Perfil de micrornas circulantes e gravidade em pacientes com anemia falciforme
| dc.audience.educationlevel | Doutorado | |
| dc.contributor.advisor | Figueiredo, Maria Stella [UNIFESP] | |
| dc.contributor.author | Biassi, Thais Priscila [UNIFESP] | |
| dc.contributor.institution | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | pt_BR |
| dc.coverage.spatial | São Paulo | pt_BR |
| dc.date.accessioned | 2020-03-25T12:11:00Z | |
| dc.date.available | 2020-03-25T12:11:00Z | |
| dc.date.issued | 2018-12-13 | |
| dc.description.abstract | Background: Sickle cell anemia (SCA) is a complex disease, associated with hemolysis, vasoocclusion, vascular inflammation and endothelial activation. Significant morbidity and premature mortality are hallmarks of the disease and elevation of tricuspide regurgitant velocity (TRV), determined by dopplerechocardiography, has been associated with higher risk. The identification of biomarkers associated with severity in SCA is desirable. Circulating serum microRNAs (miRNA) are molecular targets studied in different diseases as diagnostic or prognostic markers, however there are few studies in SCA.Purpose: to identify specific signatures of miRNAs in plasma samples of SCA patients according to severity indexes. Methods: Screening of the miRNAs expression was performed in 8 patients. These patients were classified by TRV measure (referred as TRV Score): 4 samples with TVR ≥ 2.5 m/s and 4 with TRV < 2.5 m/s. After extraction of total RNA, the samples were analyzed by realtime PCR using Megaplex RT Human Pool A and Megaplex RTHuman Pool Blife (Thermofisher) comprising 667 distinct miRNAs. Expression Suite Software (Thermofisher) and SPSS were used for analysis. Seventeen miRNAs were differentially expressed between the two groups (p < 0.05) and miR16 was considered as the endogenous candidate. Five differentially expressed miRNAs (miR15b, miR502, miR510, miR544, miR629) were selected for validation in 56 patient samples using TRV Score. Another two severity scores were also used: (a) Organ Injury Score (SLO) – based on the presence or absence of 5 lesions: stroke, TRV ≥ 2.5 m/s, leg ulcers, osteonecrosis, and microalbuminuria (adapted from AfenyiAnnan et al. Transfusion 2008; 48:197) and (b) NIH Bayesian score – available online (http://bios.ugr.es/dsscalculator/). The ROC curve was used to analyze the data of relative expression (2ΔCT) of each miRNA.Results: Two out of five miRNA, miR510 and miR629, were significantly decreased in more severe patients. The miR510 expression allowed the discrimination of the patients according to TRV Score at the cutoff 0,000367664, sensitivity 68,4%, specificity 81.2% and 0,773 (95% IC: 0,6110,935, p = 0,006). The same miRNA was also a good discriminant in the SLO at a cutoff of 0.000331043, sensitivity 70,6%, specificity 72.2% and area under the curve (AUC) of 0.716 (95% CI: 0,5370,894) p = 0.029.The miR629 was related to severity according to the Bayesian Score at the cutoff of 0.0009854449, sensitivity 66.7%, specificity 75% and AUC of 0.729 (95% CI: 0,5270,897, p=0,047). The other miRNAs, miR15b, miR502 and miR544, showed no significant results.Discussion and Conclusions: This is the first study thatlooks into plasma miRNA as a biomarker of SCA severity. The miR510 regulate Peroxirredoxin1 (PRDX1), a protein involved in the stressoxidation. Increased oxidative stress presented in SCA might imply that miR510 has a role in this mechanism. The miR629 appears to be involved in the AKT1 signaling pathway related to Endothelin1. As it is known, endothelin1 is increased in SCA and is important in pulmonary hypertension. The miR510 and miR629 appear to be hypoexpressed in patients with more severe SCA, probably with greater importance in the regulation of clinical manifestations associated with vascular disease, although more studies seem to be necessary. | en |
