Análise da ação da cloroquina e da transcrição do gene de resistência pkcrt em formas sanguíneas de Plasmodium knowlesi in vitro

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dc.contributor.advisorBarros, Roberto Rudge de Moraes [UNIFESP]
dc.contributor.advisorLatteshttp://lattes.cnpq.br/9950186604432191pt_BR
dc.contributor.authorCampolina, Guilherme Antonino da Silva [UNIFESP]
dc.contributor.authorLatteshttp://lattes.cnpq.br/7535401051203301pt_BR
dc.coverage.spatialSão Paulopt_BR
dc.date.accessioned2023-02-06T13:33:53Z
dc.date.available2023-02-06T13:33:53Z
dc.date.issued2022
dc.description.abstractHá anos a cloroquina (CQ) foi a principal droga para o tratamento das formas sanguíneas de malária. Introduzida após a segunda guerra mundial, casos de Plasmodium falciparum resistentes à CQ foram observados a partir de 1957. Parasitos resistentes rapidamente se espalharam, resultando na total remoção de CQ para o tratamento de infecções causadas por P. falciparum a partir do ano 2000. Os primeiros casos de resistência à CQ por Plasmodium vivax foi observado em 1989 e ainda hoje esta é a droga mais recomendada para o tratamento da malária causada por esta espécie no Brasil. A identificação do marcador genético de resistência à CQ em P. falciparum possibilitou o mapeamento e o controle de parasitos resistentes. Mutações do gene pfcrt (“P. falciparum chloroquine resistance transporter”) resultam em polimorfismos funcionais na proteína PfCRT, um transportador localizado na membrana do vacúolo digestivo do parasito, diminuindo o acúmulo de CQ neste compartimento, e sua consequente ação. Análises de sequência do gene pvcrt (ortólogo ao gene pfcrt) em linhagens de P. vivax resistentes à CQ não identificaram polimorfismos associados a esse fenótipo, sustentando a hipótese de um mecanismo de resistência distinto nesta espécie. Estudos sugerem que a modulação nos níveis de expressão de pvcrt pode alterar a resposta do parasito à CQ. Recentemente, um cruzamento genético entre linhagens de P. vivax resistentes e sensíveis à CQ identificou uma região genômica conservada em progênies resistentes. Esta região contém a sequência promotora do gene pvcrt, reforçando o papel da transcrição/expressão de pvcrt na resistência à CQ. Outro estudo indicou que formas trofozoítos de P. vivax apresentam menor sensibilidade à CQ do que outras formas sanguíneas do parasito, justamente a forma com maior expressão de pvcrt. Entretanto, a falta de um sistema de cultivo in vitro dificulta a execução de experimentos sobre o papel da expressão gênica do gene pvcrt na resistência à CQ. Linhagens de P. knowlesi, espécie evolutivamente próxima à P. vivax, foram adaptadas a cultura in vitro. Este projeto tem o objetivo de verificar a ação de CQ em P. knowlesi in vitro, em especial sua ação contra as diferentes formas sanguíneas do parasito – anéis, trofozoítos e esquizontes. Os resultados nos permitirão avaliar a resposta de P. knowlesi à CQ e analisar o papel da expressão do gene pkcrt (ortólogo ao gene pvcrt) no desenvolvimento de resistência à CQ.pt_BR
dc.description.abstractFor many years, chloroquine was the main drug against blood stages of malaria parasites. Introduced after World War II, the first reports of chloroquine-resistant Plasmodium falciparum appeared in 1957. Resistant parasites quickly spread to all endemic regions, resulting in the total removal of CQ for the treatment of P. falciparum infections in 2000. The first cases of P. vivax chloroquine-resistance were reported in 1989, and this is the most used drug for P. vivax malaria treatment until today. The identification of the P. falciparum chloroquine resistance genetic marker enabled the mapping and control of resistant parasites. Mutations in the pfcrt (“P. falciparum chloroquine resistance transporter”) gene generate PfCRT protein polymorphisms. PfCRT is a cell transporter located in the parasite’s digestive vacuole membrane. These mutations decrease the chloroquine accumulation, and consequently action. Sequence analysis of P. vivax chloroquine resistant strains did not identify polymorphisms associated with resistance phenotype in the pvcrt gene (pfcrt ortholog), supporting a hypothesis of distinct resistance mechanism in the species. Studies suggested that modulation in protein expression levels can change the parasite's response to CQ, regardless of functional polymorphisms. Recently, a genetic cross between P. vivax CQ sensitive and resistant strains has identified a conserved genomic region in resistant progenies. This region includes the promoter sequence of the pvcrt gene, reinforcing the role of pvcrt transcription/expression in CQ resistance. Furthermore, a study indicated that trophozoite forms of P. vivax are less sensitive to CQ than other blood stages of the parasite. Trophozoites are the forms with the highest expression of pvcrt. However, the lack of a long-term in vitro culture system makes difficult to carry out experiments to evaluate the role of pvcrt gene expression in CQ resistance. Strains of P. knowlesi, a species evolutionarily close to P. vivax, have been adapted to in vitro culture. This project aims to evaluate the CQ action against P. knowlesi in vitro, and the different responses presented by the parasite's blood stages - rings, trophozoites and schizonts. We will also analyze the transcription and expression of the pkcrt gene (pfcrt and pvcrt ortholog) during the parasite's blood cycle. The results will allow us to evaluate the P. knowlesi response to CQ, and to analyze the role pkcrt gene expression during the development of CQ resistance.en
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pt_BR
dc.description.sponsorshipID2021/01910-7pt_BR
dc.emailadvisor.custommoraes.barros@unifesp.brpt_BR
dc.format.extent50 f.pt_BR
dc.identifier.urihttps://repositorio.unifesp.br/handle/11600/66879
dc.languageporpt_BR
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulopt_BR
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccesspt_BR
dc.subjectCloroquinapt_BR
dc.subjectGene de resistênciapt_BR
dc.subjectPlasmódiopt_BR
dc.subjectParasito da maláriapt_BR
dc.subjectResistance genept_BR
dc.subjectChloroquinept_BR
dc.subjectMalaria parasitept_BR
dc.titleAnálise da ação da cloroquina e da transcrição do gene de resistência pkcrt em formas sanguíneas de Plasmodium knowlesi in vitropt_BR
dc.title.alternativeAnalysis of the chloroquine activity and pkcrt gene transcription in Plasmodium knowlesi blood stages in vitroen
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/bachelorThesispt_BR
unifesp.campusEscola Paulista de Medicina (EPM)pt_BR
unifesp.graduacaoBiomedicinapt_BR
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Trabalho de Conclusão de Curso (TCC) em Biomedicina pela Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
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