Estudo Das Vias De Sinalização Intracelular Envolvidas Na Atividade Citoprotetora Do Lopap (Lonomia Obliqua Prothrombin Activator Protease) E Peptídeos Derivados
Data
2017-12-13
Autores
Carvalho, Cicilia De 
Orientadores
Tavassi, Ana Marisa Chudzinski
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
Lopap has been identified as one of the main toxins of the venom of Lonomia obliqua and possibly one of the responsible for the coagulopathy of consumption observed in the victims of poisoning by contact with this animal. From the transcriptome of the caterpillar bristles, th,is molecule was cloned and obtained in recombinant form (rLopap). It has been previously shown that Lopap, as well as rLopap, promote cytoprotection in addition to increasing the expression of adhesion molecules involved in the inflammatory processo Multiple alignment analysis of primary sequences and structural motifs indicated a similarity of 20 to 59% with other proteins belonging to the lipocalin family, proving the presence ofthree characteristic structural motifs that define this family. Considering the second structural motif (motif 2), two peptides were designed and synthesized, P2 (7 residues) and P4 (11 residues). The P4 peptide was able to maintain the viability of endothelial cells induced to apoptosis by serum deprivation, in addition to promoting increased expression of extracellular matrix molecules, such as collagen and fibronectin, thus indicating a possible role in tissue remodeling. A common amino acid sequence between P2 and P4 peptides was suggested as a signature sequence of lipocalins, whose molecular .. ,properties were investigated with the application of molecular modeling, computational chemistry and chemometrics methods. From this in silico evaluation the rational development of new peptides was established. After experimental validation the peptides that presented the best cytoprotective activity were elected to investigate the mechanism of this action.
O Lopap tem sido apontado como uma das principais toxinas do veneno de Lonomia obliqua e, possivelmente, um dos responsáveis pela coagulopatia de consumo observada nas vítimas do envenenamento pelo contato com este animal. A partir do transcriptoma das cerdas da lagarta, esta molécula foi clonada e obtida na forma • recombinante (rLopap). Demonstrou-se previamente que o Lopap, bem como rLopap, promovem citoproteção além de aumentar a expressão de moléculas de adesão envolvidas no processo inflamatório. Análises de alinhamento múltiplo de sequências primárias e de motivos estruturais indicaram similaridade de 20 a 59 % com outras proteínas que pertencem à família das lipocalinas, comprovando ainda a presença de três motivos estruturais característicos, que definem essa família. Considerando o segundo motivo estrutural (motivo 2), dois peptídeos foram desenhados e sintetizados, P2 (7 resíduos) e P4 (11 resíduos). O peptídeo P4 foi capaz de manter a viabilidade de células endoteliais induzidas à apoptose por deprivação de soro, além de promover aumento da expressão de moléculas integrantes da matriz extracelular, como colágeno e fibronectina, indicando assim uma possível atuação na remodelagem tecidual. Sugeriu-se, então, uma sequência comum .•de aminoácidos entre os peptídeos P2 e P4 como sequência-assinatura de lipocalinas, cujas propriedades moleculares foram investigadas com a aplicação de métodos de modelagem molecular, química computacional e quimiometria. A partir desta avaliação in silico estabeleceu-se o desenvolvimento racional de novos peptídeos. Após validação experimental os peptídeos que apresentaram melhor atividade citoprotetora foram eleitos para investigação do mecanismo desta ação
O Lopap tem sido apontado como uma das principais toxinas do veneno de Lonomia obliqua e, possivelmente, um dos responsáveis pela coagulopatia de consumo observada nas vítimas do envenenamento pelo contato com este animal. A partir do transcriptoma das cerdas da lagarta, esta molécula foi clonada e obtida na forma • recombinante (rLopap). Demonstrou-se previamente que o Lopap, bem como rLopap, promovem citoproteção além de aumentar a expressão de moléculas de adesão envolvidas no processo inflamatório. Análises de alinhamento múltiplo de sequências primárias e de motivos estruturais indicaram similaridade de 20 a 59 % com outras proteínas que pertencem à família das lipocalinas, comprovando ainda a presença de três motivos estruturais característicos, que definem essa família. Considerando o segundo motivo estrutural (motivo 2), dois peptídeos foram desenhados e sintetizados, P2 (7 resíduos) e P4 (11 resíduos). O peptídeo P4 foi capaz de manter a viabilidade de células endoteliais induzidas à apoptose por deprivação de soro, além de promover aumento da expressão de moléculas integrantes da matriz extracelular, como colágeno e fibronectina, indicando assim uma possível atuação na remodelagem tecidual. Sugeriu-se, então, uma sequência comum .•de aminoácidos entre os peptídeos P2 e P4 como sequência-assinatura de lipocalinas, cujas propriedades moleculares foram investigadas com a aplicação de métodos de modelagem molecular, química computacional e quimiometria. A partir desta avaliação in silico estabeleceu-se o desenvolvimento racional de novos peptídeos. Após validação experimental os peptídeos que apresentaram melhor atividade citoprotetora foram eleitos para investigação do mecanismo desta ação