Detecção de podocitúria em pacientes transplantados renais por PCR em tempo real: associação com características clínicas e histopatológicas
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Data
2018-11-28
Autores
Andrade, João Marcelo Medeiros de [UNIFESP]
Orientadores
Casarini, Dulce Elena [UNIFESP]
Tipo
Tese de doutorado
Título da Revista
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Resumo
Podocyturia has been identified as a prognostic factor in glomerulopathies, it is associated with histological findings characterized as high probability of progression to end stage renal disease. The role of podocyturia in kidney transplantation is unknown. The aim of this study was to evaluate the association between podocyturia and clinical and histological findings of kidney transplanted patients. This is a crosssectional, exploratory and translational study developed at the Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP) and at the Translational Research Laboratory A. C. Hart. The following study groups were established according to inclusion and exclusion criteria: renal transplant patients (PTR, n=152), aged between 18 and 70 years, who underwent protocol biopsies at 3 months (PTR3m, n=98) and at 24 months (PTR24m, n=54); negative control volunteers (PCN, n=15) composed by healthy volunteers and a positive control group (PCP, n=15) formed by pregnant women with preeclampsia according to the criteria of the International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP), used for polymerase chain reaction (qPCR) validation. Podocyturia was determined by analyzing the messenger RNA (RNAm) expression in the urinary sediment of 5 podocyte-linked genes: NPHS1 (nephrin), NPHS2 (podocin), ACTN4 (alpha-actinin 4), PODXL (podocalyxin) and SYNPO2 (synaptopodin). Our results confirm that gene amplification occurs for ACTN4, SYNPO2, PODXL, NPHS1 and NPHS2 in 151 (99,34%), 151 (99,34%), 93 (61,18%), 81 (53,2%), 76 (50,0%) patients, respectively. The 5 genes expression was increased in the PTR group, compared to the PCN group, NPHS1 8,96x
(p<0.0001), NPHS2 9,36x (p<0.0001), ACTN4 8,79x (p<0.0001), PODXL 8,61x (p <0.0001) and SYNPO2 9,12x(p <0.0001). There was no association between gene expression levels and R Alb/cr levels, as well as renal function. The correlation of NPHS2 gene expression levels with R Alb/cr was significant (p=0,003; r=0.38). No significant relationship was found between protocol biopsy findings at 3 months and 24 months with urinary podocytes gene expression. This study shows that there is a higher podocyte urinary loss in kidney transplant patients and that qPCR is a good method to determine podocytes genes expression in urine. The NPHS2 gene expression levels correlate with R Alb/cr levels. However, the analyzed genes cannot be considered as predictive biomarker of active glomerular disease.
A podocitúria tem sido apontada como fator prognóstico nas glomerulopatias, estando associada a tipos histológicos que se caracterizam como de alta probabilidade de progressão para doença renal em estágio final. O valor dessa associação no transplante renal é desconhecido. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre a podocitúria e os achados clínicos e histopatológicos de biópsias de pacientes transplantados renais. É um estudo do tipo corte transversal, exploratório e translacional realizado na unidade de transplante renal e no Laboratório de Pesquisa Translacional A. C. Hart, do Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP), no período de junho de 2015 a maio de 2017. Foram constituídos os seguintes grupos de estudo considerando os critérios de inclusão e exclusão: pacientes transplantados renais (PTR, n=152), com idade entre 18 e 70 anos, que realizaram biópsias protocolares aos 3 meses (PTR3m, n=98) e aos 24 meses (PTR24m, n=54); voluntários saudáveis, não transplantados renais, sem comorbidades, considerados como grupo controle negativo (PCN, n=15), e pacientes grávidas portadoras de pré-eclâmpsia segundo os critérios do International Institute for the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP), sendo esse grupo criado para validação da técnica de reação em cadeia da polimerase (qPCR) e denominado grupo controle positivo (PCP, n=30). A podocitúria foi