Estabelecimento de um modelo celular para o screening de peptídeos relacionados a liberação de DNA mitocondrial e a ativação de vias inflamatórias
dc.contributor.advisor | Tavassi, Ana Marisa Chudzinski [UNIFESP] | |
dc.contributor.advisorLattes | http://lattes.cnpq.br/6899353560628046 | pt_BR |
dc.contributor.author | Rocha, Ana Paula da [UNIFESP] | |
dc.contributor.authorLattes | http://lattes.cnpq.br/6490044094088057 | pt_BR |
dc.coverage.spatial | São Paulo | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2021-09-27T18:59:21Z | |
dc.date.available | 2021-09-27T18:59:21Z | |
dc.date.issued | 2021-04-26 | |
dc.description.abstract | Introdução: Estudos preliminares demonstraram que peptídeos desenhados a partir de sequências de aminoácidos de proteínas purficadas a partir extrato bruto das cerdas da lagarta L.obliqua e de proteínas recombinantes obtidas através de uma biblioteca de cDNA das glândulas salivares do carrapato Amblyomma sculptun são capazes de desencadear citoproteção. O processo autofágico mitocondrial pode ser considerado um mecanismo citoprotetor e anti-inflamatório, pois além de favorecer a degradação das organelas disfuncionais, induz alterações morfológicas que minimizam o escape de espécies reativas de oxigênio (ROS) e de DNA mitocondrial (mtDNA) para o citoplasma. Os macrófagos desempenham um papel central durante o processo inflamatório, portanto, eles foram escolhidos como tipo celular para o estabelecimento de uma plataforma de screening usando potencias peptídeos com funções biológicas. Objetivos: O presente trabalho tem como objetivo geral avaliar a participação de peptídeos com atividade anti-inflamatória no processo de autofagia de macrófagos derivados de THP-1, através da caracterização de novas vias que levem a liberação de mtDNA e a ativação de vias inflamatórias. Métodos: O desenho e escolha dos peptídeos mais promissores foi baseado em estudos prévios do grupo. Inicialmente, a padronização do modelo celular para o screening foi definida através do perfil de translocação do fator de transcrição NF-Kb utilizando a ferramenta de High-Content Screening (HCS), em condições de privação de soro fetal bovino (1 % de SFB). Essa metodologia nos permitiu o delineamento de forma semi-automatizada e customizada de todas as padronizações e experimentos subsequentes, como por exemplo, avaliação da liberação de TNFα por multiplex; caracterização da morfologia de redes mitocondriais através de microscopia confocal de varredura utilizando sondas específicas; definição das condições de cultivo celular para a liberação de mtDNA através de PCR em tempo real; e finalmente, o estudo da ativação da via do inflamassoma NLRP3. Todos estes ensaios foram determinantes para a validação do modelo celular. Resultados: Durante restrição calórica (1% SFB), observou-se redução significativa na translocação de NF-kB, um parâmetro clássico para o estudo de autofagia. Por microscopia confocal, verificou-se um aumento significativo das redes mitocondriais frente ao tratamento com os peptídeos e sob restrição nutricional. Observou-se também uma redução da liberação de mtDNA para o meio extracelular durante a privação de soro e sob o estímulo com os peptídeos estudados. Ainda, verificamos uma redução da expressão da proteína NLRP3, também durante a indução de autofagia e principalmente sob tratamento com o peptídeo denominado L3. Conclusão: Diante dos resultados obtidos, pode-se sugerir que foi implementado um modelo celular o screening de moléculas de interesse farmacológico que permite estudar moléculas responsivas em condições inflamatórias e autofágicas. | pt_BR |
dc.description.provenance | Submitted by Ana Paula da Rocha (ana.rocha16@unifesp.br) on 2021-09-27T15:20:37Z No. of bitstreams: 1 AnaPaula_dissertação_UNIFESP_Repositório.pdf: 1352169 bytes, checksum: cd2fc5bbfa1550dda228c3bf57114201 (MD5) | en |
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dc.description.sponsorship | Outra | pt_BR |
dc.format.extent | 57 f. | pt_BR |
dc.identifier.citation | ROCHA, Ana Paula da. Estabelecimento de um modelo celular para o screening de peptídeos relacionados a liberação de DNA mitocondrial e a ativação de vias inflamatórias. 2021. 57 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas (Biologia Molecular) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, 2021. | pt_BR |
dc.identifier.uri | https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/62016 | |
dc.language | por | pt_BR |
dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo | pt_BR |
dc.rights | Acesso aberto | pt_BR |
dc.subject | Macrófagos | pt_BR |
dc.subject | Screening | pt_BR |
dc.subject | DNA mitocondrial, | pt_BR |
dc.subject | Inflamação | pt_BR |
dc.title | Estabelecimento de um modelo celular para o screening de peptídeos relacionados a liberação de DNA mitocondrial e a ativação de vias inflamatórias | pt_BR |
dc.title.alternative | Establishment of a cell model for the screening of peptides related to release of mitochondrial DNA and activation of inflammatory pathways | pt_BR |
dc.type | Dissertação de mestrado | pt_BR |
unifesp.campus | Escola Paulista de Medicina (EPM) | pt_BR |
unifesp.graduateProgram | Ciências Biológicas (Biologia Molecular) | pt_BR |
unifesp.knowledgeArea | Biologia Molecular | pt_BR |
unifesp.researchArea | Biologia Molecular | pt_BR |
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