Efeito biológico de peptídeos derivados da proteína Anexina A1 em modelos de inflamação in vivo e in vitro
| dc.contributor.advisor | Gil, Cristiane Damas [UNIFESP] | |
| dc.contributor.advisorLattes | http://lattes.cnpq.br/6047408996026135 | |
| dc.contributor.author | Moura, Izabella Lice [UNIFESP] | |
| dc.contributor.authorLattes | http://lattes.cnpq.br/7418319239427910 | |
| dc.coverage.spatial | São Paulo | |
| dc.date.accessioned | 2024-10-17T15:17:19Z | |
| dc.date.available | 2024-10-17T15:17:19Z | |
| dc.date.issued | 2024-08-28 | |
| dc.description.abstract | Objetivo: Avaliar o efeito biológico dos peptídes Ac9-12 e Ac2-26 derivados da proteína anexina A1 (AnxA1) em modelos de inflamação in vitro e in vivo. Na primeira etapa do estudo exploramos os efeitos dos tratamentos farmacológicos utilizando o Ac2-26, o tetrapeptídeo Ac9-12 e pentapeptídeo WKYMV no modelo experimental de peritonite aguda induzida por carragenina em camundongos, bem como seus efeitos em macrófagos murinos ativados por lipopolissacarídeo (LPS). Na segunda etapa, avaliamos o padrão de expressão da AnxA1, dos receptores FPRs e NLRP3 em biópsias de intestinos afetados pela doença de Crohn (DC) e saudáveis, bem como o efeito do tratamento com o peptídeo Ac2-26 em células epiteliais estimuladas com TNFα. Métodos: A peritonite foi induzida em camundongos C57BL/6 machos por meio da injeção intraperitoneal de 1 mL de solução de carragenina a 3% ou solução salina (controle). Alguns animais receberam pré ou pós-tratamento com os peptídeos Ac9-12 e WKYMV, associados ou não com os antagonistas dos receptores para peptídeos formilados (FPRs) - Boc2 e WRW4. In vitro, o efeito dos peptídeos Ac2-26, Ac9-12 e WKYMV, associado ou não com os antagonistas Boc2 e WRW4, foi avaliado em macrófagos (linhagem RAW 264.7) ativados por LPS (1 µg/mL). Para o segundo estudo, a expressão dos RNAm e proteica da ANXA1, FPRs e inflamassoma NLRP3 foi avaliada por transcriptoma (GSE179285) e imuno-histoquímica de íleo e colo afetados pela DC e saudáveis. In vitro, o efeito da administração do peptídeo Ac2-26 (2 ng/mL, 25 ng/mL e 50 ng/mL) foi avaliado nas células epiteliais intestinais Caco-2 ativadas pelo TNF-α (100 ng/mL). Resultados: Os pré-tratamentos com Ac9-12 e WKYMV reduziram o influxo de leucócitos para a cavidade peritoneal, principalmente neutrófilos e monócitos, e a liberação de IL-1β. A adição do antagonista de Fpr2 WRW4 reverteu apenas as ações anti-inflamatórias do WKYMV. In vitro, a administração de Boc2 e WRW4 reverteu os efeitos de Ac9-12 e WKYMV, respectivamente, na produção de IL-6 por macrófagos estimulados por LPS. Esses efeitos biológicos dos peptídeos foram regulados de forma diferente pelas vias de sinalização ERK e p38. A análise lipidômica evidenciou que o Ac9-12 e o WKYMV alteraram o perfil lipídico intracelular de macrófagos estimulados por LPS, revelando um aumento na concentração de vários glicerofosfolipídios, sugerindo a regulação de vias inflamatórias desencadeadas por LPS. No segundo estudo, a análise do transcriptoma revelou níveis elevados dos transcritos de ANXA1, FPR1, FPR2 e NLRP3 em segmentos inflamados com DC em comparação aos controles. A imunohistoquímica confirmou esses achados, mostrando forte imunorreatividade para ANXA1, FPR2 e NLRP3 em amostras com DC, particularmente no epitélio intestinal e no infiltrado inflamatório. In vitro, a ANXA1 e o NLRP3 foram co-expressos em células Caco-2 estimuladas com TNF-α. O peptídeo Ac2-26 a 2 ng/mL, aumentou significativamente os níveis de caspase-1 e IL-1β, indicando uma maior ativação do inflamassoma NLRP3. O Ac2-26 também reduziu a produção de ROS e preservou a integridade epitelial ao aumentar a expressão de ocludina e caderina. Conclusão: Os peptídeos derivados da AnxA1, como Ac9-12 e Ac2-26, possuem propriedades antiinflamatórias promissoras, atuando em diferentes vias de sinalização e potencialmente oferecendo novas abordagens terapêuticas para doenças inflamatórias, como a peritonite aguda e a DC. | pt_BR |
