Modelo experimental em doença de Behçet: efeitos da infusão seriada de altas doses de CD40 ligante solúvel recombinante murino em camundongos C57BL/6J, BALB/CJ, FVB/NJ e Suíço
Data
2023-08-30
Autores
Cunha, André Luiz Soares da 
Orientadores
Perazzio, Sandro Félix
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
Introdução: Dentre os modelos experimentais para o estudo da doença de Behçet (DB) descritos até o momento, destacam-se o modelo suíno Pitman-Moor induzido por organofosforados, o de ratos Lewis induzido pela proteína de choque térmico, o de camundongos ICR induzido pela infecção por herpesvírus simples tipo 1, o de ratos Lewis induzido pela α-tropomiosina e o de ratos Sprague-Dawley induzido por autoanticorpos anti-neurópilos. Entretanto, nenhum desses modelos é completamente representativo da DB. Apesar da fisiopatologia da DB ser desconhecida, acredita-se que a hiperativação neutrofílica seja fundamental na inflamação sistêmica da DB. Recentemente foram demonstradas altas concentrações da CD40 ligante solúvel (sCD40L) no plasma de pacientes com DB, as quais foram responsáveis por aumentar a explosão respiratória e a liberação de armadilhas neutrofílicas extracelulares por neutrófilos de controles normais e, em especial, dos de pacientes com DB.
Objetivo: Obter um novo modelo murino para DB por meio de infusões seriadas de proteína recombinante sCD40L murina (rm-sCD40L) via intraperitoneal em camundongos C57BL/6J, BALB/CJ, FVB/NJ e Suíço a partir de 4 semanas de vida.
Métodos: Camundongos com quatro semanas de idade, incluindo C57BL/6J, BALB/CJ, FVB/NJ e Suíço, foram injetados intraperitonealmente com doses seriais de rm-sCD40L. Os camundongos C57BL/6J receberam 10ng, 100ng, 1μg, 10μg e 40μg, ou solução salina, até cinco vezes por semana. Os camundongos BALB/CJ, FVB/NJ e Suíço receberam 40μg ou solução salina cinco vezes por semana. Exames físicos semanais foram realizados, e os níveis séricos de rm-sCD40L foram quantificados por ELISA. Os níveis séricos patogênicos alvo para camundongos foram inferidos a partir de dados extrapolados de pacientes com BD (165ng/mL). Após 30 ou 90 dias, os animais foram eutanasiados para análise histológica. Foi realizada exsanguinação para quantificar anticorpos anti-Hep-2 e avaliar o metabolismo oxidativo pela oxidação de diidrorodamina (DHR) antes e após estimulação com acetato de miristato de forbol (PMA), analisada por citometria de fluxo.
Resultados: Dentre todas as linhagens avaliadas, apenas a linhagem C57BL/6J atingiu os níveis séricos alvo após infusões de 40μg de rm-sCD40L, administradas 5 vezes por semana. Não foram observadas alterações fenotípicas semelhantes à DB ou morte dos animais em nenhuma das linhagens. Todos os grupos tratados apresentaram reatividade contra células Hep-2 (1:160). As análises histológicas dos órgãos dos camundongos não revelaram danos ou inflamação. O estímulo com PMA resultou em aumento significante no metabolismo oxidativo na linhagem C57BL6J no grupo de 100ng, 1μg e 10μg em comparação com o grupo controle. Além disso, o grupo de 40μg apresentou um aumento ainda maior quando comparado com todos os outros grupos. Em relação à linhagem FVB/NJ, os animais tratados com 40μg de rm-sCD40L apresentaram níveis mais altos de metabolismo oxidativo em comparação com o grupo controle, tanto no estado basal quanto após estímulo com PMA. Não foram observadas diferenças estatísticas metabolismo oxidativo dos granulócitos circulantes dos camundongos BALB/CJ e Suíço.
Conclusão: Embora não tenha sido observado fenótipo semelhante à DB, a reatividade em células Hep-2 (anticorpos antinucleares) e alterações no metabolismo oxidativo sugerem a viabilidade de estabelecer colônias de camundongos C57BL/6J e obter um modelo experimental viável.