Caracterização In Vitro Do Anticorpo Monoclonal Anti-Fgf2 3F12E7 São Paulo 2016
Data
2017-01-31
Autores
Braggion, Camila 
Orientadores
Moraes, Jane Zveiter De
Tipo
Dissertação de mestrado
Título da Revista
ISSN da Revista
Título de Volume
Resumo
The aim of the present study was to characterize the in vitro action of the anti-FGF2 3F12E7 monoclonal antibody (mAb), which showed relevant activity in vivo, reducing tumor vascular density and inhibiting B16F10 melanoma metastasis. We started ana-lyzing the tube formation in matrigel, using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), in the presence or absence of 3F12E7 mAb. The results showed signifi-cant inhibition of the process. By immunoenzymatic and immunofluorescence as-says, it was observed that 3F12E7 mAb binds specifically to HUVECs. It has been found that 3F12E7 mAb inhibited the binding of FGF2 to HUVEC and that anti-FGF2 receptors (FGFR1 and FGFR2) and anti-sindecan-4 interfered with the binding of 3F12E7 mAb to those cells. It was further noted that 3F12E7 mAb interfered in the MAPK signaling pathway by inhibition of the extracellular signal regulated protein ki-nase (phosphorylated ERK), and that such inhibition was specific and increased with-in the first hour of cell treatment. The PI3K signaling pathway, however, does not ap-pear to be influenced by the presence of 3F12E7 mAb, since no significant change in the nitric oxide concentration in the cell culture supernatants was observed. Taken together, the results presented herein suggest that the therapeutic effects of 3F12E7 mAb, observed in vivo, may be due to the inhibition of FGF2 intracellular signaling. The presence of 3F12E7 mAb in the tumor microenvironment seems to prevent the binding of FGF2 to its receptors and, consequently, the formation of the ternary com-plex, responsible for many activities of the angiogenic agent. In addition, our results support the idea of 3F12E7 mAb therapeutic value and still show its potential as a useful tool in tumor microenvironment studies.
O objetivo do presente trabalho foi caracterizar in vitro a ação do anticorpo monoclo-nal (mAb) anti-FGF2 3F12E7, que mostrou atividade relevante in vivo, reduzindo densidade vascular de tumor e inibindo metástase de melanoma B16F10. Foi feita, inicialmente, análise de formação de tubos em matrigel, em presença ou ausência do mAb 3F12E7, utilizando linhagem de células humanas de endotélio de veia umbi-lical (HUVEC). Os resultados mostraram inibição significativa do processo. Por en-saio imunoenzimático e por imunofluorescência, observou-se que o mAb 3F12E7 se liga de forma específica a HUVECs. Foi verificado, na sequência, que o mAb 3F12E7 inibe a ligação do FGF2 à HUVEC e que os anticorpos contra receptores de FGF2 (FGFR1 e FGFR2) – e anti-sindecan-4 interferem na ligação do mAb 3F12E7 a essas células. Foi observado ainda que o mAb 3F12E7 interfere na via de sinaliza-ção MAPK, por meio da inibição da proteína quinase regulada por sinal extracelular (ERK fosforilada), e que essa inibição é específica e aumentada na primeira hora de tratamento das células. Já a via de sinalização PI3K não parece sofrer interferência, uma vez que a presença do mAb 3F12E7 em cultura não provocou modificação sig-nificativa na concentração de óxido nítrico no sobrenadante de cultura das células. No conjunto, os resultados apresentados sugerem que os efeitos terapêuticos do mAb 3F12E7, observados in vivo, podem ser advindos da inibição da sinalização intracelular de FGF2. A presença do mAb 3F12E7 no microambiente tumoral parece impedir a ligação de FGF2 a seus receptores e, consequentemente, a formação do complexo ternário, responsável por muitas atividades do agente angiogênico. Além disso, nossos resultados suportam a ideia de que o mAb 3F12E7 pode ser de valor terapêutico e mostram ainda seu potencial como ferramenta útil em estudos do mi-croambiente tumoral.
O objetivo do presente trabalho foi caracterizar in vitro a ação do anticorpo monoclo-nal (mAb) anti-FGF2 3F12E7, que mostrou atividade relevante in vivo, reduzindo densidade vascular de tumor e inibindo metástase de melanoma B16F10. Foi feita, inicialmente, análise de formação de tubos em matrigel, em presença ou ausência do mAb 3F12E7, utilizando linhagem de células humanas de endotélio de veia umbi-lical (HUVEC). Os resultados mostraram inibição significativa do processo. Por en-saio imunoenzimático e por imunofluorescência, observou-se que o mAb 3F12E7 se liga de forma específica a HUVECs. Foi verificado, na sequência, que o mAb 3F12E7 inibe a ligação do FGF2 à HUVEC e que os anticorpos contra receptores de FGF2 (FGFR1 e FGFR2) – e anti-sindecan-4 interferem na ligação do mAb 3F12E7 a essas células. Foi observado ainda que o mAb 3F12E7 interfere na via de sinaliza-ção MAPK, por meio da inibição da proteína quinase regulada por sinal extracelular (ERK fosforilada), e que essa inibição é específica e aumentada na primeira hora de tratamento das células. Já a via de sinalização PI3K não parece sofrer interferência, uma vez que a presença do mAb 3F12E7 em cultura não provocou modificação sig-nificativa na concentração de óxido nítrico no sobrenadante de cultura das células. No conjunto, os resultados apresentados sugerem que os efeitos terapêuticos do mAb 3F12E7, observados in vivo, podem ser advindos da inibição da sinalização intracelular de FGF2. A presença do mAb 3F12E7 no microambiente tumoral parece impedir a ligação de FGF2 a seus receptores e, consequentemente, a formação do complexo ternário, responsável por muitas atividades do agente angiogênico. Além disso, nossos resultados suportam a ideia de que o mAb 3F12E7 pode ser de valor terapêutico e mostram ainda seu potencial como ferramenta útil em estudos do mi-croambiente tumoral.