determinada através da análise da expressão de RNA mensageiro (RNAm) no sedimento urinário de 5 genes ligados ao podócito: NPHS1 (nefrina), NPHS2 (podocina), ACTN4 (alfa-actinina 4), PODXL (podocalixina) e SYNPO2 (sinaptopodina). Os resultados demonstraram que houve amplificação no sedimento urinário dos genes ACTN4, SYNPO2, PODXL, NPHS1 e NPHS2 em 151 (99,34%), 151 (99,34%), 93 (61,18%), 81 (53,2%), 76 (50,0%) pacientes transplantados renais, respectivamente. A expressão dos cinco genes foi aumentada no grupo PTR em relação ao grupo PCN, sendo: NPHS1 8,96x (p<0,0001), NPHS2 9,36x (p<0,0001), ACTN4 8,79x (p<0,0001), PODXL 8,61x (p<0,0001), SYNPO2 9,12x (p<0,0001). Foi observada correlação dos níveis de expressão do gene NPHS2 com os níveis de R Alb/cr (p=0,003; r=0,38). Não foi observada associação entre o aumento da podocitúria em pacientes transplantados renais e os achados de biópsias protocolares aos 3 meses e aos 24 meses, níveis de R Alb/cr e função renal. Este estudo mostrou que existe uma perda de podócitos acentuada na urina de pacientes transplantados renais e que os níveis de expressão do gene NPHS2 correlacionou-se com os níveis de R Alb/cr. Foi possível realizar a análise da expressão de genes de podócitos na urina pela técnica do qPCR, porém os genes avaliados neste estudo não foram considerados biomarcadores preditivos de doença glomerular em atividade em pacientes transplantados renais.
A podocitúria tem sido apontada como fator prognóstico nas glomerulopatias, estando associada a tipos histológicos que se caracterizam como de alta probabilidade de progressão para doença renal em estágio final. O valor dessa associação no transplante renal é desconhecido. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar a associação entre a podocitúria e os achados clínicos e histopatológicos de biópsias de pacientes transplantados renais. É um estudo do tipo corte transversal, exploratório e translacional realizado na unidade de transplante renal e no Laboratório de Pesquisa Translacional A. C. Hart, do Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP), no período de junho de 2015 a maio de 2017. Foram constituídos os seguintes grupos de estudo considerando os critérios de inclusão e exclusão: pacientes transplantados renais (PTR, n=152), com idade entre 18 e 70 anos, que realizaram biópsias protocolares aos 3 meses (PTR3m, n=98) e aos 24 meses (PTR24m, n=54); voluntários saudáveis, não transplantados renais, sem comorbidades, considerados como grupo controle negativo (PCN, n=15), e pacientes grávidas portadoras de pré-eclâmpsia segundo os critérios do International Institute for the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP), sendo esse grupo criado para validação da técnica de reação em cadeia da polimerase (qPCR) e denominado grupo controle positivo (PCP, n=30). A podocitúria foi determinada através da análise da expressão de RNA mensageiro (RNAm) no sedimento urinário de 5 genes ligados ao podócito: NPHS1 (nefrina), NPHS2 (podocina), ACTN4 (alfa-actinina 4), PODXL (podocalixina) e SYNPO2 (sinaptopodina). Os resultados demonstraram que houve amplificação no sedimento urinário dos genes ACTN4, SYNPO2, PODXL, NPHS1 e NPHS2 em 151 (99,34%), 151 (99,34%), 93 (61,18%), 81 (53,2%), 76 (50,0%) pacientes transplantados renais, respectivamente. A expressão dos cinco genes foi aumentada no grupo PTR em relação ao grupo PCN, sendo: NPHS1 8,96x (p<0,0001), NPHS2 9,36x (p<0,0001), ACTN4 8,79x (p<0,0001), PODXL 8,61x (p<0,0001), SYNPO2 9,12x (p<0,0001). Foi observada correlação dos níveis de expressão do gene NPHS2 com os níveis de R Alb/cr (p=0,003; r=0,38). Não foi observada associação entre o aumento da podocitúria em pacientes transplantados renais e os achados de biópsias protocolares aos 3 meses e aos 24 meses, níveis de R Alb/cr e função renal. Este estudo mostrou que existe uma perda de podócitos acentuada na urina de pacientes transplantados renais e que os níveis de expressão do gene NPHS2 correlacionou-se com os níveis de R Alb/cr. Foi possível realizar a análise da expressão de genes de podócitos na urina pela técnica do qPCR, porém os genes avaliados neste estudo não foram considerados biomarcadores preditivos de doença glomerular em atividade em pacientes transplantados renais.