| dc.description.abstract | Introdução: A anemia falciforme (AF) é uma doença complexa, associada à hemólise, vasooclusão, inflamação vascular e ativação endotelial. A morbidade significativa e a mortalidade prematura são características marcantes da doença e a elevação da velocidade do regurgitante tricúspide (VTR), determinada pelo ecodopplercardiograma, tem sido associada a maior risco. A identificação de biomarcadores associados à gravidade na SCA é desejável. Os microRNAs séricos circulantes (miRNA) são alvos moleculares estudados em diferentes doenças como marcadores diagnósticos ou prognósticos, no entanto, existem poucos estudos em SCA. Objetivo: identificar assinaturas específicas de miRNAs em amostras de plasma de pacientes com AF de acordo com os índices de gravidade. Métodos: A triagem da expressão dos miRNAs foi realizada em 8 pacientes. Esses pacientes foram classificados pela medida TRV (referido como TRV Score): 4 amostras com TVR ≥ 2,5 m/s e 4 com TRV <2,5 m/s. Após a extração do RNA total, as amostras foram analisadas por PCR em tempo real usando Megaplex RT Human Pool A e Megaplex RTHuman Pool Blife (Thermofisher) compreendendo 667 miRNAs distintos. O software Expression Suite (Thermofisher) e o SPSS foram utilizados para análise. Dezessete miRNAs foram diferencialmente expressos entre os dois grupos (p <0,05) e miR16 foi considerado o candidato endógeno. Cinco miRNAs diferencialmente expressos (miR15b, miR502, miR510, miR544, miR629) foram selecionados para validação em 56 amostras de pacientes utilizando o TRV Score. Outros dois escores de gravidade também foram utilizados: (a) Pontuação de Lesão Orgânica (SLO) baseada na presença ou ausência de 5 lesões: acidente vascular cerebral, TRV ≥ 2,5 m / s, úlceras de perna, osteonecrose e microalbuminúria (adaptado de AfenyiAnnan). et al., Transfusion 2008; 48: 197) e (b) NIH Bayesian score disponível online (http://bios.ugr.es/dsscalculator/). A curva ROC foi utilizada para analisar os dados de expressão relativa (2ΔCT) de cada miRNA. Resultados: Dois dos cinco miRNA, miR510 e miR629, foram significativamente diminuídos em pacientes mais graves. A expressão do miR510 permitiu a discriminação dos pacientes de acordo com o TRV Score no cutoff 0,000367664, sensibilidade 68,4%, especificidade 81,2% e 0,773 (95% IC: 0,6110,935, p = 0,006). O mesmo miRNA também foi um bom discriminante no SLO em um ponto de corte de 0,000331043, sensibilidade de 70,6%, especificidade de 72,2% e área sob a curva (AUC) de 0,716 (95% CI: 0,5370,894) p = 0,029. O miR629 foi relacionado à gravidade de acordo com o escore bayesiano no ponto de corte de 0,0009854449, sensibilidade de 66,7%, especificidade de 75% e AUC de 0,729 (IC 95%: 0,5270,897, p = 0,047). Os outros miRNAs, miR15b, miR502 e miR544, não apresentaram resultados significativos. Discussão e Conclusões: Este é o primeiro estudo que analisa o miRNA plasmático como um biomarcador da gravidade da SCA. O miR510 regula a Peroxirredoxina1 (PRDX1), uma proteína envolvida na oxidação do estresse. O aumento do estresse oxidativo apresentado na SCA pode implicar que o miR510 tem um papel nesse mecanismo. O miR629 parece estar envolvido na via de sinalização de AKT1 relacionada à endotelina1. Como é sabido, a endotelina1 está aumentada na AF e é importante na hipertensão pulmonar. Os miR510 e miR629 parecem estar hipoexpressos em pacientes com AF mais grave, provavelmente com maior importância na regulação das manifestações clínicas associadas à doença vascular, embora mais estudos pareçam ser necessários. | pt_BR |
| dc.description.source | Dados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2018) | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | pt_BR |
| dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | pt_BR |
| dc.description.sponsorshipID | FAPESP: 2010/176686 | |
| dc.format.extent | 96 p. | |
| dc.identifier | https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7260763 | pt_BR |
| dc.identifier.file | 2018-1076.pdf | |
| dc.identifier.uri | https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/53131 | |
| dc.language.iso | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | |
| dc.subject | Sickle anemia | en |
| dc.subject | Biomarkers | en |
| dc.subject | Circulating micrornas gravity in sickle cell anemia | en |
| dc.subject | Anemia falciforme | pt_BR |
| dc.subject | Biomarcadores | pt_BR |
| dc.subject | Microrna circulantes gravidade na anemia falciforme | pt_BR |
| dc.title | Perfil de micrornas circulantes e gravidade em pacientes com anemia falciforme | pt_BR |
| dc.title.alternative | Profile of circulating miRNA and disease severity in patients with sickle cell anemia | en |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | |
| unifesp.campus | São Paulo, Escola Paulista de Medicina | pt_BR |
| unifesp.graduateProgram | Medicina (Hematologia) | pt_BR |
| unifesp.knowledgeArea | Ciências Da Saúde | pt_BR |
| unifesp.researchArea | Anemias adquiridas e hereditárias | pt_BR |
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