Análise do proteoglicano glipicam e a via de sinalização wnt: seu papel no câncer de próstata
Data
2016-06-30
Autores
Moraes, Gabrielle Ferrante Alves de 
Orientadores
Toma, Leny Toma
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Prostate cancer development proceeds through a multiple steps to reach advanced metastasis. Identifying the signaling pathway involved in this cascade, which initiates at the cell surface microenvironment, could lead to the interruption of this cancer progresso Glypicans are cell surface proteoglycans linked to the membrane through glycosyl-phosphatidylinositol anchor. Interactions with specific ligants have been reported to trigger diverse signaling, including Wnts. In this study we sought to investigate whether there is a correlation between the expression of glypicans in prostate cancer cell lines and the Wnt signaling pathway. For this purpose, tumor cell lines PC-3, DU-145 e LNCaP were used compared to the normal RWPE-1 cells. Glypican expression pattern was analyzed by RT-PCR and showed that glypican-1 isoform was expressed at high levels by the cells, with exception of LNCaP cell line which express mainly glypican-5. Glypican-1 was investigated by immunocytochemistry, whose subcellular localization was achieved at the cell surface in RWPE-1 and PC-3 cells. Interestingly, in DU-145 cells glypican-1 was found in cytoplasmic compartment. Analysis by flow cytometry confirmed glypican in the cell lines, as well as the presence of the Wnt-3a ligant and activated [3-catenin. In order to investigate the involvement of glypican proteoglycan in this signaling pathway, co-immunoprecipitation with Wnt-3a was done. Increased levels of these proteins were detected in cancer cells, suggesting the link of glypican with this pathway. Translocation of [3-catenin to the nucleus has been associated with progression to malignant prostate carcinogenesis. So, nuclear and cytoplasm [3-catenin was investigated and a markedly increase in nuclear [3-catenin was observed in cancer cell lines, compared to RWPE-1 cells. In conclusion, glypican expression in prostate cancer cell lines correlates with activated nuclear [3-catenin via Wnt-3a ligant and has the potential to interfere in events of the canonical Wnt signaling pathway which can control neoplastic growth and disease progression.
o desenvolvimento do câncer de próstata prossegue através de várias etapas para alcançar a metástase avançada. A identificação da via de sinalização envolvida nesta cascata, que se inicia no microambiente da superfície celular, pode levar a meios de interrupção deste progresso do câncer. Os glipicans são proteoglicanos de superfície celular ligados à membrana através de uma âncora de glicosilfosfatidilinositol. Interações com ligantes específicos têm sido relatadas para desencadear diferentes sinalizações celulares, incluindo as proteínas Wnts. Neste estudo, investigou-se a possível correlação entre a expressão de glipicans em linhagens celulares de câncer de próstata e a via de sinalização Wnt. Para isso, foram utilizadas as linhagens celulares tumorais PC-3, DU-145 e LNCaP em comparação à célula normal RWPE-1. O padrão de expressão de glipicans foi analisado por RT-PCR, e os resultados mostraram que a isoforma glipicam-1 foi expressa em altos níveis pelas células analisadas, com exceção da linhagem LNCaP, a qual expressou principalmente glipicam-5. Glipicam-1 foi investigado por imunocitoquímica, cuja localização subcelular foi observada na superfície celular em RWPE-1 e PC-3. Interessantemente, nas células DU-145, o glipicam-1 foi encontrado no compartimento citoplasmático. As análises por citometria de fluxo confirmaram a expressão de glipicam nas linhagens celulares, bem como a presença do ligante Wnt-3a e ~-Catenina ativada. A fim de investigar o envolvimento do proteoglicano glipicam nesta via de sinalização, foi realizada uma co-imunoprecipitação com Wnt-3a. Foram detectados níveis aumentados desta proteína nas células tumorais, sugerindo uma ligação de glipicam com esta via. A translocação da ~-Catenina para o núcleo vem sendo associada com a progressão para malignidade da carcinogênese da próstata. Desta forma, a ~-Catenina citoplasmática e nuclear foram investigadas e um aumento no compartimento nuclear foi observado nas linhagens celulares tumorais, comparadas à linhagem RWPE-1. Em conclusão, a expressão de glipicam nas linhagens celulares tumorais de próstata está correlacionada com a ~-Catenina nuclear ativada via ligante Wnt-3a e tem o potencial de interferir em eventos da via de sinalização Wnt canônica que podem controlar o crescimento e a progressão da doença neoplásica.
o desenvolvimento do câncer de próstata prossegue através de várias etapas para alcançar a metástase avançada. A identificação da via de sinalização envolvida nesta cascata, que se inicia no microambiente da superfície celular, pode levar a meios de interrupção deste progresso do câncer. Os glipicans são proteoglicanos de superfície celular ligados à membrana através de uma âncora de glicosilfosfatidilinositol. Interações com ligantes específicos têm sido relatadas para desencadear diferentes sinalizações celulares, incluindo as proteínas Wnts. Neste estudo, investigou-se a possível correlação entre a expressão de glipicans em linhagens celulares de câncer de próstata e a via de sinalização Wnt. Para isso, foram utilizadas as linhagens celulares tumorais PC-3, DU-145 e LNCaP em comparação à célula normal RWPE-1. O padrão de expressão de glipicans foi analisado por RT-PCR, e os resultados mostraram que a isoforma glipicam-1 foi expressa em altos níveis pelas células analisadas, com exceção da linhagem LNCaP, a qual expressou principalmente glipicam-5. Glipicam-1 foi investigado por imunocitoquímica, cuja localização subcelular foi observada na superfície celular em RWPE-1 e PC-3. Interessantemente, nas células DU-145, o glipicam-1 foi encontrado no compartimento citoplasmático. As análises por citometria de fluxo confirmaram a expressão de glipicam nas linhagens celulares, bem como a presença do ligante Wnt-3a e ~-Catenina ativada. A fim de investigar o envolvimento do proteoglicano glipicam nesta via de sinalização, foi realizada uma co-imunoprecipitação com Wnt-3a. Foram detectados níveis aumentados desta proteína nas células tumorais, sugerindo uma ligação de glipicam com esta via. A translocação da ~-Catenina para o núcleo vem sendo associada com a progressão para malignidade da carcinogênese da próstata. Desta forma, a ~-Catenina citoplasmática e nuclear foram investigadas e um aumento no compartimento nuclear foi observado nas linhagens celulares tumorais, comparadas à linhagem RWPE-1. Em conclusão, a expressão de glipicam nas linhagens celulares tumorais de próstata está correlacionada com a ~-Catenina nuclear ativada via ligante Wnt-3a e tem o potencial de interferir em eventos da via de sinalização Wnt canônica que podem controlar o crescimento e a progressão da doença neoplásica.
Descrição
Citação
MORAES, Gabrielle Ferrante Alves de. Análise do proteoglicano glipicam e a via de sinalização wnt: seu papel no câncer de próstata. 2016. 76 f. Dissertação (Mestrado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.