Caracterização biofísica de vesículas catiônicas de dodab contendo C24:1 beta-glicosilceramida (βGlcCer)
Data
2019-05-30
Autores
Martins, Leticia de Souza 
Orientadores
Rozenfeld, Julio Henrique Kravcuks
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Objective: To characterize the structure of DODAB vesicles containing βGlcCer using differential scanning calorimetry (DSC), electron paramagnetic resonance (EPR) spectroscopy and fluorescence microscopy. Methods: Pure vesicles of DODAB, βGlcCer, and also mixed vesicles of DODAB plus βGlcCer were prepared from lipid films resulting from the evaporation of chloroform: methanol solutions. EPR, DSC and fluorescence microscopy experiments were performed using 5 mol%, 9 mol% and 16 mol% of βGlcCer in relation to the total lipid concentration. Results: It was shown that βGlcCer destabilized the gel phase of DODAB vesicles by decreasing the gel phase packing. Thus, βGlcCer induced a decrease in the phase transition temperature and cooperativity of DODAB vesicles, as seen in DSC thermograms. EPR spectra also showed that βGlcCer induced an increase in the order and / or rigidity of the DODAB fluid phase. Despite their different structures, a similar effect of loosening of the gel phase and stiffening of the fluid phase was observed when low cholesterol fractions were incorporated into the DODAB vesicles. Conclusion: βGlcCer is completely miscible with DODAB at all fractions tested, since no domains were observed by fluorescence microscopy or ESR spectra. Structural characterization of DODAB vesicles containing βGlcCer may be important for the development of novel immunotherapeutic tools such as vaccine adjuvants.
Objetivo: Caracterizar a estrutura de vesículas de DODAB contendo βGlcCer usando as técnicas de calorimetria diferencial de varredura (DSC), espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica (EPR) e de microscopia de fluorescência. Métodos: Vesículas puras de DODAB, βGlcCer, e também vesículas mistas de DODAB contendo βGlcCer, foram preparadas a partir de filmes lipídicos resultantes da evaporação de soluções de clorofórmio:metanol. Foram feitos os experimentos de EPR, DSC e os ensaios de microscopia de fluorescência utilizando frações molares de 5 mol%, 9 mol% e 16 mol % de βGlcCer em relação a concentração total de lipídios. Resultados: Foi mostrado que βGlcCer desestabiliza a fase gel das vesículas de DODAB ao diminuir o empacotamento desta fase. Dessa forma, βGlcCer induz uma diminuição da temperatura e da cooperatividade de transição de fase das vesículas de DODAB, como mostrado nos termogramas de DSC. Os espectros de EPR também mostraram que o βGlcCer induziu um aumento na ordem e / ou rigidez da fase fluida de DODAB. Apesar de suas diferentes estruturas, um efeito similar de afrouxamento da fase gel e enrijecimento da fase fluida foi observado quando frações molares baixas de colesterol foram incorporadas às vesículas de DODAB. Conclusão: Foi constatado que βGlcCer é completamente miscível com DODAB em todas as frações testadas, já que nenhum domínio foi observado pelas técnicas de microscopia de fluorescência e de EPR. A caracterização estrutural de vesículas de DODAB contendo βGlcCer pode ser importante para o desenvolvimento de novas ferramentas imunoterapêuticas tais como adjuvantes de vacinas.
Objetivo: Caracterizar a estrutura de vesículas de DODAB contendo βGlcCer usando as técnicas de calorimetria diferencial de varredura (DSC), espectroscopia de ressonância paramagnética eletrônica (EPR) e de microscopia de fluorescência. Métodos: Vesículas puras de DODAB, βGlcCer, e também vesículas mistas de DODAB contendo βGlcCer, foram preparadas a partir de filmes lipídicos resultantes da evaporação de soluções de clorofórmio:metanol. Foram feitos os experimentos de EPR, DSC e os ensaios de microscopia de fluorescência utilizando frações molares de 5 mol%, 9 mol% e 16 mol % de βGlcCer em relação a concentração total de lipídios. Resultados: Foi mostrado que βGlcCer desestabiliza a fase gel das vesículas de DODAB ao diminuir o empacotamento desta fase. Dessa forma, βGlcCer induz uma diminuição da temperatura e da cooperatividade de transição de fase das vesículas de DODAB, como mostrado nos termogramas de DSC. Os espectros de EPR também mostraram que o βGlcCer induziu um aumento na ordem e / ou rigidez da fase fluida de DODAB. Apesar de suas diferentes estruturas, um efeito similar de afrouxamento da fase gel e enrijecimento da fase fluida foi observado quando frações molares baixas de colesterol foram incorporadas às vesículas de DODAB. Conclusão: Foi constatado que βGlcCer é completamente miscível com DODAB em todas as frações testadas, já que nenhum domínio foi observado pelas técnicas de microscopia de fluorescência e de EPR. A caracterização estrutural de vesículas de DODAB contendo βGlcCer pode ser importante para o desenvolvimento de novas ferramentas imunoterapêuticas tais como adjuvantes de vacinas.
Descrição
Citação
MARTINS, Letícia de Souza.Caracterização biofísica de vesículas catiônicas de DODAB contendo C24: 1 beta-glicosilceramida (beta-GlcCer). 2019. 57f. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular.) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2019.