Adesão Celular e Expressão de Glicosaminoglicanos e Proteoglicanos, alfa-5 beta-1 integrina, fibronectina e receptor de estrógeno em cultura de células endoteliais de cordão umbilical humano
Data
2003
Autores
Dominato, Juliana Augusta Albieri 
Orientadores
Dietrich, Carl Peter von
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
A linhagem ECV304 foi estabelecida a partir da cultura primaria de celulas do cordao umbilical humano (HUVEC). Existem divergencias na literatura sobre a forma que levou a sua imortalizacao. Alguns autores afirmam que essa celula foi contaminada por uma linhagem celular de carcinoma de bexiga humano (T24/83), devido a presenca de fragmentos de DNA identicos entre as 2 linhagens. Outros trabalhos afirmam que as celulas ECV304 sao fruto de uma transformacao espontanea e rara, sofrida pelas celulas HUVEC. Frente as divergencias encontradas, o presente trabalho tem como objetivo o estudo comparativo da linhagem ECV304 com a linhagem de RAEC obtida de aorta de coelho (clone CIPs), objeto de trabalhos anteriores em nosso laboratorio, em relacao a: 1) expressao de glicosaminoglicanos (GAGs) e proteoglicanos (PGs); 2) expressao de hialuronam (HA); 3) expressao de integrinas; 4) presenca de marcadores caracteristicos para celulas endoteliais, como vimentina e receptor de estrogeno; 5) caracteristicas de adesao das celulas ECV304 utilizando como substrato, fibronectina e laminina, em diferentes concentracoes e, em diferentes tempos. As celulas ECV304 sintetizam, depositam na matriz extracelular (MEC) e superficie celular, e secretam para o meio de cultura heparam sulfato (HS) e condroitim sulfato (CS). Nao foi detectado dermatam sulfato (DS) nessas celulas. Resultados semelhantes foram obtidos para a linhagem de aorta de coelh4o. No entanto, o perfil de expressao desses compostos e distinto entre as 2 linhagens. CS corresponde a 60 por cento do total de GAGs na fracao celular e 45 por cento no meio condicionado da linhagem ECV304, contrastando com a linhagem RAEC onde CS corresponde, a 10 por cento e 20 por cento, respectivamente. Ambas linhagens sintetizam HA, e cerca de 80 por cento do total esta depositado na fracao celular. Celulas endoteliais expressam sindecam-4. A linhagem ECV304 expressa esse tipo de proteoglicano, como ja descrito para RAEC e outras celulas endoteliais de diferentes origens. 0 conteudo de a5(31 e distinto entre as 2 linhagens. A expressao da integrina e cerca de 2 vezes maior na linhagem ECV304. No entanto, nao existem diferencas na proporcao das subunidades, ou seja, al corresponde a cerca de 65 por cento nas 2 linhagens. Por outro lado, a linhagem RAEC sintetiza cerca de 4 vezes mais fibronectina do que ECV304. A adesao a moleculas da MEC mostrou que as celulas ECV304 apresentam maior afinidade pela fibronectina e menor para laminina quando comparada com a linhagem RAEC. Esses dados estao de acordo com dados do teor de integrinas. 0 conteudo de compostos que interagem com glicosaminoglicanos esta diminuido na MEC da linhagem ECV304 quando comparado com RAEC, seja por estudos de microscopia confocal como por ensaios de ligacao. Os resultados tambem mostram que as celulas ECV304 sao positivas para marcadores de celulas endoteliais, evidenciado pelo uso de anticorpos especificos para vimentina e receptores de estrogenio. 0 conjunto de dados indica que a linhagem ECV304 e de origem endotelial
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2003. 120 p.