Imunoterapia Anti-HIV baseada em células dendríticas: análise fenotípica e resposta imune celular pós vacinal
Data
2020-06-25
Autores
Baptista, Marcella Vassao De Almeida 
Orientadores
Diaz, Ricardo Sobhie
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
The obstacles to the sterilizing cure of HIV infection among patients with antiretrovirals are a proven residual viral replication of the same “sanctuaries” of HIV-1 and cell / viral latency. This work is part of a project that aims to try to eradicate HIV infection with the use of related restrictions. Our object of study was immunologically used in monocyte-derived dendritic cells (MDDCs), which adopted a promising strategy for the treatment of HIV-infected individuals, in an attempt to select infected cells in sanctuary sites Objective: To characterize the immunogenicity of the vaccine product by autonomous monocyte-derived dendritic cells (MDDCs), HIV-infected individuals, stimulated with autologous peptides. Methods: Ten HIV-infected individuals were immunized. Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were destroyed by leukapheresis. Monocytes were differentiated into DCs with the presence of IFN-α and GM-CSF. How DCs were stimulated with autologous peptides. Three doses of the vaccine were injected into the patients' axillary and inguinal subcutaneous regions every 2 weeks. Six hours before inoculation in patients, as MDDCs were activated by the addition of lipopolysaccharide (LPS). Phenotypic analyzes of the vaccine product were performed. HIV-specific T cell responses were assessed after 48 hours of incubation with autologous peptides. As patient samples were collected at the time of the first dose of the vaccine (day 0), at the time of the second dose of the vaccine (day 14, reflecting the impact of the first dose of the vaccine), at the time of the 3rd dose of the vaccine (day 28) , reflecting the impact of the 2nd vaccine dose) and 2 months after the 3rd vaccine dose (day 90). How the patient's cells were stimulated with autologous peptides used to sensitize as MDDCs, and IL2, TNF and IFN- were measured by flow cytometry on CD4 + T cells and CD8 + T cells. As for the control experiment, how the patient's cells were stimulated with S aureus type B enterotoxin (SEB) and brefaldine (BFA). Results: Compared to immature cells, as mature MoDCs show a profile with increased expression of HLA-DR, CD 86, CD80, CCR7, CD40 and CD83. Regarding HIV-specific T cell responses, there was a significant increase in interleukin measurements from day zero to day 14 and 14 to 28 in CD4 + T cells (IL-2 p = 0.008, TNF p = 0.0002 and IFN p = 0.005) and a significant increase in the measurements of IL2 (p = 0.002)and TNF (p = 0.003) from day zero to day 14 and 14 to 28 (Kruskal-Wallis). Conclusion: Collectively, the results shown by the MDDCs used in the vaccine have a mature profile and this intervention promotes an in vitro immune response in HIV-infected patients.
Os obstáculos para a cura esterilizante da infecção pelo HIV entre pacientes tratados com antirretrovirais são a replicação viral residual proveniente dos assim chamados “santuários” do HIV-1 e a latência celular/viral. Este trabalho faz parte de um projeto que tem como objetivo a tentativa de erradicação da infecção pelo HIV com o uso de intervenções associadas. Nosso objeto de estudo foi a imunoterapia baseada em células dendríticas derivadas de monócitos (MoDCs), que constitui uma estratégia promissora para o tratamento de indivíduos infectados pelo HIV, na tentativa da eliminação das células infectadas em santuários Objetivo: Caracterizar a imunogenicidade do produto vacinal constituído por células dendríticas derivadas de monócitos (MoDCs) autólogos provenientes de indivíduos infectados pelo HIV, estimuladas com peptídeos autólogos. Métodos: Dez indivíduos infectados pelo HIV foram imunizados. As células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram obtidas por leucaférese. Os monócitos foram diferenciados em DCs na presença de IFN-α e GM-CSF. As DCs foram estimuladas com peptídeos autólogos. Três doses da vacina foram injetadas na região subcutânea axilar e inguinal dos pacientes a cada 2 semanas. Seis horas antes da inoculação nos pacientes, as MoDCs foram ativados pela adição de lipopolissacarídeo (LPS). Análises fenotípicas