Identificação química e avaliação do potencial antitumoral dos metabólitos especiais de guarea macrophylla ssp tuberculata (meliaceae)

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dc.contributor.advisorLago, João Henrique Ghilardi [UNIFESP]pt
dc.contributor.authorConserva, Geanne Alexsandra Alves [UNIFESP]
dc.contributor.institutionUniversidade Federal de São Paulo (UNIFESP)pt
dc.date.accessioned2018-07-27T15:51:03Z
dc.date.available2018-07-27T15:51:03Z
dc.date.issued2016-08-24
dc.description.abstractCurrently, several researches in phytochemical screening are associated with the evaluation of biological activities, aiming the isolation and structural characterization of bioactive compounds. In this context, the species Guarea macrophylla ssp. tuberculata (Meliaceae), unknown in biological point of view, had the ethanol extract of leaves subjected to evaluation of in vitro cytotoxic activity against the B16F10-Nex2 cell lineage. The bioactive extract was subjected to liquid-liquid partition, where the phases in Hexane, EtOAc and DCM were obtained, being the first, the most active (30% cell viability 100 ?g/ml). Aiming the identification of active compounds, the hexane phase of ethanol extract of G. macrophylla was subjected to several chromatographic fractionation techniques fully bio-guided (silica gel 60, Sephadex LH-20, Florisil® and HPLC), allowing then, isolation and structural characterization of two triterpene with cycloartane skeleton: cycloart-23E-ene-3?, 25-diol (I), 23,24-dihydroxy-cicloart-25-en-3-one (II), and two pimarane diterpenes: isopimara -7,15-diene-2?, 3?-diol (III) and isopimara-7,15-diene, 3?-ol (IV). Compounds (II) and (III) are considered unprecedented in the literature, which structures were identified/elucidated by spectroscopic and spectrometric analysis, such as nuclear magnetic resonance (NMR), Infrared (IR), circular dichroism (CD) and spectrometry and high and low resolution mass spectrometry (MS). Isolated compounds were evaluated for their cytotoxic potential by MTT colorimetric quantitative assay against murine melanoma cell lines (B16F10-Nex2) and, against several human tumoral cell lines: human melanoma (A2058), breast adenocarcinoma (MCF7), leukemia (HL-60) and human cervical carcinoma (HeLa), presenting significative IC50 values, ranging from 8,0 ± 0,2 and 94±3.4 µg/mL. But when comparing the IC50 values obtained with the values of the positive control (cisplatin), it can be inferred that the compounds I, II and III performed better just to MCF7 line. Depth studies of cell death mechanism (morphological study, fragmentation and condensation of DNA and measurement of mitochondrial membrane potential) showed that the tumoral cell line, B16F10-Nex2 (murine melanoma), chosen for ongoing work, when treated with I, actives the programmed cell death mechanism (apoptosis), involving the mitochondria as the main affected organelle.en
dc.description.abstractAtualmente, diversas linhas de pesquisas em prospecção fitoquímica estão associadas à avaliação de atividades biológicas, visando o isolamento e caracterização estrutural de compostos bioativos. Nesse contexto, a espécie Guarea macrophylla ssp. tuberculata (Meliaceae) desconhecida do ponto de vista biológico, teve o extrato etanólico de suas folhas submetido á ensaios de avaliação da atividade citotóxica in vitro, frente à linhagem celular melanoma murino (B16F10-Nex2). Uma vez que esse extrato mostrou bioatividade, o mesmo foi submetido à partição líquido-líquido, de onde foram obtidas as fases em hexano (Hex), diclorometano (DCM) e acetato de etila (AcOEt), sendo a primeira, a única que apresentou atividade (30% de viabilidade celular na dosagem de 100µg/mL). Visando identificar os compostos ativos, a fase hexânica do extrato etanólico das folhas de G. macrophylla foi submetida a diversas técnicas de fracionamento cromatográfico totalmente biomonitoradas (Gel de sílica 60, Sephadex LH-20, Florisil® e CLAE), permitindo o isolamento e caracterização estrutural de dois triterpenos com esqueleto cicloartânico: cicloart-23E-eno-3?,25-diol (I), 23,24-diidroxi-cicloart-25-en-3-ona (II); e dois diterpenos do tipo pimarânicos: isopimara-7,15-dien-2?,3?-diol (III) e isopimara-7,15-dien-3?-ol (IV). Os compostos II e III, considerados inéditos na literatura, tiveram suas estruturas elucidadas por análises de Ressonância Magnética Nuclear (RMN), Espectrometria de Massas (EM) de alta e baixa resolução, Dicroísmo Circular (DC) e Espectrometria de Infravermelho (IV). Os compostos isolados foram avaliados quanto ao seu potencial citotóxico por ensaio quantitativo colorimétrico MTT, frente à linhagem celular de melanoma murino (B16F10-Nex2) e também frente às linhagens celulares tumorais humanas: melanoma humano (A2058), adenocarcinoma de mama (MCF7), leucemia (HL-60) e carcinoma cervical humano (HeLa), apresentando valores de CI50 entre 8,0 ± 0,2 e 94,0 ± 3.4 µg/mL. Porém a comparação dos valores do CI50 com os obtidos para o controle positivo (cisplatina), mostrou que os compostos I, II e III apresentaram melhor desempenho apenas frente à linhagem MCF7. Estudos mais específicos sobre o mecanismo de morte celular (estudo morfológico, fragmentação e condensação do DNA, e medição do potencial da membrana mitocondrial) mostraram que, na linhagem celular tumoral B16F10-Nex2, escolhida para dar andamento a este trabalho, o tratamento com o composto I, ativa o mecanismo de morte celular programada (apoptose), sendo a mitocôndria a principal organela afetada.pt
dc.description.sourceDados abertos - Sucupira - Teses e dissertações (2013 a 2016)
dc.description.sponsorshipFundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)pt
dc.description.sponsorshipIDFAPESP: 2014/08961-2pt
dc.format.extent179 p.
dc.identifierhttps://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4060092pt
dc.identifier.citationCONSERVA, Geanne Alexsandra Alves. Identificação química e avaliação do potencial antitumoral dos metabólitos especiais de guarea macrophylla ssp tuberculata (meliaceae). 2016. 179 f. Dissertação (Mestrado) - Instituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), Diadema, 2016.
dc.identifier.file2016-0068.pdf
dc.identifier.urihttp://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46909
dc.language.isopor
dc.publisherUniversidade Federal de São Paulo
dc.rightsinfo:eu-repo/semantics/openAccess
dc.subjectGuarea macrophyllaen
dc.subjectMeliaceaeen
dc.subjectCycloartaneen
dc.subjectPimaranesen
dc.subjectCytotoxic activityen
dc.subjectIntrinsic apoptosisen
dc.subjectGuarea macrophyllapt
dc.subjectMeliaceaept
dc.subjectCicloartanospt
dc.subjectPimaranospt
dc.subjectAtividade citotóxica e apoptose via intrínsecapt
dc.titleIdentificação química e avaliação do potencial antitumoral dos metabólitos especiais de guarea macrophylla ssp tuberculata (meliaceae)pt
dc.typeinfo:eu-repo/semantics/masterThesis
unifesp.campusInstituto de Ciências Ambientais, Químicas e Farmacêuticas (ICAQF)pt
unifesp.graduateProgramBiologia Químicapt
unifesp.knowledgeAreaBiologia Químicapt
unifesp.researchAreaBiologia Química em Modelos Celularespt
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