Detecção do Paracoccidioides brasiliensis por técnica de PCR em biópsias de pacientes com paracoccidioidomicose
Data
2003
Autores
Ricci, Giannina 
Orientadores
Franco, Marcello Fabiano de
Tipo
Dissertação de mestrado
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Resumo
A Paracoccidioidomicose (PCM) e micose sistemica profunda cujo agente etiologico e um fungo termodimorfico, Paracoccidioides brasifensis. E doenca grave, por vezes fatal, de diagnostico precoce dificil e que pode permanecer latente por ate 40 anos. O objetivo foi desenvolver metodo biomolecular em biopsias emblocadas em parafina para a deteccao do P. brasifensis por tecnica de PCR utilizando primers baseados no gene da gp43 e confrontar os resultados com parametros morfologicos da lesao: padrao do granuloma (compacto ou frouxo), quantidade e viabilidade dos fungos. Foram estudadas 107 biopsias fixadas em formalina 10 por cento e incluidas em parafina (tegumento, linfonodo, pulmao, lingua). A avaliacao histopatologica foi realizada em laminas coradas pela HE e Grocott. No estudo molecular, utilizou-se a tecnica de PEP/Nested/PCR, apos extracao do DNA, As reacoes de PCR demonstraram presenca de DNA do P. brasiliensis em 29,9 por cento das amostras. Observou-se que as amostras que continham maior quantidade de fungos, com aspecto viavel, tiveram resultado de PCR positiva. Mas ainda, o teste Qui-Quadrado indicou que houve associacao entre quantidade e viabilidade dos fungos e PCR. Verificou-se que 39,3 por cento dos granulomas eram do tipo compacto e 60,7 por cento, do tipo frouxo. O Teste QuiQuadrado revelou que nao houve associacao entre o tipo de granuloma e a positividade da PCR. O sequenciamento automatizado de DNA dos fragmentos de PCR revelou diferenca na sequencia genica entre os fungos de granuloma. Os resultados devem ser considerados no contexto: a) as amostras foram fixadas em formalina 10 por cento, sem controle de pH; b) foram utilizados primers baseados no gene da gp43, cujo polimorfismo pode ter impedido a amplificacao de algumas amostras. Como resultado preliminar, ressalta-se que a tecnica de sequenciamento revelou diferenca entre os fungos causadores dos dois tipos de granuloma. Finalmente, concluiu-se que a quantidade e a viabilidade dos fungos presentes nas amostras influenciam o resultado final na PCR
Descrição
Citação
São Paulo: [s.n.], 2003. 84 p.