do produto da vacina foram realizadas. As respostas de células T específicas do HIV foram avaliadas após 48 horas de incubação com peptídeos autólogos. As amostras dos pacientes foram coletadas no momento da primeira dose da vacina (dia 0), no momento da 2ª dose da vacina (dia 14, refletindo o impacto da primeira dose da vacina), no momento da 3ª dose da vacina (dia 28) , refletindo o impacto da 2ª dose da vacina) e 2 meses após a 3ª dose da vacina (dia 90). As células do paciente foram estimuladas com peptídeos autólogos usados para sensibilizar as MoDCs, e IL2, TNF e IFN foram medidos por citometria de fluxo nas células T CD4 + e células T CD8 +. Quanto ao experimento de controle, as células do paciente foram estimuladas com enterotoxina do S aureus tipo B (SEB) e brefaldina (BFA). Resultados: Comparadas às células imaturas, as MoDCs maduras mostraram um perfil com uma expressão aumentada de HLA-DR, CD 86, CD80, CCR7, CD40 e CD83.Em relação às respostas de células T específicas para o HIV, houve um aumento significativo na medida das interleucinas do dia zero ao dia 14 e 14 a 28 nas células T CD4 + (IL-2 p = 0,008, TNF p = 0,0002 e IFN p = 0,005) e um aumento significativo nas medições de IL2 (p = 0,002) e TNF (p = 0,003) do dia zero ao dia 14 e 14 ao 28 (Kruskal-Wallis). Conclusão: Coletivamente, os resultados mostraram que os MDDCs usados na vacina têm um perfil maduro e essa intervenção promoveu resposta imune in vitro em pacientes infectados pelo HIV.
Os obstáculos para a cura esterilizante da infecção pelo HIV entre pacientes tratados com antirretrovirais são a replicação viral residual proveniente dos assim chamados “santuários” do HIV-1 e a latência celular/viral. Este trabalho faz parte de um projeto que tem como objetivo a tentativa de erradicação da infecção pelo HIV com o uso de intervenções associadas. Nosso objeto de estudo foi a imunoterapia baseada em células dendríticas derivadas de monócitos (MoDCs), que constitui uma estratégia promissora para o tratamento de indivíduos infectados pelo HIV, na tentativa da eliminação das células infectadas em santuários Objetivo: Caracterizar a imunogenicidade do produto vacinal constituído por células dendríticas derivadas de monócitos (MoDCs) autólogos provenientes de indivíduos infectados pelo HIV, estimuladas com peptídeos autólogos. Métodos: Dez indivíduos infectados pelo HIV foram imunizados. As células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) foram obtidas por leucaférese. Os monócitos foram diferenciados em DCs na presença de IFN-α e GM-CSF. As DCs foram estimuladas com peptídeos autólogos. Três doses da vacina foram injetadas na região subcutânea axilar e inguinal dos pacientes a cada 2 semanas. Seis horas antes da inoculação nos pacientes, as MoDCs foram ativados pela adição de lipopolissacarídeo (LPS). Análises fenotípicas do produto da vacina foram realizadas. As respostas de células T específicas do HIV foram avaliadas após 48 horas de incubação com peptídeos autólogos. As amostras dos pacientes foram coletadas no momento da primeira dose da vacina (dia 0), no momento da 2ª dose da vacina (dia 14, refletindo o impacto da primeira dose da vacina), no momento da 3ª dose da vacina (dia 28) , refletindo o impacto da 2ª dose da vacina) e 2 meses após a 3ª dose da vacina (dia 90). As células do paciente foram estimuladas com peptídeos autólogos usados para sensibilizar as MoDCs, e IL2, TNF e IFN foram medidos por citometria de fluxo nas células T CD4 + e células T CD8 +. Quanto ao experimento de controle, as células do paciente foram estimuladas com enterotoxina do S aureus tipo B (SEB) e brefaldina (BFA). Resultados: Comparadas às células imaturas, as MoDCs maduras mostraram um perfil com uma expressão aumentada de HLA-DR, CD 86, CD80, CCR7, CD40 e CD83.Em relação às respostas de células T específicas para o HIV, houve um aumento significativo na medida das interleucinas do dia zero ao dia 14 e 14 a 28 nas células T CD4 + (IL-2 p = 0,008, TNF p = 0,0002 e IFN p = 0,005) e um aumento significativo nas medições de IL2 (p = 0,002) e TNF (p = 0,003) do dia zero ao dia 14 e 14 ao 28 (Kruskal-Wallis). Conclusão: Coletivamente, os resultados mostraram que os MDDCs usados na vacina têm um perfil maduro e essa intervenção promoveu resposta imune in vitro em pacientes infectados pelo HIV.