scFv de anticorpo monoclonal anti-idiopático 6.C4 mimetiza o antígeno carcinoembrionário in vitro
Data
2001
Autores
Pignatari, Graciela Conceição 
Orientadores
Han, Sang Won
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Antigeno carcinoembrionario (CEA) e um marcador tumoral para canceres de origem epitelial expresso na maioria dos adenocarcinomas gastrointestinais e e um alvo importante para imunoterapias de cancer. Por ser expresso durante a vida fetal, CEA nao e imunogenico para humanos. Dessa maneira, para possibilitar o seu reconhecimento pelo sistema imunologico, e necessario que mecanismos de tolerancia sejam rompidos. O anticorpo monoclonal anti-idiotipo para CEA, MAb 6.C4, mimetiza a estrutura tridimensional de um epitopo do CEA. Portanto, esse anticorpo ou seus genes podem ser utilizados para a quebra da tolerancia a CEA e, consequentemente, auxiliar no combate ao tumor. Neste trabalho, nos construimos uma molecula de cadeia unica do fragmento variavel, conhecida como scFv (single chain Fv), contendo os genes codificadores das regioes variaveis das cadeias pesada (FVH) e leve (FvL), isolados do hibridoma produtor do Mab 6.C4. O objetivo dessa construcao e demonstrar o funcionamento do gene scFv-6.C4 em bacterias e em celulas de camundongo, visando seu uso para vacina de DNA contra canceres. O produto do gene scFv-6.C4 clonado no vetor pCANTAB5E e expresso em bacterias foi reconhecido por anticorpos especificos ao CEA, MAb 5.D11 e MAb 1.F5H2 por meio de ensaio de competicao. Por immunoblotting, nao foi possivel detectar nenhum sinal, provavelmente devido a alteracao conformacional da scFv6.C4 nas condicoes eletroforeticas. Para expressar a scFv-6.C4 em celulas de mamiferos, nos construimos dois vetores de expressao: pcDNA3/scFv-6.C4 e pcDNA3-PS/scFv-6.C4. Ambos vetores sao derivados do vetor pcDNA3, o qual foi alterado para expressar a scFv-6.C4 intracelularmente ou extracelularmente. Para avaliar o funcionamento destes vetores, nos transfectamos as celulas da linhagem de fibroblasto de camundongo, NIH3T3, com as duas construcoes. A expressao da scFv-6.C4 foi avaliada em nivel de transcricao por RT-PCR e em nivel de traducao por immunoblotting e imunofluorescencia in situ. Por RT-PCR, que nao foi um ensaio quantitativo, pudemos verificar a expressao do gene em ambas as construcoes, utilizando-se os oligonucleotideos especificos...(au)
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2001. 106 p. ilus.