Avaliação preliminar da produção de melatonina no tecido adiposo marrom
Data
2019-12-18
Autores
Olescuck, Ingrid Fernandes 
Orientadores
Amaral, Fernanda Gaspar Do
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
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Título de Volume
Resumo
Objective: Verify the existence of local melatonin production in brown adipose tissue. Methods: We realized three experimental models. In experiment I the animals were euthanized every three hours during 24 hours, with no challenge to the interscapular brown adipose tissue (BAT IE). In experiment II the animals were exposed to hipercaloric food over 24h or to cold temperature (13°C) during 3 hours before euthanasia at ZT10. In experiment III the animals were euthanized at ZT18 and there was no additional challenge to the tissue. In all three experiments the animals were assigned to three groups: control, pinealectomized (PINX) and pinealectomized with oral melatonin replacement (PINX/MEL). We collected BAT IE from all animals for the analyses. Results: mRNA from TPH1 enzyme was accessed by PCR reaction in control, PINX and PINX/MEL groups. However it was not possible to standardize the PCR and the Western Blot reactions for AANAT and HIOMT enzymes. In contrast, immunohistochemistry showed the presence of the proteins from both these enzymes (AANAT and HIOMT) in samples obtained by experiment III. Also, we were able to verify AANAT activity in BAT IE from samples obtained for tests, but we were not able to perform this procedure in our experimental samples due to technical limitations. Discussion: Despite all the technical challenges, the present data strongly suggests the presence of local melatonin production in BAT IE. However, more studies are needed to fully prove that.
Objetivo: Verificar a existência da produção de melatonina no tecido adiposo marrom. Métodos: foram realizados 3 modelos experimentais. No experimento I os animais eram eutanasiados a cada 3h em um período de 24h, sem desafio ao tecido adiposo marrom interescapular (TAM IE); no experimento II os animais eram expostos à dieta hiperlipídica durante 24h ou ao frio de 13°C durante 3h antes da eutanásia no ZT10; e no experimento III os animais foram eutanasiados no ZT18 e não passaram por nenhum desafio extra. Em todos os três experimentos os animais foram separados em controles, pinealectomizados (PINX) e pinealectomizados com reposição de melatonina (PINX/MEL), sendo coletado o TAM IE de todos os animais. Resultados: obtivemos a expressão de RNA mensageiro (mRNA) da enzima TPH1 em controles, PINX e PINX/MEL dos experimentos I e II. Porém, não conseguimos concluir a padronização da reação de PCR e do ensaio de Western Blot para as enzimas HIOMT e AANAT. Em contrapartida, conseguimos visualizar estas proteínas por imuno-histoquímica das amostras coletadas do experimento III. Também verificamos a atividade enzimática da AANAT em amostras testes, ainda que não tenha sido possível realizar o ensaio nas amostras de interesse por limitações técnicas. Discussão: apesar das dificuldades encontradas para padronizar a PCR e o Western Blot para as enzimas AANAT e HIOMT no TAM IE, os presentes dados sugerem que exista uma síntese local de melatonina nesse tecido, sendo necessários mais estudos para confirmar esta produção.
Objetivo: Verificar a existência da produção de melatonina no tecido adiposo marrom. Métodos: foram realizados 3 modelos experimentais. No experimento I os animais eram eutanasiados a cada 3h em um período de 24h, sem desafio ao tecido adiposo marrom interescapular (TAM IE); no experimento II os animais eram expostos à dieta hiperlipídica durante 24h ou ao frio de 13°C durante 3h antes da eutanásia no ZT10; e no experimento III os animais foram eutanasiados no ZT18 e não passaram por nenhum desafio extra. Em todos os três experimentos os animais foram separados em controles, pinealectomizados (PINX) e pinealectomizados com reposição de melatonina (PINX/MEL), sendo coletado o TAM IE de todos os animais. Resultados: obtivemos a expressão de RNA mensageiro (mRNA) da enzima TPH1 em controles, PINX e PINX/MEL dos experimentos I e II. Porém, não conseguimos concluir a padronização da reação de PCR e do ensaio de Western Blot para as enzimas HIOMT e AANAT. Em contrapartida, conseguimos visualizar estas proteínas por imuno-histoquímica das amostras coletadas do experimento III. Também verificamos a atividade enzimática da AANAT em amostras testes, ainda que não tenha sido possível realizar o ensaio nas amostras de interesse por limitações técnicas. Discussão: apesar das dificuldades encontradas para padronizar a PCR e o Western Blot para as enzimas AANAT e HIOMT no TAM IE, os presentes dados sugerem que exista uma síntese local de melatonina nesse tecido, sendo necessários mais estudos para confirmar esta produção.
Descrição
Citação
Olesçuck, Ingrid Fernandes. Avaliação preliminar da produção de melatonina no tecido adiposo marrom. 2019. 72f. Dissertação (Mestrado em Neurologia e Neurociências) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2019.