem embrionárias diferentes, como linfócitos de sangue periférico (mesoderma) e células de mucosa oral (ectoderma). Foram coletadas amostras de DNA de 109 pacientes. Os primers para mPCR foram construídos com a ajuda do programa MPprimer para avaliar possíveis interações entre eles. Foram utilizados dois genes presentes no cromossomo Y e um no X. As amostras amplificadas foram avaliadas por eletroforese convencional em gel de agarose a 1,8% e subsequentemente por eletroforese capilar. Foram encontrados 14 pacientes (12,8%) com marcadores moleculares positivos para cromossomo Y, tanto no sangue quanto no swab de mucosa oral. O cariótipo apresentou uma sensibilidade de 95,8%, mas uma especificidade de 28,6% em relação ao teste molecular. Em conclusão, o protocolo da mPCR estabelecido nesse trabalho aliado à eletroforese capilar demonstrou-se eficiente para identificação de fragmentos de Y podendo ser utilizado na rotina ambulatorial. O estudo de tecidos de origem embriológicas diferentes, como sangue e tecido bucal obteve o mesmo grau de concordância, assim como a mesma sensibilidade e especificidade.
Considerando a alta porcentagem de mosaicismo e o possível impacto clínico da presença de fragmentos do cromossomo Y nas pacientes com Síndrome de Turner, propusemos neste estudo desenvolver uma reação em cadeia da polimerase multiplex (mPCR) para avaliar a presença destes fragmentos em dois tecidos com origem embrionárias diferentes, como linfócitos de sangue periférico (mesoderma) e células de mucosa oral (ectoderma). Foram coletadas amostras de DNA de 109 pacientes. Os primers para mPCR foram construídos com a ajuda do programa MPprimer para avaliar possíveis interações entre eles. Foram utilizados dois genes presentes no cromossomo Y e um no X. As amostras amplificadas foram avaliadas por eletroforese convencional em gel de agarose a 1,8% e subsequentemente por eletroforese capilar. Foram encontrados 14 pacientes (12,8%) com marcadores moleculares positivos para cromossomo Y, tanto no sangue quanto no swab de mucosa oral. O cariótipo apresentou uma sensibilidade de 95,8%, mas uma especificidade de 28,6% em relação ao teste molecular. Em conclusão, o protocolo da mPCR estabelecido nesse trabalho aliado à eletroforese capilar demonstrou-se eficiente para identificação de fragmentos de Y podendo ser utilizado na rotina ambulatorial. O estudo de tecidos de origem embriológicas diferentes, como sangue e tecido bucal obteve o mesmo grau de concordância, assim como a mesma sensibilidade e especificidade.