| dc.description.abstract | Aim: To evaluate the biological effect of the Ac9-12 and Ac2-26 peptides derived from annexin A1 protein (AnxA1) in in vitro and in vivo inflammation models. In the first phase of the study, we explored the effects of pharmacological treatments using Ac2- 26, the tetrapeptide Ac9-12, and the pentapeptide WKYMV in an experimental model of carrageenan-induced acute peritonitis in mice, as well as their effects on murine macrophages activated by lipopolysaccharide (LPS). In the second phase, we evaluated the expression pattern of AnxA1, FPRs, and NLRP3 in biopsies of intestines affected by Crohn's disease (CD) and healthy controls, as well as the effect of treatment with the Ac2-26 peptide in epithelial cells stimulated with TNF-α. Methods: Peritonitis was induced in male C57BL/6 mice by intraperitoneal injection of 1 mL of 3% carrageenan solution or saline solution (control). Some animals received pre- or posttreatment with the Ac9-12 and WKYMV peptides, with or without the antagonists of formyl peptide receptors (FPRs) - Boc2 and WRW4. In vitro, the effect of the Ac2-26, Ac9-12, and WKYMV peptides, with or without the antagonists Boc2 and WRW4, was evaluated in LPS-activated macrophages (RAW 264.7 cell line) (1 µg/mL). For the second study, the mRNA and protein expression of ANXA1, FPRs, and the NLRP3 inflammasome was evaluated by transcriptomics (GSE179285) and immunohistochemistry of the ileum and colon affected by CD and healthy tissues. In vitro, the effect of Ac2-26 peptide administration (2 ng/mL, 25 ng/mL, and 50 ng/mL) was evaluated in Caco-2 intestinal epithelial cells activated by TNF-α (100 ng/mL). Results: Pre-treatments with Ac9-12 and WKYMV reduced leukocyte influx into the peritoneal cavity, particularly neutrophils and monocytes, and IL-1β release. The addition of the Fpr2 antagonist WRW4 only reversed the anti-inflammatory actions of WKYMV. In vitro, the administration of Boc2 and WRW4 reversed the effects of Ac9-12 and WKYMV, respectively, on IL-6 production by LPS-stimulated macrophages. The biological effects of these peptides were differentially regulated by ERK and p38 signaling pathways. Lipidomic analysis revealed that Ac9-12 and WKYMV altered the intracellular lipid profile of LPS-stimulated macrophages, showing an increase in the concentration of various glycerophospholipids, suggesting the regulation of LPS- triggered inflammatory pathways. In the second study, transcriptomic analysis revealed elevated levels of ANXA1, FPR1, FPR2, and NLRP3 transcripts in CD- inflamed segments compared to controls. Immunohistochemistry confirmed these findings, showing strong immunoreactivity for ANXA1, FPR2, and NLRP3 in CD samples, particularly in the intestinal epithelium and inflammatory infiltrate. In vitro, ANXA1 and NLRP3 were co-expressed in Caco-2 cells stimulated with TNF-α. The Ac2- 26 peptide at 2 ng/mL significantly increased caspase-1 and IL-1β levels, indicating greater activation of the NLRP3 inflammasome. Ac2-26 also reduced ROS production and preserved epithelial integrity by increasing occludin and cadherin expression. Conclusion: Peptides derived from AnxA1, such as Ac9-12 and Ac2-26, possess promising anti-inflammatory properties, acting through different signaling pathways and potentially offering new therapeutic approaches for inflammatory diseases such as acute peritonitis and Crohn's disease. | en |
| dc.description.sponsorship | Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) | |
| dc.description.sponsorship | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) | |
| dc.description.sponsorshipID | FAPESP: 2020/03565-2 | |
| dc.description.sponsorshipID | FAPESP: 2021/01541-1 | |
| dc.description.sponsorshipID | CAPES: 001 | |
| dc.emailadvisor.custom | cristiane.gil@unifesp.br | |
| dc.format.extent | 106 f. | |
| dc.identifier.citation | MOURA, Izabella Lice. Efeito biológico de peptídeos derivados da proteína Anexina A1 em modelos de inflamação in vivo e in vitro. 2024. 106 f. Tese (Doutorado em Biologia Estrutural e Funcional) – Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, 2024. | |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/11600/72280 | |
| dc.language | por | |
| dc.publisher | Universidade Federal de São Paulo | |
| dc.rights | info:eu-repo/semantics/openAccess | |
| dc.subject | Anexina A1 | pt_BR |
| dc.subject | Ac2-26 | pt_BR |
| dc.subject | Ac9-12 | pt_BR |
| dc.subject | Macrófago | pt_BR |
| dc.subject | Receptor para peptídeos formilados | pt_BR |
| dc.subject | Doença de Crohn | pt_BR |
| dc.title | Efeito biológico de peptídeos derivados da proteína Anexina A1 em modelos de inflamação in vivo e in vitro | pt_BR |
| dc.title.alternative | Biological effect of peptides derived from annexin A1 protein in vivo and in vitro models inflammation | en |
| dc.type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis | |
| unifesp.campus | Escola Paulista de Medicina (EPM) | |
| unifesp.graduateProgram | Biologia Estrutural e Funcional | |
| unifesp.knowledgeArea | BIOLOGIA CELULAR E MOLECULAR | |
| unifesp.researchArea | BIOLOGIA ESTRUTURAL E FUNCIONAL APLICADA |