Estudos dos efeitos de concentrações crescentes de óxido nitrico no processo de morte por perda de adesão ao substrato (Anoikis): o papel desempenhado no processo pela proteína Src quinase
Data
2017-05-30
Autores
Costa, Paulo Eduardo da 
Orientadores
Monteiro, Hugo Pequeno
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
The study of cell death induced by loss of adhesion (anoikis) is essential to understand how metastatic tumor cells may develop resistance to this type of cell death. Among a number of factors that can influence anoikis, nitric oxide has your role little known in relation to this issue. In adhered cells, it is known that nitric oxide induces cellular proliferation at low concentrations, as well as induces cell death after the treatment with high concentrations. However, in our study, we observed that detached cells behave in a different mode when treated with increase concentrations of NO: Low concentrations of NO induces drop on cell viability in detached HeLa cells, as well as increase levels of cleaved caspase-3. Since high concentrations of NO induces anoikis protection, with increase on cell viability, decreased of caspase-3 cleavage and decrase of expression of Bim protein. Src kinase has been shown to have key role in this mechanism, being phosphorylated and nitrosylated following treatment with high concentrations of NO. Inhibition of Src, can reverse this protection induced by high concentrations of NO with respect to cell viability and expression of Bim protein.These viability results were reproduced in Nex8H metastatic melanomas, but not in non metastatic melanomas Nex10C. In HeLa cells kept in suspension, NO in high concentrations induced cell disaggregation in a Src dependent manner. NO-dependent disaggregation can be reproduced in murine melanoma cells Nex8H and Nex10C. Increasing concentrations of NO decreased the effectiveness of reattachment of HeLa cells kept in suspension. Src kinase showed no role in the process. We know that tumor cells often produce high concentrations of NO. This study shows up as a first step in understanding how these cells can migrate from a primary to a secondary source and got to readhere regarding the role of increasing concentrations of NO in the process.
O estudo do processo de morte celular por perda de adesão (anoikis) é essencial para entendermos como as células tumorais metastáticas podem desenvolver resistência a este tipo de morte. Dentre uma série de fatores que podem influenciar a morte por anoikis, o papel do óxido nítrico (NO) ainda foi pouco explorado . Em células aderidas a matriz extracelular, sabe-se que o NO induz proliferação das mesmas quando produzido ou ofertado em baixas concentrações, ou morte celular quanto produzido ou ofertado em altas concentrações. Entretanto, em condições onde a aderência a matriz extracelular foi impedida, não se conhece o papel do NO. Em nosso estudo, observamos que células que sofrem perda de adesão comportam-se de forma bem diferente frente a esse radical livre. Nesta condição, baixas concentrações de NO induzem queda de viabilidade em células de tumor cervical humano HeLa, e elevação nos níveis de caspase-3 clivada. Já altas concentrações de NO induzem proteção contra a morte por anoikis, com aumento de viabilidade celular, diminuição da clivagem de caspase-3 e elevação nos níveis de expressão da proteína anti-apoptótica Bim. Src quinase desempenha papel central no processo, sendo fosforilada e nitrosilada após o tratamento com altas concentrações de NO e também, revertendo esta proteção induzida por altas concentrações de NO, principalmente quando a viabilidade celular e expressão da proteína Bim foram avaliadas. Ainda observamos que o NO em altas concentrações induziu desagregação celular dependente de Src em células HeLa. Os incrementos na viabilidade celular reproduziram-se em células da linhagem de melanoma murino Nex8h, que são capazes de metastatizar para os pulmões dos camundongos. O mesmo não se observou para as células da linhagem murina não metastática Nex10c. O processo de desagregação dependente do NO reproduziu-se tanto em células murinas metastáticas Nex8h, bem como não metastáticas Nex10c. Em relação à readesão celular, concentrações crescentes de NO induzem comprometimento do processo de readesão de forma concentração dependente. Src quinase não demonstrou função no processo. Sabemos que células tumorais muitas vezes produzem altas concentrações de NO. 11 Entendemos que o modelo experimental que desenvolvemos com o uso de concentrações crescentes de NO e uma condição que mimetiza a perda de adesão a matriz extracelular e pode contribuir significativamente para o entendimento de como células tumorais podem sobreviver ao processo de migração de um foco primário para um foco secundário (resistência a anoikis), readerir e sobreviver no foco secundário.
O estudo do processo de morte celular por perda de adesão (anoikis) é essencial para entendermos como as células tumorais metastáticas podem desenvolver resistência a este tipo de morte. Dentre uma série de fatores que podem influenciar a morte por anoikis, o papel do óxido nítrico (NO) ainda foi pouco explorado . Em células aderidas a matriz extracelular, sabe-se que o NO induz proliferação das mesmas quando produzido ou ofertado em baixas concentrações, ou morte celular quanto produzido ou ofertado em altas concentrações. Entretanto, em condições onde a aderência a matriz extracelular foi impedida, não se conhece o papel do NO. Em nosso estudo, observamos que células que sofrem perda de adesão comportam-se de forma bem diferente frente a esse radical livre. Nesta condição, baixas concentrações de NO induzem queda de viabilidade em células de tumor cervical humano HeLa, e elevação nos níveis de caspase-3 clivada. Já altas concentrações de NO induzem proteção contra a morte por anoikis, com aumento de viabilidade celular, diminuição da clivagem de caspase-3 e elevação nos níveis de expressão da proteína anti-apoptótica Bim. Src quinase desempenha papel central no processo, sendo fosforilada e nitrosilada após o tratamento com altas concentrações de NO e também, revertendo esta proteção induzida por altas concentrações de NO, principalmente quando a viabilidade celular e expressão da proteína Bim foram avaliadas. Ainda observamos que o NO em altas concentrações induziu desagregação celular dependente de Src em células HeLa. Os incrementos na viabilidade celular reproduziram-se em células da linhagem de melanoma murino Nex8h, que são capazes de metastatizar para os pulmões dos camundongos. O mesmo não se observou para as células da linhagem murina não metastática Nex10c. O processo de desagregação dependente do NO reproduziu-se tanto em células murinas metastáticas Nex8h, bem como não metastáticas Nex10c. Em relação à readesão celular, concentrações crescentes de NO induzem comprometimento do processo de readesão de forma concentração dependente. Src quinase não demonstrou função no processo. Sabemos que células tumorais muitas vezes produzem altas concentrações de NO. 11 Entendemos que o modelo experimental que desenvolvemos com o uso de concentrações crescentes de NO e uma condição que mimetiza a perda de adesão a matriz extracelular e pode contribuir significativamente para o entendimento de como células tumorais podem sobreviver ao processo de migração de um foco primário para um foco secundário (resistência a anoikis), readerir e sobreviver no foco secundário.