Identificação de inibidores específicos para a protease NS2B-NS3 do flavivírus Zika

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dc.audience.educationlevelMestrado
dc.contributor.advisorTanaka, Aparecida Sadae [UNIFESP]
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/1168789309568199
dc.contributor.authorSanto, Camila Cardoso Di [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/8450399142263600
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.date.accessioned2022-07-21T16:02:55Z
dc.date.available2022-07-21T16:02:55Z
dc.date.issued2020-01-30
dc.description.abstractBesides Dengue, Chikungunya and Yellow Fever Aedes aegypti mosquitoes also transmits Zika virus, and despite vigorous reasearch no vaccine or antiviral is available, and considering no therapy is available a specific Zika virus inhhibitor would allow a faster drug treatment. Zika does not present as severe symptoms as Dengue or Chikungunya, but cases of microcephaly and Guillan-Barré syndrome have been reported, specially microcephaly in fetuses and newborn child, and both consequences of utmost importance. Among viral proteases, NS2B-NS3 represents one of the most studied drug targets due to its role in viral replication, cleaving flaviviral poliproteins into structural and non-structural proteins. In order to find such a specific inhibitor the present work focused on two approaches: 1) identify an inhibitor through kinetic assays of previously characterized molecules from Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular de Artrópodes e Hematófagos (UNIFESP-EPM); and 2) through phage display technique expose the purified recombinant NS2B-NS3 protein to a mutant library previously elaborated. This library, TiPI 1, carry mutations from P2 to P2’, including its reactive site. Regarding the screening, two inhibitors were found: 1) BmKK with Ki of 36.01 nM and 2) Boophilin D1 with Ki of 15.53 nM, in which docking studies suggests interaction between residues D83 from NS2B and reactive site residue K31 from Boophilin D1, the D83 residue was previously described as important for correct folding and therefore activity of NS3 protease. Regarding phage display technique, no unique and redundant mutant sequence was obtained and therefore explored as possible inhibitor, glutamine residues were found throughout the sequences, in P2, P1, P1’ and P2’ positions. Besides no positive results regarding TiPI 1 a new mutant library with the best inhibitor founded, Boophilin D1, should be studied in order to enhance the pursuit of a specific Zika virus inhibitor, enabling even the applications of this method to other flaviviral proteases.en
dc.description.abstractAlém das arboviroses como Dengue, Chikungunya e Febre amarela, o mosquito Aedes aegypti é também transmissor do vírus Zika, e apesar dos recentes esforços, o controle do vetor ainda é um desafio, além das dificuldades de um diagnóstico efetivo e diferencial no estágio inicial da doença. Considerando os desafios apresentados, a descoberta de um inibidor para o cenário do Zika é fundamental pois, apesar de sua apresentação clínica menos severa, existem casos de manifestações neurológicas graves como microcefalia e síndrome de Guillan-Barrè, consequentemente tornando-se um problema de saúde pública. Dentre as proteases virais, a NS2B-NS3 representa um dos alvos farmacológicos mais estudados devido à sua participação no ciclo de replicação viral clivando a poliproteína de flavivírus como Dengue, Zika, Febre do Oeste do Nilo entre outros, originando as proteínas estruturais e não estruturais. Em busca de um inibidor específico para a protease NS2B-NS3 do vírus Zika duas abordagens foram utilizadas: 1) identificação de possíveis inibidores a partir de testes cinéticos de moléculas previamente caracterizadas pelo Laboratório de Bioquímica e Biologia Molecular de Artrópodes e Hematófagos (UNIFESP-EPM); e 2) a partir da técnica de phage display, uma biblioteca de mutantes previamente elaborada, denominada TiPI1 e mutada na região P2 a P2’, foi apresentada à molécula alvo deste trabalho. Dois inibidores foram encontrados: 1) BmKK com Ki de 36,01 nM e 2) Boophilina D1 com Ki de 15,53 nM, no qual estudos de docking sugerem envolvimento do resíduo D83 da NS2B com o resíduo do sítio reativo (K31) do inibidor, resíduo já descrito como importante para dobramento, e, portanto, atividade, da NS3. Os resultados obtidos através do phage display não evidenciaram redundância em relação a uma única sequência, apesar de resíduos de glutamina aparecerem em P2, P1, P1’ e P2’, e embora estes resultados não tenham revelado uma sequência única majoritária, os inibidores encontrados possibilitam a construção de uma biblioteca de mutantes para a protease de Zika que possivelmente pode ser investigada e aplicada para a busca de inibidores de outras proteases de flavivírus.pt_BR
dc.description.sourceDados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2020)
dc.format.extent72 f.
dc.identifierhttps://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=8473363
dc.identifier.citationDI SANTO, Camila Cardoso. Identificação de inibidores específicos para a protease NS2B-NS3 do flavivírus Zika. 2019. 72f. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo. São Paulo, 2019.
dc.identifier.fileCamila Cardoso Di Santo-A.pdf
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/11600/64284
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.subjectZika Víruspt_BR
dc.subjectInibidores De Serinoproteasespt_BR
dc.subjectPhage Displaypt_BR
dc.subjectDockingpt_BR
dc.titleIdentificação de inibidores específicos para a protease NS2B-NS3 do flavivírus Zikapt_BR
dc.title.alternativeIdentification of specific inhibitors for flaviral Zika NS2B-NS3 protease.en
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
unifesp.campusSão Paulo, Escola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduateProgramCiências Biológicas (Biologia Molecular)pt_BR
unifesp.knowledgeAreaBioquimicapt_BR
unifesp.researchAreaProteases E Inibidores De Proteasespt_BR
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